微卫星DNADXS1113的多态性与精神分裂症
作者：胡纪泽 吴怀安 邓小敏 闫小华
单位：深圳市精神卫生研究所，广东 深圳 518020
关键词：微卫星DNA；多态性；扩增片段长度；精神分裂症
现代康复000938
摘要:目的 搜寻中国汉族人X染色体的精神分裂症(SP)易患性基因，分析DXS1113多态性与SP相关性及遗传学特征。方法 运用扩增片段长度多态性(Amp-FLP)检测技术，分析30例SP患者DXS1113二核苷酸串联重复序列的多态性分布，并以30例正常人作为对照。结果 在对照组和SP患者组中检出12种DXS1113多态性片段，SP组与对照组之间有4种片段(156bp、168bp、172bp、174bp)的差异具有显著性(P<0.05)。结论 DXS1113与SP相关联，提示在所研究的样本中X染色体长臂(xq27.3-q28)可能存在SP易感性基因。
, http://www.100md.com
中图分类号:R749.3 文献标识码:A
文章编号:1007-5496(2000)09-1350-02
Polymorphism of microsatellite DNA DXS1113 and schizophrenia
HU Ji-ze,WU Huai-an,DENG Xiao-min,et al
(Department of Biological Psychiatry,Shenzhen Institute of Mental Health,Shenzhen 518020,China)
Abstract： Objective To search for a gene predisposing to schizophrenia(SP)on chromosome X in the Han nationality of Chinese,to explore the relationship between DXS1113 polymorphism with SP and feature of the genetics.Methods The dinucleotide repeat polymorphism distribution of DXS1113 of 30 patients with SP was examined with amplified fragment length polymorphism (Amp-FLP) examination technique.The control group consisted of 30 unrelated normal Chinese individuals.Results There was 12 alleles of DXS1113 among the patients and the normal controls.The results of statistical handing showed that four alleles (156bp,168bp,172bp,174bp)were significantly different(P<0.05)between patients and normal controls. Conclusion The DXS1113 is associated with schizophrenia in the samples of our analysis.This results suggest that there was a schizophrenia liability gene on X chromosome (xq27.3-q28).
, 百拇医药
Key words：satellite DNA;polymorphism;amplified fragment length;schizophrenia
精神分裂症(schizophrenia,SP)是常见的精神疾病。家系调查双生子及寄养子研究资料均提示SP有较强的遗传倾向[1]。近年来我国7地区精神疾病流行学调查资料显示，SP时点患病率城乡分别为10.68‰和11.6‰，(χ2=0.37,P>0.05)，终生患病率分别为12.9‰和13.9‰(χ2=0.33,P>0.05)，城乡差异无显著性[2]。由于SP病因学及遗传学相当复杂，其发病原因和遗传机制倍受研究者关注。深入研究SP发病原因，探测SP遗传机制仍是当今精神医学和医学遗传学研究热点。为此，我们用扩增片段长度多态性(Amp-FLP)技术对DXS1113多态性与SP进行关联分析，现将结果报告如下。
1 资料与方法
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1.1资料SP组：SP患者30例，来自深圳市康宁医院1997年2月～1998年7月的住院患者，均经2名主治医师(或副主任医师、主任医师)按美国精神疾病诊断统计手册第3版修订本SP诊断标准确诊，其中男14例，女16例，平均年龄(28±11)岁。对照组：30例健康人，均为深圳市康宁医院及深圳市精神卫生研究所职工，均无血缘关系，本人及家庭无精神病史。其中男14例，女16例，平均年龄(27±9)岁。
1.2方法(1)DNA提抽：确诊的SP组及对照组成员每人抽取静脉血5ml，肝素抗凝，按照常规方法提取白细胞基因组DNA，将抽提的DNA分组并编号，置于1.5ml无菌小离心管中的无水乙醇中，保存于冰箱内(-20℃)备用。(2)引物：聚合酶链反应(PCR)引物由中国科学院上海植物生理所植物分子国家重点实验室合成，序列为TC-AC-5'ACCTGTGGAGGATAGTAGTCGACT-3'，AG-TG-5′GGGAGCTTTAGAGATTTTGGTAAA-3'。(3)放射性核素α-32P-dCTP购于北京福瑞公司(批号980801)。(4)PCR反应体系：反应体系为10ml，内含10mmol/LTrisHC1(pH8.3),1.5mmol/LMgCl2,0.2mmol/LdATP,dTTP,dGTP,2μmol/LdCTP,0.1μlα-32P-dCTP，每种引物各3pmol,50ngDNA和luTag酶。(5)PCR反应：PCR循环在Perkin-Elmer9600型DNA扩增仪上进行，每份试验标本将反应体系置95℃变性2min，72℃延伸7min，置4℃保存。热循环参数是93℃30s,59℃30s,63℃45s，共28个循环。循环完毕后，置63℃7min，然后4℃存放。(6)电泳：配制含7mol/L尿素的变性聚丙稀酰胺胶，将10μlPCR产物与20μl上样液(95%甲酰胺，0.025%二甲苯青，0.025%溴酚蓝和10mmol/LEDTA)混匀后取3μl点样，在42cm×33cm×0.04mm的96孔点样胶上作垂直电泳，并以M13mp18的DNA序列ladder作为DNA分子大小的标准，电泳后立即揭胶，烘烤至干。(7)放射自显影：将烤干的胶装入合适的X线暗盒，暗室内压片，放射后显影。
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2 结果
对DXS1113多态性分析结果表明，在SP组和对照组中共检出12种等位基因，其分子量大小及基因频率见表1。
表1 精神分裂症患者和正常对照组DXS1113多态性基因频率比较 等位基因(bp)
154
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172
174
176
178
患者组(n=30)
0.0217
0.2170
0.0435
0.0217
0.0435
0.0435
0.6087
0.0000
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0.0000
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对照组(n=30)
0.0653
0.0435
0.0871
0.0435
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0.0218
0.0871
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0.0435
0.3043
0.2175
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P值
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>0.05
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<0.01
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>0.05
<0.05
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从表1可见，156bp、168bp在SP患者组中数量众多，正常对照组中稀少。172bp、174bp在正常对照组中数量众多，在患者组中罕见。吻合度测验表明，本组资料符合H-W平衡定律(P>0.05)。被检出的12种等位基因中8种在SP组和对照组中的差异无显著性(P>0.05)。其中4种(156bp，168bp，172bp，174bp)等位基因的差异具有显著性(P<0.05)。
3 讨论
常染色体上是否存在精神疾病的易感性基因是精神医学和医学遗传学的一个研究热点，其中较有代表性的是5号染色体上SP易感基因以及多巴胺受体基因与SP相关性的研究。Bassere等(1988)，Sherrington等(1988)都报告5q11-q13区域存在SP易感性基因。Dollfus等1996报告SP与多巴胺受体基因相关联[3～5]。人类X染色体上是否存在精神疾病的易感性基因是另一个研究的热点，早期就有研究者观察到，性染色体异常个体除有不同程度的躯体异常外，部分患者往往伴发某些精神障碍及表现轻度至中度的智力低下，在精神疾病患者和家系中，常表现症状与性别相关。病母-病子及男性向男性传递现象提示，精神疾病与性染色体上的基因相关[6～9]。吴怀安等报告在所研究的中国人样本中，SP与葡萄糖-6-磷酰酶(G-6-PD)基因相关联，由于G-6-PD基因位于X染色体长臂末端，因此，该研究结果提示X染色体长臂上很可能存在SP易感性基因[10]。本结果显示，在对照组和SP组共检出12种等位基因，与国外报告相一致[11]。SP组中156bp和168bp显著高于对照组，经统计学处理，差异具有显著性(P<0.05)，而172bp和174bp正常对照组显著高于SP患者组，且差异具有显著性(P<0.01,P<0.05)。通过本研究结果分析得知SP患者组和正常对照组DXS1113多态性表现型不尽相同，表现DXS1113与SP相关联。这一结果提示DXS1113所定位的X染色体相关部位(xq27.3-q28)很可能存在SP易患性基因，又一次为X染色体与SP相关联提供了佐证。SP与X染色体相关联的结果，提示了SP发病又一可能的原因，我们将进一步扩大研究样本，验证我们的研究结果，如果这一结果得到广泛的验证，无疑给SP分子遗传学和遗传机制的了解提供了非常有价值的资料。
, 百拇医药
作者简介：胡纪泽(1956-)，男，湖北武汉人，副主任医师，医学硕士，所长，副院长，研究方向：心理卫生及神经症。
参考文献：
[1]沈渔屯阝.精神病学[M].第3版.北京：人民卫生出版社，1995.576
[2]陈昌惠，沈渔屯阝，张维熙，等.中国七个地区精神分裂症流行学调查[J].中华精神科杂志，1998，31(1)：69-71
[3]Bassete AS,Mc Gillivray BC,Jones B,et al.Partial trisomy chromosome 5 cosegregating with schizophrenia[J].Lancet I(8589),1988,799- 780
[4]Dollfus S,Compion D,Vasse T,et al.Association study between dopam-ine D1,D2,D3,and D4 receptor genes and schizophrenia defined by several diagnostic systems[J].Biol Psychiatry,1996,40:419- 421
, http://www.100md.com
[5]Sherrington R,Brynjolfsson J,Petursson H,et al.Localization of a sus-ceptibility locus for schizophrenia on chromosome 5[J].Nature,1998, 336:164- 167
[6]Crow TJ.Sex chrosome and psychosis:The case for a seudoautosomal locns[J].Br J Psychiatry,1988,153:675- 683
[7]Lynn MR,Delisi LE,Crow TJ,et al.Evidence for a sex chromosome Lo-cus for schizophrenia[J].Schizophrenia Bulletin,1989,15:431- 440
, 百拇医药 [8]Matthysse S,Holzman PS,Lange K.The genetic transmission of schizop-hrenia[J].J Psychiatric Res,1986,20:52- 76
[9]De Lisi LE,Crow JJ.Evidence for a sex chromosome locus for schizop-hrenia[J].Schizophrenia Bulltin,1989,15:431- 440
[10]吴怀安，田玉兰，冯哲辉，等.精神分裂症分子遗传学研究[J].湖北医科大学学报，1996，17(2)：99-101
[11]Weber C,Oudet C,Johnson S,et al.Dinucleotide repeat polymorphism close to IDS gene in xq27.3-q28(DXS1113)[J].Human Molecular Gen-etics,1993,2:612
收稿日期：2000-06-29, 百拇医药
单位：深圳市精神卫生研究所，广东 深圳 518020
关键词：微卫星DNA；多态性；扩增片段长度；精神分裂症
现代康复000938
摘要:目的 搜寻中国汉族人X染色体的精神分裂症(SP)易患性基因，分析DXS1113多态性与SP相关性及遗传学特征。方法 运用扩增片段长度多态性(Amp-FLP)检测技术，分析30例SP患者DXS1113二核苷酸串联重复序列的多态性分布，并以30例正常人作为对照。结果 在对照组和SP患者组中检出12种DXS1113多态性片段，SP组与对照组之间有4种片段(156bp、168bp、172bp、174bp)的差异具有显著性(P<0.05)。结论 DXS1113与SP相关联，提示在所研究的样本中X染色体长臂(xq27.3-q28)可能存在SP易感性基因。
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中图分类号:R749.3 文献标识码:A
文章编号:1007-5496(2000)09-1350-02
Polymorphism of microsatellite DNA DXS1113 and schizophrenia
HU Ji-ze,WU Huai-an,DENG Xiao-min,et al
(Department of Biological Psychiatry,Shenzhen Institute of Mental Health,Shenzhen 518020,China)
Abstract： Objective To search for a gene predisposing to schizophrenia(SP)on chromosome X in the Han nationality of Chinese,to explore the relationship between DXS1113 polymorphism with SP and feature of the genetics.Methods The dinucleotide repeat polymorphism distribution of DXS1113 of 30 patients with SP was examined with amplified fragment length polymorphism (Amp-FLP) examination technique.The control group consisted of 30 unrelated normal Chinese individuals.Results There was 12 alleles of DXS1113 among the patients and the normal controls.The results of statistical handing showed that four alleles (156bp,168bp,172bp,174bp)were significantly different(P<0.05)between patients and normal controls. Conclusion The DXS1113 is associated with schizophrenia in the samples of our analysis.This results suggest that there was a schizophrenia liability gene on X chromosome (xq27.3-q28).
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Key words：satellite DNA;polymorphism;amplified fragment length;schizophrenia
精神分裂症(schizophrenia,SP)是常见的精神疾病。家系调查双生子及寄养子研究资料均提示SP有较强的遗传倾向[1]。近年来我国7地区精神疾病流行学调查资料显示，SP时点患病率城乡分别为10.68‰和11.6‰，(χ2=0.37,P>0.05)，终生患病率分别为12.9‰和13.9‰(χ2=0.33,P>0.05)，城乡差异无显著性[2]。由于SP病因学及遗传学相当复杂，其发病原因和遗传机制倍受研究者关注。深入研究SP发病原因，探测SP遗传机制仍是当今精神医学和医学遗传学研究热点。为此，我们用扩增片段长度多态性(Amp-FLP)技术对DXS1113多态性与SP进行关联分析，现将结果报告如下。
1 资料与方法
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1.1资料SP组：SP患者30例，来自深圳市康宁医院1997年2月～1998年7月的住院患者，均经2名主治医师(或副主任医师、主任医师)按美国精神疾病诊断统计手册第3版修订本SP诊断标准确诊，其中男14例，女16例，平均年龄(28±11)岁。对照组：30例健康人，均为深圳市康宁医院及深圳市精神卫生研究所职工，均无血缘关系，本人及家庭无精神病史。其中男14例，女16例，平均年龄(27±9)岁。
1.2方法(1)DNA提抽：确诊的SP组及对照组成员每人抽取静脉血5ml，肝素抗凝，按照常规方法提取白细胞基因组DNA，将抽提的DNA分组并编号，置于1.5ml无菌小离心管中的无水乙醇中，保存于冰箱内(-20℃)备用。(2)引物：聚合酶链反应(PCR)引物由中国科学院上海植物生理所植物分子国家重点实验室合成，序列为TC-AC-5'ACCTGTGGAGGATAGTAGTCGACT-3'，AG-TG-5′GGGAGCTTTAGAGATTTTGGTAAA-3'。(3)放射性核素α-32P-dCTP购于北京福瑞公司(批号980801)。(4)PCR反应体系：反应体系为10ml，内含10mmol/LTrisHC1(pH8.3),1.5mmol/LMgCl2,0.2mmol/LdATP,dTTP,dGTP,2μmol/LdCTP,0.1μlα-32P-dCTP，每种引物各3pmol,50ngDNA和luTag酶。(5)PCR反应：PCR循环在Perkin-Elmer9600型DNA扩增仪上进行，每份试验标本将反应体系置95℃变性2min，72℃延伸7min，置4℃保存。热循环参数是93℃30s,59℃30s,63℃45s，共28个循环。循环完毕后，置63℃7min，然后4℃存放。(6)电泳：配制含7mol/L尿素的变性聚丙稀酰胺胶，将10μlPCR产物与20μl上样液(95%甲酰胺，0.025%二甲苯青，0.025%溴酚蓝和10mmol/LEDTA)混匀后取3μl点样，在42cm×33cm×0.04mm的96孔点样胶上作垂直电泳，并以M13mp18的DNA序列ladder作为DNA分子大小的标准，电泳后立即揭胶，烘烤至干。(7)放射自显影：将烤干的胶装入合适的X线暗盒，暗室内压片，放射后显影。
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2 结果
对DXS1113多态性分析结果表明，在SP组和对照组中共检出12种等位基因，其分子量大小及基因频率见表1。
表1 精神分裂症患者和正常对照组DXS1113多态性基因频率比较 等位基因(bp)
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患者组(n=30)
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从表1可见，156bp、168bp在SP患者组中数量众多，正常对照组中稀少。172bp、174bp在正常对照组中数量众多，在患者组中罕见。吻合度测验表明，本组资料符合H-W平衡定律(P>0.05)。被检出的12种等位基因中8种在SP组和对照组中的差异无显著性(P>0.05)。其中4种(156bp，168bp，172bp，174bp)等位基因的差异具有显著性(P<0.05)。
3 讨论
常染色体上是否存在精神疾病的易感性基因是精神医学和医学遗传学的一个研究热点，其中较有代表性的是5号染色体上SP易感基因以及多巴胺受体基因与SP相关性的研究。Bassere等(1988)，Sherrington等(1988)都报告5q11-q13区域存在SP易感性基因。Dollfus等1996报告SP与多巴胺受体基因相关联[3～5]。人类X染色体上是否存在精神疾病的易感性基因是另一个研究的热点，早期就有研究者观察到，性染色体异常个体除有不同程度的躯体异常外，部分患者往往伴发某些精神障碍及表现轻度至中度的智力低下，在精神疾病患者和家系中，常表现症状与性别相关。病母-病子及男性向男性传递现象提示，精神疾病与性染色体上的基因相关[6～9]。吴怀安等报告在所研究的中国人样本中，SP与葡萄糖-6-磷酰酶(G-6-PD)基因相关联，由于G-6-PD基因位于X染色体长臂末端，因此，该研究结果提示X染色体长臂上很可能存在SP易感性基因[10]。本结果显示，在对照组和SP组共检出12种等位基因，与国外报告相一致[11]。SP组中156bp和168bp显著高于对照组，经统计学处理，差异具有显著性(P<0.05)，而172bp和174bp正常对照组显著高于SP患者组，且差异具有显著性(P<0.01,P<0.05)。通过本研究结果分析得知SP患者组和正常对照组DXS1113多态性表现型不尽相同，表现DXS1113与SP相关联。这一结果提示DXS1113所定位的X染色体相关部位(xq27.3-q28)很可能存在SP易患性基因，又一次为X染色体与SP相关联提供了佐证。SP与X染色体相关联的结果，提示了SP发病又一可能的原因，我们将进一步扩大研究样本，验证我们的研究结果，如果这一结果得到广泛的验证，无疑给SP分子遗传学和遗传机制的了解提供了非常有价值的资料。
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作者简介：胡纪泽(1956-)，男，湖北武汉人，副主任医师，医学硕士，所长，副院长，研究方向：心理卫生及神经症。
参考文献：
[1]沈渔屯阝.精神病学[M].第3版.北京：人民卫生出版社，1995.576
[2]陈昌惠，沈渔屯阝，张维熙，等.中国七个地区精神分裂症流行学调查[J].中华精神科杂志，1998，31(1)：69-71
[3]Bassete AS,Mc Gillivray BC,Jones B,et al.Partial trisomy chromosome 5 cosegregating with schizophrenia[J].Lancet I(8589),1988,799- 780
[4]Dollfus S,Compion D,Vasse T,et al.Association study between dopam-ine D1,D2,D3,and D4 receptor genes and schizophrenia defined by several diagnostic systems[J].Biol Psychiatry,1996,40:419- 421
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[5]Sherrington R,Brynjolfsson J,Petursson H,et al.Localization of a sus-ceptibility locus for schizophrenia on chromosome 5[J].Nature,1998, 336:164- 167
[6]Crow TJ.Sex chrosome and psychosis:The case for a seudoautosomal locns[J].Br J Psychiatry,1988,153:675- 683
[7]Lynn MR,Delisi LE,Crow TJ,et al.Evidence for a sex chromosome Lo-cus for schizophrenia[J].Schizophrenia Bulletin,1989,15:431- 440
, 百拇医药 [8]Matthysse S,Holzman PS,Lange K.The genetic transmission of schizop-hrenia[J].J Psychiatric Res,1986,20:52- 76
[9]De Lisi LE,Crow JJ.Evidence for a sex chromosome locus for schizop-hrenia[J].Schizophrenia Bulltin,1989,15:431- 440
[10]吴怀安，田玉兰，冯哲辉，等.精神分裂症分子遗传学研究[J].湖北医科大学学报，1996，17(2)：99-101
[11]Weber C,Oudet C,Johnson S,et al.Dinucleotide repeat polymorphism close to IDS gene in xq27.3-q28(DXS1113)[J].Human Molecular Gen-etics,1993,2:612
收稿日期：2000-06-29, 百拇医药