CCl4诱发肝损伤过程中血浆几种花生四烯酸代谢物和激素水平动态变化的研究
作者：陈龙 王丙云 毛鑫智
单位：陈龙 王丙云(南京师范大学生命科学学院， 江苏 南京 210097)；毛鑫智(南京农业大学动物医学院， 江苏 南京 210014)
关键词：四氯化碳；肝/损伤；花生四烯酸类；激素类
中国病理生理杂志000926
[摘 要] 目的：深入了解肝损伤对机体血浆花生四烯酸代谢、一些激素代谢以及肝脏功能变化产生的影响。方法：选用30只健康、1月龄SD大鼠，通过腹腔注射CCl4诱发肝损伤后，第2、4、6、8周观察血浆前列腺素E2(PGE2)、6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)、血栓素B2(TXB2)、谷-草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(AKP)、皮质醇、胰岛素、生长激素(GH) 、甲状腺素(T4) 和三碘甲腺原氨酸(T3)水平变化。结果：在整个实验期，大鼠血浆PGE2水平在CCl4注射后的第2周高于对照组，TBX2比对照组高，但二者t检验无显著性。而6-keto-PGF1α与对照组相近；血浆AST和AKP活力分别极显著高于对照组；皮质醇和胰岛素于2、6、8周显著高于对照组；GH、T3均于第8周显著低于对照组。T4则于第4、6、8周显著低于对照组。结论：肝损伤影响血中花生四烯酸代谢物水平和代谢；并导致血中几种代谢激素水平的异常变化。
, http://www.100md.com
[中图分类号] R575.5 [文献标识码] A
[文章编号] 1000-4718(2000)09-0858-03
[MeSH] Carbon tetrachloride; Liver/injuries; Arachidonic acids; Hormones
花生四烯酸代谢物作为脂类介质在调节肝脏生理功能和肝脏的病理生理过程中起着重要作用[1，2]。肝脏与内分泌有密切关系，肝脏对内分泌系统起着调节和协调作用[3]。肝脏含酶特别丰富，在病理情况下，肝脏的酶含量常有改变，并且可反映在血液内酶浓度的变化上[4]。本文研究了CCl4诱发肝损伤过程中血浆几种花生四烯酸代谢物、代谢激素和一些酶活力变化。旨在进一步揭示肝损伤对机体血浆花生四烯酸代谢、一些激素代谢以及肝脏功能变化产生的影响。
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材 料 和 方 法
一、 实验动物
30只健康、1月龄、平均体重(83.20±2.11) g SD大鼠，雌雄对半，随机分成对照组和CCl4实验组，每组15只。饲喂大鼠全价饲料，自由饮水。
二、 大鼠注射CCl4
将分析纯CCl4(苏州振兴化工厂提供，批号970526)用橄榄油稀释成50%浓度的注射溶液。CCl4组大鼠按0.2 ml/100 g体重腹腔注射CCl4注射液，每周2次，总共16次，对照组用同样方法同时注射同等剂量橄榄油，整个实验期8周。
三、 血样采集和处理
, http://www.100md.com 分别在注射后第2、4、6、8周，对每组大鼠称重，并分别取10只从眶下静脉丛采血2 mL，放入含有肝素钠(1∶500)和乙酰水杨酸抑制剂(0.1 g/L血液)的带盖塑料管内，混匀，然后4℃离心(3 000 r/min, 20 min)，取出血浆置-80℃保存待测。另在注射后4、8周分别从实验组和对照组取5只大鼠宰杀，观察病变。
四、测定指标和方法
前列腺素E2(prostaglandin E2，PGE2)、6-酮-前列腺素F1α(6-keto-prostaglandin F1α，6-keto-PGF1α)、血栓素B2(thromboxane B2，TXB2)等花生四烯酸代谢物用放射免疫法，试剂盒由苏州医学院血栓与止血研究室提供；谷-草转氨酶(aspartate aminotransferase，AST)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，AKP)采用HITACHI 7150 automatic analyzer 分析；皮质醇、胰岛素、生长激素(growth hormone，GH)、三碘甲腺原氨酸(triiodothyronine, T3)和甲状腺素(thyroxine, T4)等激素用放射免疫法，试剂盒由北京海科锐生物技术中心和上海生物制品研究所提供。
, http://www.100md.com
五、 数据处理
以平均值和标准差(
±s)表示，用STATISTICA软件对数据作Students't检验，确定差异显著性。
结 果
一、CCl4诱发肝损伤后大鼠生长和临床表现
两组生长大鼠的体重虽均随年龄呈递增趋势，但注射CCl4引起肝损伤的大鼠低于对照组，尤其注射后2、4周两组体重有明显差异(表1)。CCl4注射大鼠腹部明显肿胀，第4和8周剖检可见腹腔有淡黄色积液，肝脏肿胀、硬化；对照组无异常表现。
表1 CCl4诱发肝损伤后大鼠体重的变化
, 百拇医药
Tab 1 Change of body weight in rats of liver injuries induced with CCl4(±s. n=10) Indices
Group
Weeks of post-injection with CCl4
2
4
6
8
BW
Control
, http://www.100md.com
130.29±17.96
170.77±12.68
186.00±54.49
211.00±42.00
(g)
CCl4
107.27±20.78*
123.44±20.97* *
149.00±80.56
177.33±31.21
, http://www.100md.com * P<0.05, * * P<0.01 vs control group.
二、CCl4诱发肝损伤后大鼠血浆AST和AKP水平变化
在整个实验期里，实验组AST显著高于对照组，而AKP活力则从4、6、8周才显著高于对照组(表2)。表2 CCl4诱发肝损伤后大鼠血浆AST和AKP水平变化
Tab 2 Changes of plasma AST and AKP levels in rats of liver injuries induced with CCl4 (±s. n=10) Indices
Group
, 百拇医药
Weeks of post-injection with CCl4
2
4
6
8
AST
Control
81.50±17.39
92.00±10.25
86.67±31.21
86.25±80.50
(IU/L)
, 百拇医药
CCl4
733.25±397.31*
399.33±231.32* *
954.33±619.30* *
568.60±581.07*
AKP
Control
223.00±35.80
239.67±73.90
174.67±59.74
, 百拇医药
163.75±43.58
(IU/L)
CCl4
412.67±131.11
426.67±185.40*
449.60±260.70*
365.50±116.97* *
*P<0.05,* *P<0.01 vs control group.
三、CCl4诱发肝损伤后大鼠血浆几种花生四烯酸代谢物和激素水平变化
, http://www.100md.com
表3显示，在整个实验期，CCl4组的TXB2只在第8周显著高于对照组，而PGE2和6-keto-PGF1α水平实验组和对照组无明显差异。注射CCl4大鼠血浆皮质醇明显增高，并随日龄而增加，对照组在低水平范围内波动；生长激素及T3除在注射后第8周明显低于对照组外，其他时间虽低于对照组但差异不显著；CCl4组大鼠胰岛素于注射后第4、6、8周显著高于对照组；T4水平于注射后4、6、8周CCl4组大鼠显著低于对照组。
表3 CCl4诱发肝损伤后大鼠血浆几种花生四烯酸代谢物和激素水平变化
Table 3 Changes of some plasma AA metabolite and hormone l evels in rats of liver injuries induced with CCl4 (
±s. n=10) Indices
, http://www.100md.com
Group
Weeks of post-injection with CCl4
2
4
6
8
PGE2
Control
11.05±7.24
10.05±3.76
7.98±1.01
, 百拇医药 8.28±1.33
(ng/L)
CCl4
17.63±23.94
9.37±3.95
8.58±1.49
7.27±0.89
TBX2
Control
126.84±86.30
95.66±91.55
, 百拇医药 115.44±47.81
73.53±39.75
(ng/L)
CCl4
155.94±70.65
100.20±80.23
131.46±109.86
135.75±50.94*
6-keto-PGF1α
Control
8.78±5.47
, http://www.100md.com
6.41±1.77
5.59±1.20
6.14±1.04
(ng/L)
CCl4
7.99±2.09
7.59±2.53
6.71±2.91
7.10±1.90
Cortisol
Control
13.73±15.46
, 百拇医药
10.14±5.72
15.12±16.00
16.43±12.11
(μg/L)
CCl4
23.71±5.95
26.44±15.18* *
30.83±7.24*
43.61±17.14* *
GH
Control
, 百拇医药
1.66±0.57
1.74±0.29
1.64±0.13
1.87±0.35
(mg/L)
CCl4
1.48±0.41
1.76±0.25
1.26±0.38
1.41±0.19*
Insulin
, 百拇医药
Control
69.51±3.76
36.80±14.04
51.69±58.09
53.49±17.96
(mIU/L)
CCl4
83.06±59.61
115.67±93.29*
170.58±70.14*
104.84±77.54*
, http://www.100md.com
T3
Control
0.44±0.03
0.44±0.10
0.48±0.13
0.38±0.10
(μg/L)
CCl4
0.30±0.13
0.35±0.13
0.37±0.10
, http://www.100md.com 0.27±0.10*
T4
Control
42.35±6.93
35.62±10.85
52.04±13.50
33.99±7.62
(μg/L)
CCl4
26.41±17.39
22.24±13.79*
, 百拇医药
26.61±8.98* *
24.33±8.25*
*P<0.05,* *P<0.01 vs control group.讨 论
反映肝损伤的AST和AKP活力在CCl4注射后的整个实验期内分别极显著高于对照组，提示CCl4诱发了肝脏严重损伤。研究已经证实，肝脏不仅是花生四烯酸代谢物产生的重要部位，也是它们作用的靶器官以及代谢失活的主要场所[1,2]。肝脏损伤时，肝脏对花生四烯酸代谢物的摄取、代谢灭活及排泄功能势必要发生障碍，从而影响到血中、尿中和胆汁中的水平变化。本实验表明肝损伤影响血中某些花生四烯酸代谢物水平和代谢。CCl4注射后皮质醇和胰岛素显著高于对照组；生长激素、T3和T4均低于或显著低于对照组，说明肝损伤足以引起某些代谢激素的异常变化。肝脏即是多种激素作用的主要靶器官，也是它们代谢灭活的主要组织之一。因此，肝脏功能失调、发生病变时，机体血中的激素就会表现异常变化。大量的实验证据显示，当机体发生各种严重肝病时，均发生高胰岛素血症[3]。
, 百拇医药
胰岛素、GH、T3和T4等在调控机体生长发育、代谢等方面起重要作用，同时与免疫机能也有密切的关系[5，6]。CCl4诱发肝损伤大鼠生长缓慢是胰岛素、GH、T3和T4等几种激素异常变化、调控失常的直接结果。这些激素和皮质醇的显著升高一起，可能将全面影响机体的免疫功能。
[参 考 文 献]
[1] Keppler D. Leukotrienes: biosynthesis, transport, inactivation and analysis[J]. Rev Physiol Biochem Pharmacol, 1992, 121: 1-30.
[2] 陈 龙 毛鑫智. 花生四烯酸代谢物与肝损伤[J]. 中国病理生理杂志，1999,15(12):1149-1152.
, 百拇医药
[3] 曾民德,萧树东,主编.肝脏与内分泌[M].第1版. 北京:人民卫生出版社, 1995.1-200.
[4] 江绍基主编.临床肝胆系病学[M]. 第1版. 上海:上海科学技术出版社,1995.100-115.
[5] 王显臣，梁殿权，王均衡，等. 激素与代谢、免疫及生长[M]. 见：程治平，主编. 内分泌生理学. 第1版. 北京:人民卫生出版社, 1984.375-446.
[6] 范少光.神经内分泌和免疫系统间的关系[J].生理科学进展, 1987,18(3):272-280.
[收稿日期] 1999-07-21 [修回日期] 2000-01-24, 百拇医药
单位：陈龙 王丙云(南京师范大学生命科学学院， 江苏 南京 210097)；毛鑫智(南京农业大学动物医学院， 江苏 南京 210014)
关键词：四氯化碳；肝/损伤；花生四烯酸类；激素类
中国病理生理杂志000926
[摘 要] 目的：深入了解肝损伤对机体血浆花生四烯酸代谢、一些激素代谢以及肝脏功能变化产生的影响。方法：选用30只健康、1月龄SD大鼠，通过腹腔注射CCl4诱发肝损伤后，第2、4、6、8周观察血浆前列腺素E2(PGE2)、6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)、血栓素B2(TXB2)、谷-草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(AKP)、皮质醇、胰岛素、生长激素(GH) 、甲状腺素(T4) 和三碘甲腺原氨酸(T3)水平变化。结果：在整个实验期，大鼠血浆PGE2水平在CCl4注射后的第2周高于对照组，TBX2比对照组高，但二者t检验无显著性。而6-keto-PGF1α与对照组相近；血浆AST和AKP活力分别极显著高于对照组；皮质醇和胰岛素于2、6、8周显著高于对照组；GH、T3均于第8周显著低于对照组。T4则于第4、6、8周显著低于对照组。结论：肝损伤影响血中花生四烯酸代谢物水平和代谢；并导致血中几种代谢激素水平的异常变化。
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[中图分类号] R575.5 [文献标识码] A
[文章编号] 1000-4718(2000)09-0858-03
[MeSH] Carbon tetrachloride; Liver/injuries; Arachidonic acids; Hormones
花生四烯酸代谢物作为脂类介质在调节肝脏生理功能和肝脏的病理生理过程中起着重要作用[1，2]。肝脏与内分泌有密切关系，肝脏对内分泌系统起着调节和协调作用[3]。肝脏含酶特别丰富，在病理情况下，肝脏的酶含量常有改变，并且可反映在血液内酶浓度的变化上[4]。本文研究了CCl4诱发肝损伤过程中血浆几种花生四烯酸代谢物、代谢激素和一些酶活力变化。旨在进一步揭示肝损伤对机体血浆花生四烯酸代谢、一些激素代谢以及肝脏功能变化产生的影响。
, http://www.100md.com
材 料 和 方 法
一、 实验动物
30只健康、1月龄、平均体重(83.20±2.11) g SD大鼠，雌雄对半，随机分成对照组和CCl4实验组，每组15只。饲喂大鼠全价饲料，自由饮水。
二、 大鼠注射CCl4
将分析纯CCl4(苏州振兴化工厂提供，批号970526)用橄榄油稀释成50%浓度的注射溶液。CCl4组大鼠按0.2 ml/100 g体重腹腔注射CCl4注射液，每周2次，总共16次，对照组用同样方法同时注射同等剂量橄榄油，整个实验期8周。
三、 血样采集和处理
, http://www.100md.com 分别在注射后第2、4、6、8周，对每组大鼠称重，并分别取10只从眶下静脉丛采血2 mL，放入含有肝素钠(1∶500)和乙酰水杨酸抑制剂(0.1 g/L血液)的带盖塑料管内，混匀，然后4℃离心(3 000 r/min, 20 min)，取出血浆置-80℃保存待测。另在注射后4、8周分别从实验组和对照组取5只大鼠宰杀，观察病变。
四、测定指标和方法
前列腺素E2(prostaglandin E2，PGE2)、6-酮-前列腺素F1α(6-keto-prostaglandin F1α，6-keto-PGF1α)、血栓素B2(thromboxane B2，TXB2)等花生四烯酸代谢物用放射免疫法，试剂盒由苏州医学院血栓与止血研究室提供；谷-草转氨酶(aspartate aminotransferase，AST)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，AKP)采用HITACHI 7150 automatic analyzer 分析；皮质醇、胰岛素、生长激素(growth hormone，GH)、三碘甲腺原氨酸(triiodothyronine, T3)和甲状腺素(thyroxine, T4)等激素用放射免疫法，试剂盒由北京海科锐生物技术中心和上海生物制品研究所提供。
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五、 数据处理
以平均值和标准差(
±s)表示，用STATISTICA软件对数据作Students't检验，确定差异显著性。结 果
一、CCl4诱发肝损伤后大鼠生长和临床表现
两组生长大鼠的体重虽均随年龄呈递增趋势，但注射CCl4引起肝损伤的大鼠低于对照组，尤其注射后2、4周两组体重有明显差异(表1)。CCl4注射大鼠腹部明显肿胀，第4和8周剖检可见腹腔有淡黄色积液，肝脏肿胀、硬化；对照组无异常表现。
表1 CCl4诱发肝损伤后大鼠体重的变化
, 百拇医药
Tab 1 Change of body weight in rats of liver injuries induced with CCl4(
±s. n=10) IndicesGroup
Weeks of post-injection with CCl4
2
4
6
8
BW
Control
, http://www.100md.com
130.29±17.96
170.77±12.68
186.00±54.49
211.00±42.00
(g)
CCl4
107.27±20.78*
123.44±20.97* *
149.00±80.56
177.33±31.21
, http://www.100md.com * P<0.05, * * P<0.01 vs control group.
二、CCl4诱发肝损伤后大鼠血浆AST和AKP水平变化
在整个实验期里，实验组AST显著高于对照组，而AKP活力则从4、6、8周才显著高于对照组(表2)。表2 CCl4诱发肝损伤后大鼠血浆AST和AKP水平变化
Tab 2 Changes of plasma AST and AKP levels in rats of liver injuries induced with CCl4 (
±s. n=10) IndicesGroup
, 百拇医药
Weeks of post-injection with CCl4
2
4
6
8
AST
Control
81.50±17.39
92.00±10.25
86.67±31.21
86.25±80.50
(IU/L)
, 百拇医药
CCl4
733.25±397.31*
399.33±231.32* *
954.33±619.30* *
568.60±581.07*
AKP
Control
223.00±35.80
239.67±73.90
174.67±59.74
, 百拇医药
163.75±43.58
(IU/L)
CCl4
412.67±131.11
426.67±185.40*
449.60±260.70*
365.50±116.97* *
*P<0.05,* *P<0.01 vs control group.
三、CCl4诱发肝损伤后大鼠血浆几种花生四烯酸代谢物和激素水平变化
, http://www.100md.com
表3显示，在整个实验期，CCl4组的TXB2只在第8周显著高于对照组，而PGE2和6-keto-PGF1α水平实验组和对照组无明显差异。注射CCl4大鼠血浆皮质醇明显增高，并随日龄而增加，对照组在低水平范围内波动；生长激素及T3除在注射后第8周明显低于对照组外，其他时间虽低于对照组但差异不显著；CCl4组大鼠胰岛素于注射后第4、6、8周显著高于对照组；T4水平于注射后4、6、8周CCl4组大鼠显著低于对照组。
表3 CCl4诱发肝损伤后大鼠血浆几种花生四烯酸代谢物和激素水平变化
Table 3 Changes of some plasma AA metabolite and hormone l evels in rats of liver injuries induced with CCl4 (
±s. n=10) Indices, http://www.100md.com
Group
Weeks of post-injection with CCl4
2
4
6
8
PGE2
Control
11.05±7.24
10.05±3.76
7.98±1.01
, 百拇医药 8.28±1.33
(ng/L)
CCl4
17.63±23.94
9.37±3.95
8.58±1.49
7.27±0.89
TBX2
Control
126.84±86.30
95.66±91.55
, 百拇医药 115.44±47.81
73.53±39.75
(ng/L)
CCl4
155.94±70.65
100.20±80.23
131.46±109.86
135.75±50.94*
6-keto-PGF1α
Control
8.78±5.47
, http://www.100md.com
6.41±1.77
5.59±1.20
6.14±1.04
(ng/L)
CCl4
7.99±2.09
7.59±2.53
6.71±2.91
7.10±1.90
Cortisol
Control
13.73±15.46
, 百拇医药
10.14±5.72
15.12±16.00
16.43±12.11
(μg/L)
CCl4
23.71±5.95
26.44±15.18* *
30.83±7.24*
43.61±17.14* *
GH
Control
, 百拇医药
1.66±0.57
1.74±0.29
1.64±0.13
1.87±0.35
(mg/L)
CCl4
1.48±0.41
1.76±0.25
1.26±0.38
1.41±0.19*
Insulin
, 百拇医药
Control
69.51±3.76
36.80±14.04
51.69±58.09
53.49±17.96
(mIU/L)
CCl4
83.06±59.61
115.67±93.29*
170.58±70.14*
104.84±77.54*
, http://www.100md.com
T3
Control
0.44±0.03
0.44±0.10
0.48±0.13
0.38±0.10
(μg/L)
CCl4
0.30±0.13
0.35±0.13
0.37±0.10
, http://www.100md.com 0.27±0.10*
T4
Control
42.35±6.93
35.62±10.85
52.04±13.50
33.99±7.62
(μg/L)
CCl4
26.41±17.39
22.24±13.79*
, 百拇医药
26.61±8.98* *
24.33±8.25*
*P<0.05,* *P<0.01 vs control group.讨 论
反映肝损伤的AST和AKP活力在CCl4注射后的整个实验期内分别极显著高于对照组，提示CCl4诱发了肝脏严重损伤。研究已经证实，肝脏不仅是花生四烯酸代谢物产生的重要部位，也是它们作用的靶器官以及代谢失活的主要场所[1,2]。肝脏损伤时，肝脏对花生四烯酸代谢物的摄取、代谢灭活及排泄功能势必要发生障碍，从而影响到血中、尿中和胆汁中的水平变化。本实验表明肝损伤影响血中某些花生四烯酸代谢物水平和代谢。CCl4注射后皮质醇和胰岛素显著高于对照组；生长激素、T3和T4均低于或显著低于对照组，说明肝损伤足以引起某些代谢激素的异常变化。肝脏即是多种激素作用的主要靶器官，也是它们代谢灭活的主要组织之一。因此，肝脏功能失调、发生病变时，机体血中的激素就会表现异常变化。大量的实验证据显示，当机体发生各种严重肝病时，均发生高胰岛素血症[3]。
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胰岛素、GH、T3和T4等在调控机体生长发育、代谢等方面起重要作用，同时与免疫机能也有密切的关系[5，6]。CCl4诱发肝损伤大鼠生长缓慢是胰岛素、GH、T3和T4等几种激素异常变化、调控失常的直接结果。这些激素和皮质醇的显著升高一起，可能将全面影响机体的免疫功能。
[参 考 文 献]
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[收稿日期] 1999-07-21 [修回日期] 2000-01-24, 百拇医药