端侧吻合移植神经重建皮瓣感觉的形态观察
作者：陈辉 陈绍宗 李跃军 李学拥
单位：解放军第四军医大学第二附属医院，陕西西安710038
关键词：感觉神经；神经端侧吻合；神经再生；皮瓣
摘要 目的
摘要 目的:探讨感觉神经端侧吻合重建皮瓣感觉的可能性。方法：用新西兰兔25只，将兔的一条耳大神经作为供神经，在另侧耳取耳大神经移植体(受神经)，与供神经作端侧吻合后埋入失神经皮瓣，按神经移植体埋入皮瓣后时间分为1、2、4个月3个实验组，另设正常皮肤组和未植神经对照组，每组动物5只。用抗神经丝抗体免疫组化技术观察神经再生形态和分布；用电镜观察再生神经的超微结构。结果：(1)感觉神经端侧吻合后1个月，供神经的轴突即可长入神经移植体(受神经)，随时间延长，再生轴突数量逐渐增多。(2)再生神经纤维的超微结构基本正常。结论：兔耳大神经端侧吻合植入失神经皮瓣后，供神经的轴突能长入神经移植体，并最终形成具有功能的感觉未梢。
, http://www.100md.com
分类号 R651.3 文献标识码 A 文章编号 1007-5496(2000)06-0876-02
The research on end-to-side nerve transplantation for morphological recovery of sensory reimmervation in denverved skin flap
CHEN Hui,CHEN Shao-zong,LI Yao-jun,et al.
(Tangdu Hospital,The Fourth Military Medical University,Xi'an 710038,China)
Abstract Objective:To explore the feasibility of functional nerve endings regenerated from the domor nerve following end-to -side neurorrhaphy.Methods:In this study,the rabbit greater auricular nerve transplantation model was used.One greater auricular nerve was dissected,embedded in denervated skin flap,and end-to-side anastomosed to the contralateral twenty-five New Zealand Rabbits were divided into 3 groups based on the time after nerve implantation(1,2,4 months after operation).Normal skin and denerved skin flap without nerve implantation served as control group.Antineurofilament immunohistochemical procedure was performed to visualize the morphology and distribution of regenerated nerves.The ultrastructure of regenerated nerves was observed with electron microscope.Results:(1)After one month in end-to -side neurorrhaphy,the axon in proximal stump grew into the distal implanted nerves,the amount of regenerated axons in distal nerves increased with the time after operation.(2)The ultrastructure of the newly regenerated nerve was similar to that in normal skin.Conclusion :The axonal reinnervation of sensory nerve endings from the proximal stump to distal implanted nerve in end-to -side nerve neurorrhaphy is feasible.
, 百拇医药
Key words sensory nerve;end-to-side neurorrhaphy;nerve regeneration;skin flap
自1992年Viterbo[1]发表了神经端侧吻合的实验研究结果以来，国内外均有陆续报道[2～5]，但研究仍处在起始阶段，实验动物一般都用大鼠，研究对象多为运动神经，对感觉神经而言，通过端侧吻合再生的纤维能否形成有功能的感觉末稍等尚有待研究。
1资料与方法
1.1 资料 在兔左耳背全层切除2.5cm直径圆形皮肤，游离出耳大神经(供神经)，纵行切开外膜(开窗)，右耳取1.25cm耳大神经(受神经)，与供神经开窗处端侧缝合，植入局部皮瓣。分1、2、4月观察组、正常皮肤组和失神经支配组，各5只。
1.2 方法 在端侧吻合口取T形标本，在皮瓣取全层皮肤标本。采用抗神经丝单克隆抗体免疫组化方法进行神经纤维及末梢染色，光镜下观察端侧吻合口、皮瓣中神经纤维的形态学变化，另将皮瓣标本制作超薄切片，用透射电镜观察神经的超微结构。
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2结果
2.1 神经端侧吻合口处的光镜观察 采用抗神经丝单克隆抗体免疫组化方法进行神经纤维及末梢染色，光镜下阳性反应纤维呈藏兰或棕色，神经干纵切面具连续性，横切面上分布均匀，为短线或颗粒状。溃变的神经纤维不着色，但可见溃变后的隐约痕迹。神经端侧吻合后1个月，端侧吻合口处供神经内已有较多的再生轴突出现。再生轴突斜行或横行离开供神经，虽方向性不完全规律，但总的趋向是朝着吻合口。轴突已有一定长度，少数已通过吻合口长入神经移植体(图1)。术后2个月，吻合口处供神经内再生轴突更多，方向性也更趋向一致走向受神经，长入距离明显加大(图2)。术后4个月，大量新生的神经纤维聚集成束长入受神经，神经纤维密度明显增大(图3)。供神经和受神经吻合处的“T”形标本纵切面，明显可见来自供神经的轴突长入受神经(图4)。
2.2皮瓣内的神经纤维再生光镜观察：本实验在抗神经丝抗体免疫组化染色条件下，皮肤解剖层次不易区分。兔正常近耳根的枕部皮肤中神经末稍数量不多，集中在有皮脂腺的区域。植入失神经皮瓣以后1个月，受神经皮瓣内未见阳性染色纤维(图5)。2个月时，神经移植区皮下组织内可见少量阳性纤维(图6)，皮瓣边缘区尚未见到。术后4个月神经移植区再生的神经纤维数增多，有的纤维已长到接近表皮层(图7)，神经末梢也以有皮脂腺的部位较多，此时皮瓣的边缘区也有神经分布。而未植神经组皮瓣，术后4个月未见阳性染色纤维。电镜观察：神经移植体
, 百拇医药
图1端侧吻合口1个月(见侧支发芽并长入移植神经，距离短，3.3×10×6)
图2端侧吻合口2个月(见侧支发芽并长入移植神经，距离长，3.3×10×6)
图3端侧吻合口4个月(见侧支发芽并长入移植神经数量多，聚集成束，3.3×10×6)
图4端侧吻合口局部(4个月，3.3×10×6)
, 百拇医药
图5移植神经1个月皮瓣内未见新生神经纤维(3.3×4×6)
图6神经移植2个月皮瓣神经移植区可见少量新生神经纤维(3.3×4×6)
图7神经移植4个月皮瓣神经移植区新生神经纤维及末梢(3.3×4×6)
图81个月时皮肤中溃变的神经纤维(TEM×6000)
, 百拇医药
图92个月时皮肤中再生的无髓神经与溃变后的神经(TEM×6000)
图104个月时皮瓣中新生的有髓神经与无髓神经(TEM×6000)
植入皮瓣后1个月，只见溃变的纤维，未见有纤维再生(图8)，2个月时在溃变的有髓纤维神经内膜管内可见少量的再生的无髓纤维(图9)。术后4个月，溃变的有髓纤维内膜管内已有大量的无髓纤维再生，被雪旺氏细胞包裹或半包裹，此时有一些无髓纤维已经有髓化，与正常皮肤组比较，有髓纤维数量较少(图10)。
3讨论
以往，神经缝合或移植均采用端端吻合法。但临床实际中有时神经远段完好，而近段已经撕脱或严重毁损，不能用常规方法为远段神经提供再生轴突来源，端侧吻合法由此而提出并成为整形外科新的关注点[5]。端侧吻合的方法不仅能利用邻近健康的神经提供再生轴突，而且不牺牲该神经，不损伤其支配区的功能。
, 百拇医药
本实验采用兔耳大神经端侧吻合，将受神经植入失神经皮瓣的模型，可观察再生轴突能否形成感觉末梢及其发育程度，结果表明：兔耳大神经端侧吻合后，自供神经发出的再生轴突能跨越吻合口长入受神经，并能在皮瓣内形成感觉末梢，使失神经皮瓣获得神经再支配。长入皮瓣内的神经纤维先出现在神经移植处，后扩散到皮瓣边缘；先再生无髓纤维后再生有髓纤维。4个月观察期内，再生轴突发育程度尚不完善。
作者简介：陈辉(1965-)，男，吉林人，主治医师。研究方向：移植神经重建皮瓣感觉。
参考文献
[1]Viterbo F,Trindade J,Hosbino,K,et al.Latero-terminal neurorrhaphy without removal of the epimeural sheath:experimental study in rats[J]. San Paulo Med J,1992,Ⅲ ： 267～ 271
, 百拇医药
[2]Viterbo F,Trindade J,Hoshino K,et al.End-to-side neurorrhaphy with remonal of the epineurial sheath:and experimental study in rats[J].Plast Reconstr Surg,1994,94(6):1 038～ 1042
[3]Shan MH,Kasabian AK,Karp NS,et al.Axonal regeneratin through an autogenous nerve bypass:an experimental study in the rat[J].Ann Plast Surg,1997,38(4):408～ 414
[4]Lundborg G,Zhao Q,Kanje M,et al.Can sensory and motor collateral sprouting be induced from intact peripheral nerve by end-to-side anastomosis[J]?J Hard Surgery,1994,19 B:277～ 282
[5]Mackinnon SE,Dellon AL.Reinnervation of distal sensory nerve environments by regenerating sensory axons[J].Neuroscience,1992,46(3): 595～ 598
(收稿：2000-04-03), 百拇医药
单位：解放军第四军医大学第二附属医院，陕西西安710038
关键词：感觉神经；神经端侧吻合；神经再生；皮瓣
摘要 目的
摘要 目的:探讨感觉神经端侧吻合重建皮瓣感觉的可能性。方法：用新西兰兔25只，将兔的一条耳大神经作为供神经，在另侧耳取耳大神经移植体(受神经)，与供神经作端侧吻合后埋入失神经皮瓣，按神经移植体埋入皮瓣后时间分为1、2、4个月3个实验组，另设正常皮肤组和未植神经对照组，每组动物5只。用抗神经丝抗体免疫组化技术观察神经再生形态和分布；用电镜观察再生神经的超微结构。结果：(1)感觉神经端侧吻合后1个月，供神经的轴突即可长入神经移植体(受神经)，随时间延长，再生轴突数量逐渐增多。(2)再生神经纤维的超微结构基本正常。结论：兔耳大神经端侧吻合植入失神经皮瓣后，供神经的轴突能长入神经移植体，并最终形成具有功能的感觉未梢。
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分类号 R651.3 文献标识码 A 文章编号 1007-5496(2000)06-0876-02
The research on end-to-side nerve transplantation for morphological recovery of sensory reimmervation in denverved skin flap
CHEN Hui,CHEN Shao-zong,LI Yao-jun,et al.
(Tangdu Hospital,The Fourth Military Medical University,Xi'an 710038,China)
Abstract Objective:To explore the feasibility of functional nerve endings regenerated from the domor nerve following end-to -side neurorrhaphy.Methods:In this study,the rabbit greater auricular nerve transplantation model was used.One greater auricular nerve was dissected,embedded in denervated skin flap,and end-to-side anastomosed to the contralateral twenty-five New Zealand Rabbits were divided into 3 groups based on the time after nerve implantation(1,2,4 months after operation).Normal skin and denerved skin flap without nerve implantation served as control group.Antineurofilament immunohistochemical procedure was performed to visualize the morphology and distribution of regenerated nerves.The ultrastructure of regenerated nerves was observed with electron microscope.Results:(1)After one month in end-to -side neurorrhaphy,the axon in proximal stump grew into the distal implanted nerves,the amount of regenerated axons in distal nerves increased with the time after operation.(2)The ultrastructure of the newly regenerated nerve was similar to that in normal skin.Conclusion :The axonal reinnervation of sensory nerve endings from the proximal stump to distal implanted nerve in end-to -side nerve neurorrhaphy is feasible.
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Key words sensory nerve;end-to-side neurorrhaphy;nerve regeneration;skin flap
自1992年Viterbo[1]发表了神经端侧吻合的实验研究结果以来，国内外均有陆续报道[2～5]，但研究仍处在起始阶段，实验动物一般都用大鼠，研究对象多为运动神经，对感觉神经而言，通过端侧吻合再生的纤维能否形成有功能的感觉末稍等尚有待研究。
1资料与方法
1.1 资料 在兔左耳背全层切除2.5cm直径圆形皮肤，游离出耳大神经(供神经)，纵行切开外膜(开窗)，右耳取1.25cm耳大神经(受神经)，与供神经开窗处端侧缝合，植入局部皮瓣。分1、2、4月观察组、正常皮肤组和失神经支配组，各5只。
1.2 方法 在端侧吻合口取T形标本，在皮瓣取全层皮肤标本。采用抗神经丝单克隆抗体免疫组化方法进行神经纤维及末梢染色，光镜下观察端侧吻合口、皮瓣中神经纤维的形态学变化，另将皮瓣标本制作超薄切片，用透射电镜观察神经的超微结构。
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2结果
2.1 神经端侧吻合口处的光镜观察 采用抗神经丝单克隆抗体免疫组化方法进行神经纤维及末梢染色，光镜下阳性反应纤维呈藏兰或棕色，神经干纵切面具连续性，横切面上分布均匀，为短线或颗粒状。溃变的神经纤维不着色，但可见溃变后的隐约痕迹。神经端侧吻合后1个月，端侧吻合口处供神经内已有较多的再生轴突出现。再生轴突斜行或横行离开供神经，虽方向性不完全规律，但总的趋向是朝着吻合口。轴突已有一定长度，少数已通过吻合口长入神经移植体(图1)。术后2个月，吻合口处供神经内再生轴突更多，方向性也更趋向一致走向受神经，长入距离明显加大(图2)。术后4个月，大量新生的神经纤维聚集成束长入受神经，神经纤维密度明显增大(图3)。供神经和受神经吻合处的“T”形标本纵切面，明显可见来自供神经的轴突长入受神经(图4)。
2.2皮瓣内的神经纤维再生光镜观察：本实验在抗神经丝抗体免疫组化染色条件下，皮肤解剖层次不易区分。兔正常近耳根的枕部皮肤中神经末稍数量不多，集中在有皮脂腺的区域。植入失神经皮瓣以后1个月，受神经皮瓣内未见阳性染色纤维(图5)。2个月时，神经移植区皮下组织内可见少量阳性纤维(图6)，皮瓣边缘区尚未见到。术后4个月神经移植区再生的神经纤维数增多，有的纤维已长到接近表皮层(图7)，神经末梢也以有皮脂腺的部位较多，此时皮瓣的边缘区也有神经分布。而未植神经组皮瓣，术后4个月未见阳性染色纤维。电镜观察：神经移植体
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图1端侧吻合口1个月(见侧支发芽并长入移植神经，距离短，3.3×10×6)
图2端侧吻合口2个月(见侧支发芽并长入移植神经，距离长，3.3×10×6)
图3端侧吻合口4个月(见侧支发芽并长入移植神经数量多，聚集成束，3.3×10×6)
图4端侧吻合口局部(4个月，3.3×10×6)
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图5移植神经1个月皮瓣内未见新生神经纤维(3.3×4×6)
图6神经移植2个月皮瓣神经移植区可见少量新生神经纤维(3.3×4×6)
图7神经移植4个月皮瓣神经移植区新生神经纤维及末梢(3.3×4×6)
图81个月时皮肤中溃变的神经纤维(TEM×6000)
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图92个月时皮肤中再生的无髓神经与溃变后的神经(TEM×6000)
图104个月时皮瓣中新生的有髓神经与无髓神经(TEM×6000)
植入皮瓣后1个月，只见溃变的纤维，未见有纤维再生(图8)，2个月时在溃变的有髓纤维神经内膜管内可见少量的再生的无髓纤维(图9)。术后4个月，溃变的有髓纤维内膜管内已有大量的无髓纤维再生，被雪旺氏细胞包裹或半包裹，此时有一些无髓纤维已经有髓化，与正常皮肤组比较，有髓纤维数量较少(图10)。
3讨论
以往，神经缝合或移植均采用端端吻合法。但临床实际中有时神经远段完好，而近段已经撕脱或严重毁损，不能用常规方法为远段神经提供再生轴突来源，端侧吻合法由此而提出并成为整形外科新的关注点[5]。端侧吻合的方法不仅能利用邻近健康的神经提供再生轴突，而且不牺牲该神经，不损伤其支配区的功能。
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本实验采用兔耳大神经端侧吻合，将受神经植入失神经皮瓣的模型，可观察再生轴突能否形成感觉末梢及其发育程度，结果表明：兔耳大神经端侧吻合后，自供神经发出的再生轴突能跨越吻合口长入受神经，并能在皮瓣内形成感觉末梢，使失神经皮瓣获得神经再支配。长入皮瓣内的神经纤维先出现在神经移植处，后扩散到皮瓣边缘；先再生无髓纤维后再生有髓纤维。4个月观察期内，再生轴突发育程度尚不完善。
作者简介：陈辉(1965-)，男，吉林人，主治医师。研究方向：移植神经重建皮瓣感觉。
参考文献
[1]Viterbo F,Trindade J,Hosbino,K,et al.Latero-terminal neurorrhaphy without removal of the epimeural sheath:experimental study in rats[J]. San Paulo Med J,1992,Ⅲ ： 267～ 271
, 百拇医药
[2]Viterbo F,Trindade J,Hoshino K,et al.End-to-side neurorrhaphy with remonal of the epineurial sheath:and experimental study in rats[J].Plast Reconstr Surg,1994,94(6):1 038～ 1042
[3]Shan MH,Kasabian AK,Karp NS,et al.Axonal regeneratin through an autogenous nerve bypass:an experimental study in the rat[J].Ann Plast Surg,1997,38(4):408～ 414
[4]Lundborg G,Zhao Q,Kanje M,et al.Can sensory and motor collateral sprouting be induced from intact peripheral nerve by end-to-side anastomosis[J]?J Hard Surgery,1994,19 B:277～ 282
[5]Mackinnon SE,Dellon AL.Reinnervation of distal sensory nerve environments by regenerating sensory axons[J].Neuroscience,1992,46(3): 595～ 598
(收稿：2000-04-03), 百拇医药