肺癌呼吸道合胞病毒感染与K-ras基因突变的研究
作者：陈杭薇 邬光惠 周景 李继成 尤兰华 刘晓联
单位：北京军区总医院呼吸科 100700
关键词：
诊断病理学杂志000119分类号：R734.2 文献标识码：A
文章编号：1007-8096(2000)01-0050-01 近年肺癌的发生率呈上升趋势，有专家认为人乳头瘤病毒感染与肺癌有关[1,2]。我们在临床检测中发现肺癌患者上呼吸道分泌物中的呼吸道合胞病毒(RSV)阳性检出率较呼吸道感染患者高。本研究应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)结合单链构象多态性分析(SSCP)、免疫组化分析检测39例肺癌手术标本的BSV和K-ras基因。探讨肺癌与RSV感染和K-ras基因突变的关系。
1材料与方法
, http://www.100md.com
选择1996年5月～1997年12月住院手术的肺癌患者39例。对照组为同期住院的呼吸道感染患者37例。手术切除的新鲜肺癌组织、纤维支气管镜活检炎性组织-20℃冻存。肺癌组织基因扩增，包括RSV基因RT-PRC扩增，按Freymuth[3]的方法加以改进，2%琼脂糖凝胶电泳确认280bpcDNA区带；K-ras基因PCR扩增，按张广宇[4]的方法加以改进，2%琼脂糖凝胶电泳确认108bp目标DNA区带。然后取5μlPCR产物，上样于10%聚丙烯酰胺凝胶，电泳，银染，判断结果。设置未突变型对照。肺癌组织冷冻切片，经免疫组化碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶桥联酶标反应(APAAP)，光镜观察结果。
2结果
2.1RSV基因检测39例肺癌手术标本中检出RSV基因序列7例(17.9%)，其中鳞癌5例，腺癌2例。2%琼脂糖凝胶电泳可观察到一条280bp区带(附图)。并经Southern印迹杂交证实。对照组的炎性组织标本均未发现特异性区带。
, 百拇医药
2.2APAAP法检测RSV基因RSV基因扩增阳性的肺癌组织冷冻切片可见细胞浆呈弥漫性阳性反应，而RSV基因扩增阴性的肺癌组织对照切片则未见阳性着色。
2.3K-ras基因PCR-SSCP检测检测39例肺癌组织，其中有10例发现K-ras基因的第12位密码子有突变，显示其单链迁移率与正常对照比较有变化。(全文见PDF)
参考文献：
[1]Johnson ES，Dalmas D，Noss J，et al.Cancer mortality among workers in a-battoirs and meatpacking plants:an update.Am J Ind Med，1995，27：389-403
[2]笪冀平，胡益云，陈乐真，等.肺癌人乳头瘤病毒感染与p53基因突变的研究.中华肿瘤杂志，1996，18：27
, 百拇医药
[3]Freymuth F，Eugene G，Vabret A，et al.Detection of respiratory syncytial virus by reverse transcription-PCR and hybridization with a DNA enzyme immunoassay.J Clin Microbiol，1995，33：3352-5
[4]张广宇，孙以瑜，王孟山，等.肺癌K-ras基因突变的检测及临床应用.中华结核和呼吸杂志，1995，18：282
[5]Montagne JRL.RSV peneumornia,a community-acguired infection in adults.Lancet，1997，349：149-50
[6]张波，崔文，高英堂，等.高转移性人肺癌细胞系p53基因突变的研究.中华肿瘤杂志，1995，17：279
[7]王国凤，陈培辉，曹敏，等.肺癌及癌旁组织p21蛋白表达及意义.癌症，1997，16：293
[8]Rodenhuis S，Slebos RJ.Clinical significance of ras oncogene activation in human lung cancer.Cancer Research(suppl)，1992，52：2665-2669
收稿日期：1999-04-16
修稿日期：1999-11-29, 百拇医药
单位：北京军区总医院呼吸科 100700
关键词：
诊断病理学杂志000119分类号：R734.2 文献标识码：A
文章编号：1007-8096(2000)01-0050-01 近年肺癌的发生率呈上升趋势，有专家认为人乳头瘤病毒感染与肺癌有关[1,2]。我们在临床检测中发现肺癌患者上呼吸道分泌物中的呼吸道合胞病毒(RSV)阳性检出率较呼吸道感染患者高。本研究应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)结合单链构象多态性分析(SSCP)、免疫组化分析检测39例肺癌手术标本的BSV和K-ras基因。探讨肺癌与RSV感染和K-ras基因突变的关系。
1材料与方法
, http://www.100md.com
选择1996年5月～1997年12月住院手术的肺癌患者39例。对照组为同期住院的呼吸道感染患者37例。手术切除的新鲜肺癌组织、纤维支气管镜活检炎性组织-20℃冻存。肺癌组织基因扩增，包括RSV基因RT-PRC扩增，按Freymuth[3]的方法加以改进，2%琼脂糖凝胶电泳确认280bpcDNA区带；K-ras基因PCR扩增，按张广宇[4]的方法加以改进，2%琼脂糖凝胶电泳确认108bp目标DNA区带。然后取5μlPCR产物，上样于10%聚丙烯酰胺凝胶，电泳，银染，判断结果。设置未突变型对照。肺癌组织冷冻切片，经免疫组化碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶桥联酶标反应(APAAP)，光镜观察结果。
2结果
2.1RSV基因检测39例肺癌手术标本中检出RSV基因序列7例(17.9%)，其中鳞癌5例，腺癌2例。2%琼脂糖凝胶电泳可观察到一条280bp区带(附图)。并经Southern印迹杂交证实。对照组的炎性组织标本均未发现特异性区带。
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2.2APAAP法检测RSV基因RSV基因扩增阳性的肺癌组织冷冻切片可见细胞浆呈弥漫性阳性反应，而RSV基因扩增阴性的肺癌组织对照切片则未见阳性着色。
2.3K-ras基因PCR-SSCP检测检测39例肺癌组织，其中有10例发现K-ras基因的第12位密码子有突变，显示其单链迁移率与正常对照比较有变化。(全文见PDF)
参考文献：
[1]Johnson ES，Dalmas D，Noss J，et al.Cancer mortality among workers in a-battoirs and meatpacking plants:an update.Am J Ind Med，1995，27：389-403
[2]笪冀平，胡益云，陈乐真，等.肺癌人乳头瘤病毒感染与p53基因突变的研究.中华肿瘤杂志，1996，18：27
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[3]Freymuth F，Eugene G，Vabret A，et al.Detection of respiratory syncytial virus by reverse transcription-PCR and hybridization with a DNA enzyme immunoassay.J Clin Microbiol，1995，33：3352-5
[4]张广宇，孙以瑜，王孟山，等.肺癌K-ras基因突变的检测及临床应用.中华结核和呼吸杂志，1995，18：282
[5]Montagne JRL.RSV peneumornia,a community-acguired infection in adults.Lancet，1997，349：149-50
[6]张波，崔文，高英堂，等.高转移性人肺癌细胞系p53基因突变的研究.中华肿瘤杂志，1995，17：279
[7]王国凤，陈培辉，曹敏，等.肺癌及癌旁组织p21蛋白表达及意义.癌症，1997，16：293
[8]Rodenhuis S，Slebos RJ.Clinical significance of ras oncogene activation in human lung cancer.Cancer Research(suppl)，1992，52：2665-2669
收稿日期：1999-04-16
修稿日期：1999-11-29, 百拇医药