小鼠生精周期表皮生长因子受体在睾丸曲细精管的分布*
作者：何为民 陈奕权 王世鄂 高学勇 周瑞祥
单位：福建医科大学组织胚胎学教研室，福建省生殖医学中心(福州 350004)
关键词：睾丸；表皮生长因子受体；生精细胞；支持细胞；小鼠
福建医科大学学报990403
目的 观察生精周期不同阶段中表皮生长因子受体(EGFR)在小鼠曲细精管的分布规律,以进一步理解EGFR在生精过程中的意义。 方法 通过糖原及多糖显色反应确定曲细精管的生精周期，采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶免疫组化技术观察EGFR在相应曲细精管上皮的分布。 结果 曲细精管部分支持细胞和管周细胞呈EGFR阳性反应。Ⅶ～Ⅸ早期部分精原细胞、细线期精母细胞的细胞核呈EGFR阳性反应。Ⅹ～Ⅺ期多数粗线期精母细胞、双线期精母细胞，Ⅻ期终变期精母细胞、次级精母细胞和1～4阶段(Ⅰ～Ⅳ期)精子细胞胞核旁的胞质内出现EGFR阳性反应颗粒区。9阶段(Ⅸ期)和15阶段(Ⅴ～Ⅵ期)精子细胞在顶体区出现EGFR阳性反应区。 结论 EGFR在曲细精管上皮的分布与生精周期及精子形成有密切关系。
, 百拇医药
Distribution of Epidermal Growth Factor Receptor
during the Cycle of the Seminiferous Epithelium in Mice
He Weimin, Chen Yiquan, Wang Sie, et al
(Department of Histology and Embryology,Fujian Medical University,Fujian Province Reproductive Medicine Center, Fuzhou, 350004)
Objective To investigate the distribution of epidermal growth factor receptor(EGFR) during the cycle of seminiferous epithelium in order to further understand its significance for spermatogenesis. Methods After determining the specific stage of the cycle of seminiferous epithelium through periodic acid Schiff's reaction,the distribution of EGFR in seminiferous epithelium was observed by streptavidin peroxidase immunohistochemical method. Results EGFR immunostaining expressed within Sertoli cells and peritubular cells. In spermatogonias and leptotenes of Ⅶ～Ⅸ stage,EGFR immunostainings were limited to nucleuses. In each positive pachytene and diplotene of stage Ⅹ～Ⅺ,diakinesis and secondary spermatocye of stage Ⅻ and stage 1～4 round spermatic of stage Ⅰ～Ⅳ,a granular immunostaining occurred near the nucleus. In stage 9 and stage 15 spermatids of stage Ⅸ and Ⅴ～Ⅵ,the positive immunostaining area looked like granule or crescent in acrosomes. Conclusion The distribution of EGFR is closely related with the cycle of seminiferous epithelium and spermiogenesis.
, 百拇医药
Key words testis; epidermal growth factor receptor; germ cell; Sertoli cell; mice
表皮生长因子(EGF)在精子发生中起重要作用[1]。EGF通过与靶细胞的特异表皮生长因子受体(EGFR)结合而发挥其生理学作用。各种动物的精子发生有自己特定的生精周期。近年来，有关EGFR在睾丸的分布已有文献报道[2,3]，研究多侧重于细胞定位,其与生精周期的关系尚未见到详细报道。本文利用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶免疫组化技术(SP)结合糖原及多糖高碘酸-雪夫反应(PAS反应)，观察EGFR在小鼠睾丸生精周期内分布，为进一步探讨EGFR在精子发生的不同阶段可能的调节机制打下基础。
1 材料和方法
1.1 试剂
, http://www.100md.com 表皮生长因子受体一抗，免疫组化试剂盒均购自Santa Cruz公司。碱性复红、盐酸、偏重亚硫酸钠、高碘酸购自上海生物化学公司。
1.2 实验设计
选用12～13周龄清洁级ICR雄性性成熟小白鼠(购于中科院上海实验动物中心)12只，体重35～42 g。处死动物后取左侧睾丸,入改良Bouin液固定18 h，常规梯度脱水透明浸蜡及石蜡包埋，睾丸5 μm连续切片；连续取三张切片，第一张EGFR的SP免疫组化染色，第二张PAS显色并苏木素复染，第三张行EGFR的SP免疫组化并苏木素复染。
1.3 免疫细胞化学方法
切片常规脱蜡经各级酒精入水，0.01 mol/L磷酸缓冲液(PBS)洗5 min，共3次。入0.03%过氧化氢，室温25 min，PBS洗。室温下羊血清封闭30 min后倾去。加兔抗EGFR，4℃孵育24 h。加二抗，室温2 h。加三抗，室温2 h。DAB显色5 min，水洗，脱水，透明，封固。分别用PBS、羊血清代替一抗作阴性对照。
, 百拇医药
1.4 糖原及多糖PAS反应
Schiff's试剂的配制 碱性复红0.2 g，1 mol/L盐酸10 ml，偏重亚硫酸钠1 g，蒸馏水100 ml。切片脱蜡后入蒸馏水，入0.5%高碘酸10 min，蒸馏水洗，经Schiff's试剂染色60 min，入亚硫酸液3次，每次1 min，蒸馏水洗后苏木素复染并脱水、透明、封固。
1.5 观察方法
观察第一、三张切片确证EGFR在曲细精管的细胞定位，从第二张切片确定EGFR阳性细胞所分布的曲细精管的生精周期的阶段。
2 结 果
EGFR分布于支持细胞的胞质内，在核上方最为明显，胞质呈浅棕色，如火焰状。小鼠生精周期可分12期，支持细胞在各期均表达EGFR，但以Ⅵ～Ⅶ期、Ⅸ～Ⅹ期最为明显(图1)。管周细胞反应阳性(图2)。曲细精管Ⅰ～Ⅵ期精原细胞、静止期精母细胞无阳性反应。曲细精管Ⅶ～Ⅸ早期精原细胞、静止期及细线期精母细胞位于曲细精管上皮基底层，其胞核呈阳性反应，色深，胞质阴性。Ⅹ～Ⅺ期细线期及偶线期精母细胞胞核呈阳性反应，色浅，胞质阴性。Ⅰ～Ⅵ期粗线期精母细胞无阳性反应，Ⅶ～Ⅸ期少量粗线期精母细胞、Ⅹ～Ⅺ期多数偶线期精母细胞、粗线期精母细胞及双线期精母细胞(图2,3)、Ⅻ期终变期精母细胞和次级精母细胞均呈阳性反应，表现为每个阳性精母细胞的细胞核旁的胞质内出现一个粗大的阳性颗粒区。 小鼠精子变形经过16阶段。1～4阶段(Ⅰ～Ⅳ期)精子细胞出现阳性反应，特点是每个阳性精子细胞胞核旁的胞质内出现一个细小的阳性颗粒区(图1,2,4)。5～8阶段(Ⅴ～Ⅷ期)、10～14阶段(Ⅹ～Ⅲ期)精子细胞无阳性反应。9阶段(Ⅸ期)精子细胞在顶体去区出现点状、短杆状或月牙形阳性反应带(图5)。15阶段(Ⅴ～Ⅵ期)精子聚集成簇，精子细胞头部一侧相当于顶体区出现狭长、深染棕色反应区(图6)。16阶段(Ⅶ～Ⅷ期)少数成熟精子出现类似15阶段的阳性反应。未加一抗的对照无阳性反应。
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图1 支持细胞呈EGFR阳性反应(↑),第4阶段精子细胞呈EGFR阳性反应(▲:阳性颗粒区),SP法并苏木素复染(×400)
图2 管周细胞呈EGFR阳性反应(↑),第2阶段精子细胞呈EGFR阳性反应(↑:阳性颗粒细小),粗线期精母细胞呈EGFR阳性反应(▲:阳性颗粒区粗大),×400
图3 粗线期精母细胞呈EGFR阳性反应(↑:阳性颗粒区),SP法并苏木素复染(×1000)
图4 第3阶段精子细胞呈EGFR阳性反应(↑:阳性颗粒区),SP法并苏木素复染(×1000)
图5 第3阶段精子细胞呈EGFR阳性反应(↑)×400
图6 第15阶段精子细胞呈EGFR阳性反应(↑)×400
, http://www.100md.com 3 讨 论
EGFR初步定位于睾丸曲细精管上皮的部分生精细胞和体细胞[2,3]，但是EGFR在曲细精管上皮的表达和生精周期的关系尚未阐明。本文采用连续切片，取一张切片作PAS反应和苏木素复染确定曲细精管所处的生精周期，又取相邻的另一张切片作SP免疫组化观察EGFR在曲细精管上皮的表达，能揭示不同生精周期中曲细精管上皮的EGFR分布规律。
3.1 EGFR在支持细胞和管周细胞的分布
EGF通过与靶细胞膜上的EGFR结合实现对靶器官的生理性调节作用。EGF对生精过程的作用已得到初步证实[1，4]。本研究以免疫组织化学方法显示在生精周期的不同阶段支持细胞不同程度的表达EGFR，而且在Ⅵ～Ⅶ期，Ⅸ～Ⅹ期表达最明显，推测EGFR的表达与成熟精子释放入曲细精管腔内(Ⅵ～Ⅶ期)及精子开始变形(Ⅸ～Ⅹ期)密切相关。本研究还发现管周细胞也分布EGFR，因此EGF可直接调节管周细胞的功能。Forestra[5]发现曲细精管损伤时支持细胞和管周细胞的EGFR表达增强。Mullaney[6]证实在大鼠睾丸发育过程中，EGFR基因在管周细胞表达非常显著，在支持细胞、粗线期精母细胞、圆形精子细胞呈低水平表达，本研究结果与之一致。
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3.2 EGFR在精子发生过程的分布
小鼠生精周期可分为12期；精子变形经过16阶段。在睾丸中的精子发生过程分为3个阶段：(1)精原细胞有丝分裂、增殖形成初级精母细胞；(2)初级精母细胞两次减数分裂形成圆形精子细胞；(3)圆形精子细胞变形为成熟精子。Linder[7]报道转铁蛋白受体和卵泡刺激素受体的mRNA含量与生精周期密切相关。本研究发现在Ⅶ～Ⅸ早期精原细胞、静止期精母细胞分布EGFR，推测EGF通过EGFR参与调节精原细胞有丝分裂形成初级精母细胞。不同阶段初级精母细胞包括静止期、细线期、偶线期、粗线期、双线期、终变期以及次级精母细胞均表达EGFR；不同阶段精子细胞均表达EGFR，推测EGF通过EGFR可直接调节精子生成的两次减数分裂和精子形成过程。文献报道体内的EGF水平下降后，睾丸内的各级生精细胞减少，这进一步证实了本文观点[1，4]。粗线期精母细胞分布在Ⅰ～Ⅹ期，但早期粗线期精母细胞(Ⅰ～Ⅵ期)无EGFR分布，中、晚期的粗线期精母细胞(Ⅶ～Ⅹ期)分布EGFR，提示EGFR的表达和粗线期精母细胞的成熟和进一步演变有关。
, http://www.100md.com
本研究表明，细线期精母细胞胞核分布EGFR，而粗线期、双线期与终变期精母细胞，次级精母细胞和1～4阶段的精子细胞，EGFR集中分布在核膜旁一个区域，类似于文献报道EGF分布在粗线期精母细胞的高尔基体区[8]。有学者发现EGFR与核内染色体相连，EGFR可通过直接诱导特殊核蛋白的磷酸化而发挥其生理功能，EGFR在生精细胞内发生受体内化和核转位可能是质膜信号和基因活化间的关键环节[9]。椭圆形的9阶段精子细胞的顶端，即将来形成顶体的区域分布EGFR；头部狭长的15阶段精子细胞一侧，即顶体所在区域分布EGFR，推测EGFR与精子顶体形成有关。
3.3 EGFR分布差异的影响因素
本研究结果与一些报道有所不同[2,3]，其原因可能与下列因素有关：(1)实验者采用的抗体的特异性和敏感性不同，如单抗或多抗；(2)抗体制备时选择EGFR的不同区域，如胞内区或胞外区；(3)EGFR和EGF结合形成的复合物在细胞内经过内质网、高尔基体、溶酶体系统加工，而不同功能细胞加工过程不一致，使不同细胞EGFR的表达有各自的特点；(4)动物种属的差异；(5)不同生精周期曲细精管上皮的支持细胞处于不同功能状态。因此，不同生精周期的支持细胞不同程度地表达EGFR。
, 百拇医药
*:福建省卫生厅青年基金资助课题(9624)
参考文献
1 Tsutsumi O,Kurachi H,Oka T. A physiological role of epidermal growth factor in male reproductive function. Science, 1986;233:975
2 许增禄,刘秉慈,任 庆. 表皮生长因子受体在小鼠睾丸内免疫组织化学定位. 中国科学院院报, 1993;15:330
3 Stubbs SC,Hargreave B,Habib FK. Localization and characterization of EGFR on human testicular tissue by biochemical and immunohistochemical techniques. J Endocrinol, 1990;125:485
, http://www.100md.com
4 安 劬, 李 曼, 温 冰. 表皮生长因子睾丸生精过程中的调节作用. 男科学杂志, 1991;5: 193
5 Foresta C,Caretto A,Varottto A, et al. Epidermal growth factor receptors(EGFR) localization in human testis. Archives Androl, 1991;27:17
6 Mullaney B,Skinner MK. Transforming growth factor-αand epidermal growth factor receptor gene expression and action during pubertal development of the seminiferous tubule. Molecul Endocrinol, 1992;6:2103
, 百拇医药
7 Linder CC,Heckert LL,Roberts KP,et al. Expression of receptors during the cycle of the seminiferous epithelium. Ann N Y Acad Sci, 1992;602:313
8 Radhakrishnan B,Oke BO,Papadopoulos B,et al. Characterization of epidermal growth factor in mouse testis. Endocrinol, 1992;131:3091
9 Holt SJ,Alexander B,Inman CB,et al. Epidermal growth factor induced tyrosine phosphorylation of nuclear proteins associated wtith translocation of epidermal growth factor receptor into the nucleus. Biochem Pharmacol, 1994;47:117
(收稿：1999-08-02 修回：1999-09-27), 百拇医药
单位：福建医科大学组织胚胎学教研室，福建省生殖医学中心(福州 350004)
关键词：睾丸；表皮生长因子受体；生精细胞；支持细胞；小鼠
福建医科大学学报990403
目的 观察生精周期不同阶段中表皮生长因子受体(EGFR)在小鼠曲细精管的分布规律,以进一步理解EGFR在生精过程中的意义。 方法 通过糖原及多糖显色反应确定曲细精管的生精周期，采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶免疫组化技术观察EGFR在相应曲细精管上皮的分布。 结果 曲细精管部分支持细胞和管周细胞呈EGFR阳性反应。Ⅶ～Ⅸ早期部分精原细胞、细线期精母细胞的细胞核呈EGFR阳性反应。Ⅹ～Ⅺ期多数粗线期精母细胞、双线期精母细胞，Ⅻ期终变期精母细胞、次级精母细胞和1～4阶段(Ⅰ～Ⅳ期)精子细胞胞核旁的胞质内出现EGFR阳性反应颗粒区。9阶段(Ⅸ期)和15阶段(Ⅴ～Ⅵ期)精子细胞在顶体区出现EGFR阳性反应区。 结论 EGFR在曲细精管上皮的分布与生精周期及精子形成有密切关系。
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Distribution of Epidermal Growth Factor Receptor
during the Cycle of the Seminiferous Epithelium in Mice
He Weimin, Chen Yiquan, Wang Sie, et al
(Department of Histology and Embryology,Fujian Medical University,Fujian Province Reproductive Medicine Center, Fuzhou, 350004)
Objective To investigate the distribution of epidermal growth factor receptor(EGFR) during the cycle of seminiferous epithelium in order to further understand its significance for spermatogenesis. Methods After determining the specific stage of the cycle of seminiferous epithelium through periodic acid Schiff's reaction,the distribution of EGFR in seminiferous epithelium was observed by streptavidin peroxidase immunohistochemical method. Results EGFR immunostaining expressed within Sertoli cells and peritubular cells. In spermatogonias and leptotenes of Ⅶ～Ⅸ stage,EGFR immunostainings were limited to nucleuses. In each positive pachytene and diplotene of stage Ⅹ～Ⅺ,diakinesis and secondary spermatocye of stage Ⅻ and stage 1～4 round spermatic of stage Ⅰ～Ⅳ,a granular immunostaining occurred near the nucleus. In stage 9 and stage 15 spermatids of stage Ⅸ and Ⅴ～Ⅵ,the positive immunostaining area looked like granule or crescent in acrosomes. Conclusion The distribution of EGFR is closely related with the cycle of seminiferous epithelium and spermiogenesis.
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Key words testis; epidermal growth factor receptor; germ cell; Sertoli cell; mice
表皮生长因子(EGF)在精子发生中起重要作用[1]。EGF通过与靶细胞的特异表皮生长因子受体(EGFR)结合而发挥其生理学作用。各种动物的精子发生有自己特定的生精周期。近年来，有关EGFR在睾丸的分布已有文献报道[2,3]，研究多侧重于细胞定位,其与生精周期的关系尚未见到详细报道。本文利用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶免疫组化技术(SP)结合糖原及多糖高碘酸-雪夫反应(PAS反应)，观察EGFR在小鼠睾丸生精周期内分布，为进一步探讨EGFR在精子发生的不同阶段可能的调节机制打下基础。
1 材料和方法
1.1 试剂
, http://www.100md.com 表皮生长因子受体一抗，免疫组化试剂盒均购自Santa Cruz公司。碱性复红、盐酸、偏重亚硫酸钠、高碘酸购自上海生物化学公司。
1.2 实验设计
选用12～13周龄清洁级ICR雄性性成熟小白鼠(购于中科院上海实验动物中心)12只，体重35～42 g。处死动物后取左侧睾丸,入改良Bouin液固定18 h，常规梯度脱水透明浸蜡及石蜡包埋，睾丸5 μm连续切片；连续取三张切片，第一张EGFR的SP免疫组化染色，第二张PAS显色并苏木素复染，第三张行EGFR的SP免疫组化并苏木素复染。
1.3 免疫细胞化学方法
切片常规脱蜡经各级酒精入水，0.01 mol/L磷酸缓冲液(PBS)洗5 min，共3次。入0.03%过氧化氢，室温25 min，PBS洗。室温下羊血清封闭30 min后倾去。加兔抗EGFR，4℃孵育24 h。加二抗，室温2 h。加三抗，室温2 h。DAB显色5 min，水洗，脱水，透明，封固。分别用PBS、羊血清代替一抗作阴性对照。
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1.4 糖原及多糖PAS反应
Schiff's试剂的配制 碱性复红0.2 g，1 mol/L盐酸10 ml，偏重亚硫酸钠1 g，蒸馏水100 ml。切片脱蜡后入蒸馏水，入0.5%高碘酸10 min，蒸馏水洗，经Schiff's试剂染色60 min，入亚硫酸液3次，每次1 min，蒸馏水洗后苏木素复染并脱水、透明、封固。
1.5 观察方法
观察第一、三张切片确证EGFR在曲细精管的细胞定位，从第二张切片确定EGFR阳性细胞所分布的曲细精管的生精周期的阶段。
2 结 果
EGFR分布于支持细胞的胞质内，在核上方最为明显，胞质呈浅棕色，如火焰状。小鼠生精周期可分12期，支持细胞在各期均表达EGFR，但以Ⅵ～Ⅶ期、Ⅸ～Ⅹ期最为明显(图1)。管周细胞反应阳性(图2)。曲细精管Ⅰ～Ⅵ期精原细胞、静止期精母细胞无阳性反应。曲细精管Ⅶ～Ⅸ早期精原细胞、静止期及细线期精母细胞位于曲细精管上皮基底层，其胞核呈阳性反应，色深，胞质阴性。Ⅹ～Ⅺ期细线期及偶线期精母细胞胞核呈阳性反应，色浅，胞质阴性。Ⅰ～Ⅵ期粗线期精母细胞无阳性反应，Ⅶ～Ⅸ期少量粗线期精母细胞、Ⅹ～Ⅺ期多数偶线期精母细胞、粗线期精母细胞及双线期精母细胞(图2,3)、Ⅻ期终变期精母细胞和次级精母细胞均呈阳性反应，表现为每个阳性精母细胞的细胞核旁的胞质内出现一个粗大的阳性颗粒区。 小鼠精子变形经过16阶段。1～4阶段(Ⅰ～Ⅳ期)精子细胞出现阳性反应，特点是每个阳性精子细胞胞核旁的胞质内出现一个细小的阳性颗粒区(图1,2,4)。5～8阶段(Ⅴ～Ⅷ期)、10～14阶段(Ⅹ～Ⅲ期)精子细胞无阳性反应。9阶段(Ⅸ期)精子细胞在顶体去区出现点状、短杆状或月牙形阳性反应带(图5)。15阶段(Ⅴ～Ⅵ期)精子聚集成簇，精子细胞头部一侧相当于顶体区出现狭长、深染棕色反应区(图6)。16阶段(Ⅶ～Ⅷ期)少数成熟精子出现类似15阶段的阳性反应。未加一抗的对照无阳性反应。
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图1 支持细胞呈EGFR阳性反应(↑),第4阶段精子细胞呈EGFR阳性反应(▲:阳性颗粒区),SP法并苏木素复染(×400)
图2 管周细胞呈EGFR阳性反应(↑),第2阶段精子细胞呈EGFR阳性反应(↑:阳性颗粒细小),粗线期精母细胞呈EGFR阳性反应(▲:阳性颗粒区粗大),×400
图3 粗线期精母细胞呈EGFR阳性反应(↑:阳性颗粒区),SP法并苏木素复染(×1000)
图4 第3阶段精子细胞呈EGFR阳性反应(↑:阳性颗粒区),SP法并苏木素复染(×1000)
图5 第3阶段精子细胞呈EGFR阳性反应(↑)×400
图6 第15阶段精子细胞呈EGFR阳性反应(↑)×400
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EGFR初步定位于睾丸曲细精管上皮的部分生精细胞和体细胞[2,3]，但是EGFR在曲细精管上皮的表达和生精周期的关系尚未阐明。本文采用连续切片，取一张切片作PAS反应和苏木素复染确定曲细精管所处的生精周期，又取相邻的另一张切片作SP免疫组化观察EGFR在曲细精管上皮的表达，能揭示不同生精周期中曲细精管上皮的EGFR分布规律。
3.1 EGFR在支持细胞和管周细胞的分布
EGF通过与靶细胞膜上的EGFR结合实现对靶器官的生理性调节作用。EGF对生精过程的作用已得到初步证实[1，4]。本研究以免疫组织化学方法显示在生精周期的不同阶段支持细胞不同程度的表达EGFR，而且在Ⅵ～Ⅶ期，Ⅸ～Ⅹ期表达最明显，推测EGFR的表达与成熟精子释放入曲细精管腔内(Ⅵ～Ⅶ期)及精子开始变形(Ⅸ～Ⅹ期)密切相关。本研究还发现管周细胞也分布EGFR，因此EGF可直接调节管周细胞的功能。Forestra[5]发现曲细精管损伤时支持细胞和管周细胞的EGFR表达增强。Mullaney[6]证实在大鼠睾丸发育过程中，EGFR基因在管周细胞表达非常显著，在支持细胞、粗线期精母细胞、圆形精子细胞呈低水平表达，本研究结果与之一致。
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3.2 EGFR在精子发生过程的分布
小鼠生精周期可分为12期；精子变形经过16阶段。在睾丸中的精子发生过程分为3个阶段：(1)精原细胞有丝分裂、增殖形成初级精母细胞；(2)初级精母细胞两次减数分裂形成圆形精子细胞；(3)圆形精子细胞变形为成熟精子。Linder[7]报道转铁蛋白受体和卵泡刺激素受体的mRNA含量与生精周期密切相关。本研究发现在Ⅶ～Ⅸ早期精原细胞、静止期精母细胞分布EGFR，推测EGF通过EGFR参与调节精原细胞有丝分裂形成初级精母细胞。不同阶段初级精母细胞包括静止期、细线期、偶线期、粗线期、双线期、终变期以及次级精母细胞均表达EGFR；不同阶段精子细胞均表达EGFR，推测EGF通过EGFR可直接调节精子生成的两次减数分裂和精子形成过程。文献报道体内的EGF水平下降后，睾丸内的各级生精细胞减少，这进一步证实了本文观点[1，4]。粗线期精母细胞分布在Ⅰ～Ⅹ期，但早期粗线期精母细胞(Ⅰ～Ⅵ期)无EGFR分布，中、晚期的粗线期精母细胞(Ⅶ～Ⅹ期)分布EGFR，提示EGFR的表达和粗线期精母细胞的成熟和进一步演变有关。
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本研究表明，细线期精母细胞胞核分布EGFR，而粗线期、双线期与终变期精母细胞，次级精母细胞和1～4阶段的精子细胞，EGFR集中分布在核膜旁一个区域，类似于文献报道EGF分布在粗线期精母细胞的高尔基体区[8]。有学者发现EGFR与核内染色体相连，EGFR可通过直接诱导特殊核蛋白的磷酸化而发挥其生理功能，EGFR在生精细胞内发生受体内化和核转位可能是质膜信号和基因活化间的关键环节[9]。椭圆形的9阶段精子细胞的顶端，即将来形成顶体的区域分布EGFR；头部狭长的15阶段精子细胞一侧，即顶体所在区域分布EGFR，推测EGFR与精子顶体形成有关。
3.3 EGFR分布差异的影响因素
本研究结果与一些报道有所不同[2,3]，其原因可能与下列因素有关：(1)实验者采用的抗体的特异性和敏感性不同，如单抗或多抗；(2)抗体制备时选择EGFR的不同区域，如胞内区或胞外区；(3)EGFR和EGF结合形成的复合物在细胞内经过内质网、高尔基体、溶酶体系统加工，而不同功能细胞加工过程不一致，使不同细胞EGFR的表达有各自的特点；(4)动物种属的差异；(5)不同生精周期曲细精管上皮的支持细胞处于不同功能状态。因此，不同生精周期的支持细胞不同程度地表达EGFR。
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*:福建省卫生厅青年基金资助课题(9624)
参考文献
1 Tsutsumi O,Kurachi H,Oka T. A physiological role of epidermal growth factor in male reproductive function. Science, 1986;233:975
2 许增禄,刘秉慈,任 庆. 表皮生长因子受体在小鼠睾丸内免疫组织化学定位. 中国科学院院报, 1993;15:330
3 Stubbs SC,Hargreave B,Habib FK. Localization and characterization of EGFR on human testicular tissue by biochemical and immunohistochemical techniques. J Endocrinol, 1990;125:485
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4 安 劬, 李 曼, 温 冰. 表皮生长因子睾丸生精过程中的调节作用. 男科学杂志, 1991;5: 193
5 Foresta C,Caretto A,Varottto A, et al. Epidermal growth factor receptors(EGFR) localization in human testis. Archives Androl, 1991;27:17
6 Mullaney B,Skinner MK. Transforming growth factor-αand epidermal growth factor receptor gene expression and action during pubertal development of the seminiferous tubule. Molecul Endocrinol, 1992;6:2103
, 百拇医药
7 Linder CC,Heckert LL,Roberts KP,et al. Expression of receptors during the cycle of the seminiferous epithelium. Ann N Y Acad Sci, 1992;602:313
8 Radhakrishnan B,Oke BO,Papadopoulos B,et al. Characterization of epidermal growth factor in mouse testis. Endocrinol, 1992;131:3091
9 Holt SJ,Alexander B,Inman CB,et al. Epidermal growth factor induced tyrosine phosphorylation of nuclear proteins associated wtith translocation of epidermal growth factor receptor into the nucleus. Biochem Pharmacol, 1994;47:117
(收稿：1999-08-02 修回：1999-09-27), 百拇医药