改良米汤培养基对白色念珠菌厚膜孢子形成的效果
作者：戴橄 周爱东
单位：戴橄(微生物学教研室 长沙 410078)；周爱东(微生物学教研室 长沙 410078)
关键词：培养基；白色念珠菌；孢子；厚膜孢子*
湖南医科大学学报000241[摘要] 对常用的刺激白色念珠菌厚膜孢子形成的三种培养基与改良米汤培养基比较，结果 示，改良的米汤培养基产生的厚膜孢子的效果最佳，在18 h内即可产生大量的厚膜孢子。结 果表明改良的米汤培养基制作简便、经济实用。同时还介绍了白色念珠菌厚膜孢子示教片制 作方法的改良。
[中图分类号] R446.5 [文献标识码] A [文章编号] 1000-5625(2000)02-0207-02
Effect of an improved rice soup culture medium on Candida albicans forming chlamydospore
, 百拇医药
DAI Gan, ZHOU Ai-dong
Department of Microbiology, Hunan Medical University(Changsha 410078)
[Abstract] Three types of culture medium that stimulated Candida albicans to for m chlamydospore were compared with the improved rice soup culture medium. The re sults were that the effect of the improved rice soup culture medium on stimulating C.albicans to form chlamydospore was bet ter than the effects of others; a large number of chlamydospores could be gotten in 18h.The results indicate that this method, the improved rice soup culture medium, is easy, simple, and economic. A method for making the teaching slide of C.albicans forming chlamydospore was also introduced.
, 百拇医药
[Key words] culture medium; Candida albican; spores; c hlamydospore*
随着抗生素、甾类药物、免疫抑制剂及放疗、化疗的临床应用，菌群失调的现象逐渐增多， 真菌病亦日益多见，其中白色念珠菌所致疾病更为常见。观察厚膜孢子的形成，仍是鉴定白 色念珠菌的重要指标。促进厚膜孢子形成的培养基较多，归纳起来，常用的有以下几种：玉 米粥吐温80培养基；大米吐温80培养基[1，2]；芋头琼脂培养基[3]；以 及玉米粒、吐温80、肥 皂粉培养基[4]等。本文选择芋头培养基、玉米粥培养基及玉米粒、吐温80、肥皂 粉培养基等4种培养基与改良的米汤培养基进行比较，以观察后者的培养效果。现将结果报 告如下。
1 材料与方法
1.1 材料 玉米颗粒、大米、肥皂粉等从商店购得；吐温80购自化学试剂公 司。
, http://www.100md.com
1.2 培养基的制备 玉米粥培养基、芋头培养基，除不加琼脂外均按文献 [3]制备。玉米粒、吐温80、 肥皂粉培养基按文献[4]制备。米汤培养基制 备 方法如下：食用大米8 g加自来水100 ml煮沸40 min至呈粥状但不呈胨胶状，如呈胨胶状再 加 水稀释，或直接取家庭煮饭时的米汤，然后用纱布过滤。1000 r.min-1离心10 min ，去沉渣，保留上层液体作培养基用。 此时的上清液在600 nm波长(721分光光度计下)1 cm杯比浊，OD值为0.115。或不离心，让 米汤自然沉淀，吸取上清液作为培养基。所获培养基在15磅20 min灭菌备用。将以上各种 培养基分装小试管，每管1.5 ml，备用。
1.3 菌株的准备及培养 白色念珠菌菌株CB2，CBL，CBS，CB 01为本室分离保存的菌株，实验前 均经形态学、发酵及生化试验鉴定为白色念珠菌，培养于沙氏斜面上，然后比浊至24×108.ml-1(麦氏比浊管)，每管培养基加菌液0.5 ml，最后培养基中细菌浓度为8×108.ml -1。置25℃进行培养，定时吸取一滴在显微镜下检查。
, 百拇医药
1.4 结果的判定 对培养基促进厚膜孢子形成的结果，本文均以“++++， +++， ++， +”表示所形成的厚膜孢子多少,“-”为不形成厚膜孢子。
2 结果与讨论
2.1 不同培养基促进厚膜孢子形成的结果 附表显示4种培养基中，以米汤 培养基对厚膜孢子的产生效果最好，4种菌在此培养基中，均于18 h内形成大量双壁型厚膜 孢子。其次是玉米粒、吐温80、肥皂粉培养基；芋头培养基虽然能使白色念珠菌在18～48 h 内形成厚膜孢子， 量亦很多，但是不形成双壁；玉米粥培养基为最差。从培养基制备简繁、取材难易以及经济 角度考虑，均以米汤培养基最佳，而且改良的米汤培养基，一次制备可用半年以上，其刺激 厚膜孢子形成的能力不变。实属于一种经济、简便、效果优异的白色念珠菌厚膜孢子形成培 养基。
附表 不同白色念珠菌菌株在不同培养基中形成厚膜孢子的量 菌株
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18h
48h
72h
A
B
C
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CB2
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CBL
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A- 芋头培养基； B-玉米粥培养基；C-米汤培养基；D-玉米粒、吐温80、 肥皂粉 培养基
2.2 厚膜孢子示教片制备的改良 接种白色念珠菌于 改良米汤培养基中，25℃培养18～24 h，检查厚膜孢子形成情况及产量，若量少可延长培育 时间。而后在3000 r.min-1 离心30 mi n，弃去上清液，于沉淀 中加入等量棉兰染液，轻轻混匀，置室温4 h，滴一滴染色后菌液 于载玻片上，加盖玻片，封上较浓的树胶，即成厚膜孢子示教片。此示教片可大量制作。
附图 白色念珠菌在改良米汤培养基中形成的厚膜孢子及 假菌丝
Fig. C.albicans forming chlamydospore in the impro ved rice soup culture medium.
, 百拇医药
示教片制作的改良法与传统法比较有两方面的优点：①改良的方法简便、经济，而传统方法复杂，必须做小培养，因而所需器材较多。②改良法制成的示教片，厚膜孢子及菌丝 形态逼真，背景清晰，能长期保存不变(附图)，传统法须用琼脂培养做小培养，由于白色 念珠菌在培养基内形成假菌丝与厚膜孢子[4]，因而做厚膜孢子示教片时，必须同 时切取琼脂培养基，保存时间长则琼脂干裂，造成厚膜孢子及假菌丝变形，严重影响教学效 果，亦限制大量生产。
参考文献：
[1] Warren NG, Hozen KC. Candida, Crytococcus and other yeas ts of medical importance[M]. In: Murray PR, eds. Manual clinical of microbiolo gy. 6th ed, Washington DC: American society for microbiology, 1995:723-737.
[2] 吕乃群.真菌学检验[M].见：李影林主编.中华医学检验全书[M]，北京: 人 民卫生出版社1996：1978
[3] 齐长才，王凤连，李馨如.细菌血清学检验手册.北京：人民卫生出版社，1962： 266.
[4] 张学思.白色念珠菌厚膜孢子培养基制备方法的改进[J].中华医学检验杂志, 198 2，5(3)：173-175., http://www.100md.com
单位：戴橄(微生物学教研室 长沙 410078)；周爱东(微生物学教研室 长沙 410078)
关键词：培养基；白色念珠菌；孢子；厚膜孢子*
湖南医科大学学报000241[摘要] 对常用的刺激白色念珠菌厚膜孢子形成的三种培养基与改良米汤培养基比较，结果 示，改良的米汤培养基产生的厚膜孢子的效果最佳，在18 h内即可产生大量的厚膜孢子。结 果表明改良的米汤培养基制作简便、经济实用。同时还介绍了白色念珠菌厚膜孢子示教片制 作方法的改良。
[中图分类号] R446.5 [文献标识码] A [文章编号] 1000-5625(2000)02-0207-02
Effect of an improved rice soup culture medium on Candida albicans forming chlamydospore
, 百拇医药
DAI Gan, ZHOU Ai-dong
Department of Microbiology, Hunan Medical University(Changsha 410078)
[Abstract] Three types of culture medium that stimulated Candida albicans to for m chlamydospore were compared with the improved rice soup culture medium. The re sults were that the effect of the improved rice soup culture medium on stimulating C.albicans to form chlamydospore was bet ter than the effects of others; a large number of chlamydospores could be gotten in 18h.The results indicate that this method, the improved rice soup culture medium, is easy, simple, and economic. A method for making the teaching slide of C.albicans forming chlamydospore was also introduced.
, 百拇医药
[Key words] culture medium; Candida albican; spores; c hlamydospore*
随着抗生素、甾类药物、免疫抑制剂及放疗、化疗的临床应用，菌群失调的现象逐渐增多， 真菌病亦日益多见，其中白色念珠菌所致疾病更为常见。观察厚膜孢子的形成，仍是鉴定白 色念珠菌的重要指标。促进厚膜孢子形成的培养基较多，归纳起来，常用的有以下几种：玉 米粥吐温80培养基；大米吐温80培养基[1，2]；芋头琼脂培养基[3]；以 及玉米粒、吐温80、肥 皂粉培养基[4]等。本文选择芋头培养基、玉米粥培养基及玉米粒、吐温80、肥皂 粉培养基等4种培养基与改良的米汤培养基进行比较，以观察后者的培养效果。现将结果报 告如下。
1 材料与方法
1.1 材料 玉米颗粒、大米、肥皂粉等从商店购得；吐温80购自化学试剂公 司。
, http://www.100md.com
1.2 培养基的制备 玉米粥培养基、芋头培养基，除不加琼脂外均按文献 [3]制备。玉米粒、吐温80、 肥皂粉培养基按文献[4]制备。米汤培养基制 备 方法如下：食用大米8 g加自来水100 ml煮沸40 min至呈粥状但不呈胨胶状，如呈胨胶状再 加 水稀释，或直接取家庭煮饭时的米汤，然后用纱布过滤。1000 r.min-1离心10 min ，去沉渣，保留上层液体作培养基用。 此时的上清液在600 nm波长(721分光光度计下)1 cm杯比浊，OD值为0.115。或不离心，让 米汤自然沉淀，吸取上清液作为培养基。所获培养基在15磅20 min灭菌备用。将以上各种 培养基分装小试管，每管1.5 ml，备用。
1.3 菌株的准备及培养 白色念珠菌菌株CB2，CBL，CBS，CB 01为本室分离保存的菌株，实验前 均经形态学、发酵及生化试验鉴定为白色念珠菌，培养于沙氏斜面上，然后比浊至24×108.ml-1(麦氏比浊管)，每管培养基加菌液0.5 ml，最后培养基中细菌浓度为8×108.ml -1。置25℃进行培养，定时吸取一滴在显微镜下检查。
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1.4 结果的判定 对培养基促进厚膜孢子形成的结果，本文均以“++++， +++， ++， +”表示所形成的厚膜孢子多少,“-”为不形成厚膜孢子。
2 结果与讨论
2.1 不同培养基促进厚膜孢子形成的结果 附表显示4种培养基中，以米汤 培养基对厚膜孢子的产生效果最好，4种菌在此培养基中，均于18 h内形成大量双壁型厚膜 孢子。其次是玉米粒、吐温80、肥皂粉培养基；芋头培养基虽然能使白色念珠菌在18～48 h 内形成厚膜孢子， 量亦很多，但是不形成双壁；玉米粥培养基为最差。从培养基制备简繁、取材难易以及经济 角度考虑，均以米汤培养基最佳，而且改良的米汤培养基，一次制备可用半年以上，其刺激 厚膜孢子形成的能力不变。实属于一种经济、简便、效果优异的白色念珠菌厚膜孢子形成培 养基。
附表 不同白色念珠菌菌株在不同培养基中形成厚膜孢子的量 菌株
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A- 芋头培养基； B-玉米粥培养基；C-米汤培养基；D-玉米粒、吐温80、 肥皂粉 培养基
2.2 厚膜孢子示教片制备的改良 接种白色念珠菌于 改良米汤培养基中，25℃培养18～24 h，检查厚膜孢子形成情况及产量，若量少可延长培育 时间。而后在3000 r.min-1 离心30 mi n，弃去上清液，于沉淀 中加入等量棉兰染液，轻轻混匀，置室温4 h，滴一滴染色后菌液 于载玻片上，加盖玻片，封上较浓的树胶，即成厚膜孢子示教片。此示教片可大量制作。
附图 白色念珠菌在改良米汤培养基中形成的厚膜孢子及 假菌丝
Fig. C.albicans forming chlamydospore in the impro ved rice soup culture medium.
, 百拇医药
示教片制作的改良法与传统法比较有两方面的优点：①改良的方法简便、经济，而传统方法复杂，必须做小培养，因而所需器材较多。②改良法制成的示教片，厚膜孢子及菌丝 形态逼真，背景清晰，能长期保存不变(附图)，传统法须用琼脂培养做小培养，由于白色 念珠菌在培养基内形成假菌丝与厚膜孢子[4]，因而做厚膜孢子示教片时，必须同 时切取琼脂培养基，保存时间长则琼脂干裂，造成厚膜孢子及假菌丝变形，严重影响教学效 果，亦限制大量生产。
参考文献：
[1] Warren NG, Hozen KC. Candida, Crytococcus and other yeas ts of medical importance[M]. In: Murray PR, eds. Manual clinical of microbiolo gy. 6th ed, Washington DC: American society for microbiology, 1995:723-737.
[2] 吕乃群.真菌学检验[M].见：李影林主编.中华医学检验全书[M]，北京: 人 民卫生出版社1996：1978
[3] 齐长才，王凤连，李馨如.细菌血清学检验手册.北京：人民卫生出版社，1962： 266.
[4] 张学思.白色念珠菌厚膜孢子培养基制备方法的改进[J].中华医学检验杂志, 198 2，5(3)：173-175., http://www.100md.com