EBV-LMP1通过NFκB介导的信号传导途径活化CyclinD1机制初探
作者：赵晓荣 殷莉群 邓琳 唐敏 邓锡云 曹亚 LEO M.Lee 陶德定 龚建平
单位：赵晓荣 殷莉群 邓琳 唐敏 邓锡云 曹亚(湖南医科大学肿瘤研究所，湖南 长沙，410078)；LEO M.Lee(DNA Recombinant Laboratory, NCI, Frederick, MD, USA)；陶德定 龚建平(同济医科大学医学分子中心)
关键词：
中国病理生理杂志0010171
目的：探讨EBV-LMP1促进细胞增殖，参与EBV相关疾病致瘤的分子机制和EBV-LMP1通过NFκB介导的信号传导途径活化细胞周期重要正性调节因子CyclinD1表达的机制。方法：利用已建株的，LMP1表达受四环素衍生物强力霉素严密调控的pTet-on-LMP1-HNE2稳定鼻咽癌细胞系，用强力霉素诱导LMP1的表达，Western blotting从蛋白质水平分析LMP1诱导CyclinD1表达的表达动力学，包括时间效应及剂量效应，进一步在LMP1稳定表达的鼻咽癌细胞系CNE-LMP1中，用反义硫代磷酸化寡聚核苷酸分别从LMP1，NFκBp65及CyclinD1三个层次阻断，结合报导基因分析法分析从转录水平阻断后，CyclinD1报导基因强度的差异，结合流式细胞仪分析这三个层次的阻断对细胞周期产生的影响，从而探讨在鼻咽癌中，EVB-LMP1促进CyclinD1表达的机制。结果：在pTet-on-LMP1-HNE2细胞中，Western blotting方法显示，较未经诱导比较，随着LMP1的诱导表达，CyclinD1的表达明显增强，且表达具有时间依赖性，但是剂量诱导表达效果不显著。在CNE-LMP1细胞系中，导入LMP1、p65及CyclinD1的反义寡聚核苷酸从三个层次分别阻断各自的表达后，报导基因分析结果显示，CyclinD1的报告基因活性均被抑制，分别下降7.1倍，13.7倍，及35.7倍，流式细胞仪分析结果显示，较之未处理的CNE-LMP1细胞，反义LMP1、P65及CyclinD1均可抑制细胞进入增殖期，分别抑制了35%，26%及7%。结论：EBV-LMP1可能经NF-κΒ介导的信号传导途径活化CyclinD1表达，导致细胞周期紊乱，进而赋于鼻咽癌细胞恶性增殖特性。通过本研究将信号传导与细胞周期这两个当前最活跃的研究领域交叉起来，为阐明EB病毒致瘤机制开辟了一个新的视野。
国家自然科学基金杰出青年基金(No.39525022)； 国家重点基础研究发展规划(973 No G1998051201)资助, 百拇医药
单位：赵晓荣 殷莉群 邓琳 唐敏 邓锡云 曹亚(湖南医科大学肿瘤研究所，湖南 长沙，410078)；LEO M.Lee(DNA Recombinant Laboratory, NCI, Frederick, MD, USA)；陶德定 龚建平(同济医科大学医学分子中心)
关键词：
中国病理生理杂志0010171
目的：探讨EBV-LMP1促进细胞增殖，参与EBV相关疾病致瘤的分子机制和EBV-LMP1通过NFκB介导的信号传导途径活化细胞周期重要正性调节因子CyclinD1表达的机制。方法：利用已建株的，LMP1表达受四环素衍生物强力霉素严密调控的pTet-on-LMP1-HNE2稳定鼻咽癌细胞系，用强力霉素诱导LMP1的表达，Western blotting从蛋白质水平分析LMP1诱导CyclinD1表达的表达动力学，包括时间效应及剂量效应，进一步在LMP1稳定表达的鼻咽癌细胞系CNE-LMP1中，用反义硫代磷酸化寡聚核苷酸分别从LMP1，NFκBp65及CyclinD1三个层次阻断，结合报导基因分析法分析从转录水平阻断后，CyclinD1报导基因强度的差异，结合流式细胞仪分析这三个层次的阻断对细胞周期产生的影响，从而探讨在鼻咽癌中，EVB-LMP1促进CyclinD1表达的机制。结果：在pTet-on-LMP1-HNE2细胞中，Western blotting方法显示，较未经诱导比较，随着LMP1的诱导表达，CyclinD1的表达明显增强，且表达具有时间依赖性，但是剂量诱导表达效果不显著。在CNE-LMP1细胞系中，导入LMP1、p65及CyclinD1的反义寡聚核苷酸从三个层次分别阻断各自的表达后，报导基因分析结果显示，CyclinD1的报告基因活性均被抑制，分别下降7.1倍，13.7倍，及35.7倍，流式细胞仪分析结果显示，较之未处理的CNE-LMP1细胞，反义LMP1、P65及CyclinD1均可抑制细胞进入增殖期，分别抑制了35%，26%及7%。结论：EBV-LMP1可能经NF-κΒ介导的信号传导途径活化CyclinD1表达，导致细胞周期紊乱，进而赋于鼻咽癌细胞恶性增殖特性。通过本研究将信号传导与细胞周期这两个当前最活跃的研究领域交叉起来，为阐明EB病毒致瘤机制开辟了一个新的视野。
国家自然科学基金杰出青年基金(No.39525022)； 国家重点基础研究发展规划(973 No G1998051201)资助, 百拇医药