系统性自身免疫病患者抗核抗体的分类测定
作者：齐为民 郭力 姜南燕 刘树林^4?*[a:, 百拇医药
单位：齐为民(第四军医大学唐都医院检验科，陕西 西安 710038)；郭力(第四军医大学唐都医院检验科，陕西 西安 710038)；姜南燕(第四军医大学唐都医院检验科，陕西 西安 710038)；刘树林(第四军医大学唐都医院检验科，陕西 西安 710038)^4?*[a:, 百拇医药
关键词：自身抗疫性疾病；自身抗体；核酸^4?*[a:, 百拇医药
免疫学杂志000525 [中图分类号] R544.12 [文献标识码] B^4?*[a:, 百拇医药
[文章编号]1000-8861(2000)05-0395-01^4?*[a:, 百拇医药
Taxonomic determination of antinucler antibodies in the patients with systemic autoimmune diseases^4?*[a:, 百拇医药
可提取性核抗原(ENA)中抗Sm、抗u1-RNP、抗SS-A、抗SS-B、抗ScL-70和抗JO-1分别是SLE、MCTD、SS、PSS、PM与DM的标志抗体，过去用琼脂双向扩散法、免疫荧光法、对流免疫电泳法、RNA-免疫沉淀法和免疫印迹法操作烦琐，结果判断不够客观，除免疫印迹法外均不能同时测定。本文介绍的EIA法具有简便、快速、灵敏和大批量同步半定量检测的优点，易于推广应用。^4?*[a:, 百拇医药
1 材料和方法^4?*[a:, 百拇医药
1.1 研究对象^4?*[a:, 百拇医药
1.1.1 器官非特异组：检测1996～1999年临床确诊的系统性结缔组织病患者144例。其中系统性红斑狼疮(SLE)38例，类风湿关节炎(RA)33例，混合结缔组织病(MCTD)19例，全身性硬皮病(PSS)20例，多发性肌炎(PM)和皮肌炎(DM)21例，多发性大动脉炎(PMA)13例。年龄13～69岁，平均37.3岁。男36例，女108例，男女之比为1∶3。^4?*[a:, 百拇医药
1.1.2 器官特异组：检测同期器官特异性AID35例，其中溃疡性结肠炎、重症肌无力各2例，ITP5例、肾综合征(含肾小球肾炎和尿毒症各2例)13例、慢性活动性肝炎8例和多发性硬化症5例。年龄10～70岁，平均28.8岁，男22例，女13例，男女之比为1.69∶1。
1.2 试剂与检测项目 抗ds-DNA及ENA多肽抗体试剂由美国 clark实验室提供；ds-DNA为抗IgG和IgM混合物；ENA为抗IgG、IgA和IgM混合物；ENA抗体为抗Sm、抗μ1-RNP、抗SS-A、抗SS-B、抗Scl-70和抗Jo-16项。:hw, 百拇医药
1.3 同步检测法(以2个样本为例):hw, 百拇医药
分别加ENA和ds-DNA校正液于微孔板1A、2A横向孔中5 μl，加稀释液100 μl。1号患者血清纵向加于1B至1H孔中5 μl，2号样本纵向加于2B至2H 7个孔中各5 μl(96孔板检测12人)。:hw, 百拇医药
各孔加各自的酶结合物100 μl，25 °C 30 min，洗5次拍干。各孔加TMB 100 μl， 25 °C 10 min，各孔加2 N HCl 100 μl， 20 min，后于450型酶标仪测定吸光度。:hw, 百拇医药
计算及阳性判断标准：抗ENA6项及抗ds-DNA结果＝血清OD/校正液OD×已知各项目的校正系数。7项自身抗体比值≥1.10者为阳性。:hw, 百拇医药
2 结果与讨论:hw, 百拇医药
SLE患者7项指标中抗ds-DNA阳性率最高(73.8%)，其次是抗SS-A(57.8%)和抗Sm(36.8%)；MCTD患者抗RNP较为理想(52.6%)；PSS患者抗Scl-70最好(65.0%)，而且特异性较强；PM和DM患者抗Jo-1阳性率高(71.4%)，特异性很强；抗SS-A和抗SS-B的特异性均较差。7项指标对RA和其它器官特异性AID患者均无诊断价值。这些结果与BANKS和VON等报道的结果和结论基本一致[1，2]。:hw, 百拇医药
尽管上述7项指标在系统性AID中具有一定应用价值，但灵敏度和特异性均不令人满意。近年来，国外对左旋DNA(Z-DNA)和补骨烯交连DNA(PC-DNA)自身抗体的基础研究已获阶段性进展[3，4]，因其具有高度特异性和敏感性，故不久将成为诊断与鉴别诊断SLE与其它系统性AID 的重要手段。:hw, 百拇医药
[作者简介] 齐为民(1958-)，男，甘肃舟曲县人，主管技师，本科，主要从事肿瘤标志物的研究。:hw, 百拇医药
[参考文献]:hw, 百拇医药
[1] BANKS TA， BOBAKHANI F， POULOS-BT， et al. Characterization of cross-reactive anti-DNA autoantibodies in murine lupus[J]. Immunol Invest， 1993，22(2)：229-248.:hw, 百拇医药
[2] VON-MUHLEN CA，TAN EM.Auto antibodies in the diagnosis of systemic rheumatic diseases [J]. Semin Arthritis Rheum， 1995，24(4)：323-358.:hw, 百拇医药
[3] MOINUDDIN， ARJUMAND S， ALI A. SLE autobodies binding to native calf thymus DNA brominated in high salt[J]. Lupus， 1998，7(8)：254-262.:hw, 百拇医药
[4] HASAN R， ALI A，ALI R.Antibodies against DNA psorlen crosslink recognize unique comformation[J]. Biochem Biophys Acta， 1991，1 073(3)：509-521.:hw, 百拇医药
[收稿日期] 1999-11-23； [修回日期] 2000-01-13(齐为民 郭力 姜南燕 刘树林)
单位：齐为民(第四军医大学唐都医院检验科，陕西 西安 710038)；郭力(第四军医大学唐都医院检验科，陕西 西安 710038)；姜南燕(第四军医大学唐都医院检验科，陕西 西安 710038)；刘树林(第四军医大学唐都医院检验科，陕西 西安 710038)^4?*[a:, 百拇医药
关键词：自身抗疫性疾病；自身抗体；核酸^4?*[a:, 百拇医药
免疫学杂志000525 [中图分类号] R544.12 [文献标识码] B^4?*[a:, 百拇医药
[文章编号]1000-8861(2000)05-0395-01^4?*[a:, 百拇医药
Taxonomic determination of antinucler antibodies in the patients with systemic autoimmune diseases^4?*[a:, 百拇医药
可提取性核抗原(ENA)中抗Sm、抗u1-RNP、抗SS-A、抗SS-B、抗ScL-70和抗JO-1分别是SLE、MCTD、SS、PSS、PM与DM的标志抗体，过去用琼脂双向扩散法、免疫荧光法、对流免疫电泳法、RNA-免疫沉淀法和免疫印迹法操作烦琐，结果判断不够客观，除免疫印迹法外均不能同时测定。本文介绍的EIA法具有简便、快速、灵敏和大批量同步半定量检测的优点，易于推广应用。^4?*[a:, 百拇医药
1 材料和方法^4?*[a:, 百拇医药
1.1 研究对象^4?*[a:, 百拇医药
1.1.1 器官非特异组：检测1996～1999年临床确诊的系统性结缔组织病患者144例。其中系统性红斑狼疮(SLE)38例，类风湿关节炎(RA)33例，混合结缔组织病(MCTD)19例，全身性硬皮病(PSS)20例，多发性肌炎(PM)和皮肌炎(DM)21例，多发性大动脉炎(PMA)13例。年龄13～69岁，平均37.3岁。男36例，女108例，男女之比为1∶3。^4?*[a:, 百拇医药
1.1.2 器官特异组：检测同期器官特异性AID35例，其中溃疡性结肠炎、重症肌无力各2例，ITP5例、肾综合征(含肾小球肾炎和尿毒症各2例)13例、慢性活动性肝炎8例和多发性硬化症5例。年龄10～70岁，平均28.8岁，男22例，女13例，男女之比为1.69∶1。
1.2 试剂与检测项目 抗ds-DNA及ENA多肽抗体试剂由美国 clark实验室提供；ds-DNA为抗IgG和IgM混合物；ENA为抗IgG、IgA和IgM混合物；ENA抗体为抗Sm、抗μ1-RNP、抗SS-A、抗SS-B、抗Scl-70和抗Jo-16项。:hw, 百拇医药
1.3 同步检测法(以2个样本为例):hw, 百拇医药
分别加ENA和ds-DNA校正液于微孔板1A、2A横向孔中5 μl，加稀释液100 μl。1号患者血清纵向加于1B至1H孔中5 μl，2号样本纵向加于2B至2H 7个孔中各5 μl(96孔板检测12人)。:hw, 百拇医药
各孔加各自的酶结合物100 μl，25 °C 30 min，洗5次拍干。各孔加TMB 100 μl， 25 °C 10 min，各孔加2 N HCl 100 μl， 20 min，后于450型酶标仪测定吸光度。:hw, 百拇医药
计算及阳性判断标准：抗ENA6项及抗ds-DNA结果＝血清OD/校正液OD×已知各项目的校正系数。7项自身抗体比值≥1.10者为阳性。:hw, 百拇医药
2 结果与讨论:hw, 百拇医药
SLE患者7项指标中抗ds-DNA阳性率最高(73.8%)，其次是抗SS-A(57.8%)和抗Sm(36.8%)；MCTD患者抗RNP较为理想(52.6%)；PSS患者抗Scl-70最好(65.0%)，而且特异性较强；PM和DM患者抗Jo-1阳性率高(71.4%)，特异性很强；抗SS-A和抗SS-B的特异性均较差。7项指标对RA和其它器官特异性AID患者均无诊断价值。这些结果与BANKS和VON等报道的结果和结论基本一致[1，2]。:hw, 百拇医药
尽管上述7项指标在系统性AID中具有一定应用价值，但灵敏度和特异性均不令人满意。近年来，国外对左旋DNA(Z-DNA)和补骨烯交连DNA(PC-DNA)自身抗体的基础研究已获阶段性进展[3，4]，因其具有高度特异性和敏感性，故不久将成为诊断与鉴别诊断SLE与其它系统性AID 的重要手段。:hw, 百拇医药
[作者简介] 齐为民(1958-)，男，甘肃舟曲县人，主管技师，本科，主要从事肿瘤标志物的研究。:hw, 百拇医药
[参考文献]:hw, 百拇医药
[1] BANKS TA， BOBAKHANI F， POULOS-BT， et al. Characterization of cross-reactive anti-DNA autoantibodies in murine lupus[J]. Immunol Invest， 1993，22(2)：229-248.:hw, 百拇医药
[2] VON-MUHLEN CA，TAN EM.Auto antibodies in the diagnosis of systemic rheumatic diseases [J]. Semin Arthritis Rheum， 1995，24(4)：323-358.:hw, 百拇医药
[3] MOINUDDIN， ARJUMAND S， ALI A. SLE autobodies binding to native calf thymus DNA brominated in high salt[J]. Lupus， 1998，7(8)：254-262.:hw, 百拇医药
[4] HASAN R， ALI A，ALI R.Antibodies against DNA psorlen crosslink recognize unique comformation[J]. Biochem Biophys Acta， 1991，1 073(3)：509-521.:hw, 百拇医药
[收稿日期] 1999-11-23； [修回日期] 2000-01-13(齐为民 郭力 姜南燕 刘树林)