间接荧光抗体试验诊断黑热病效果观察
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作者：傅婷霞 毛德华 高歌 胡颖新 董红
单位：傅婷霞(山东省寄生虫病防治研究所，济宁 272033)；毛德华(山东省寄生虫病防治研究所，济宁 272033)；高歌(山东省寄生虫病防治研究所，济宁 272033)；胡颖新(山东省寄生虫病防治研究所，济宁 272033)；董红(山东省寄生虫病防治研究所，济宁 272033)
关键词：
实用寄生虫病杂志000120 中图分类号：R531.6 文献标识码：B
文章编号：1005-2534(2000)01-0011-01
对黑热病的诊断，除病原检查外，过去还应用了微量补体结合试验进行过辅助诊断，但该法操作复杂，敏感性和特异性不高，推广应用不够满意。自1978年以来我们试用微量间接荧光抗体试验(IFAT)对黑热病进行诊断，取得了较好的效果，并取代了微量补体结合试验。本试验对疑似黑热病病人首先进行了IFAT、球蛋白沉淀试验及醛凝试验，最后进行了病原学检查，并对以上三种试验做了评价。现将结果报告如下：
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 抗原制备
按参考文献[1]的方法，收集“NNN”培养基培养的利什曼原虫前鞭毛体，经洗涤后加入适量抗凝兔血推片制成薄血膜，-30℃干燥保存。
1.2 观察对象
1988年以来因肝脾肿大，发烧，贫血等症状来我所就诊者并经查阅病案做过IFAT、球蛋白沉淀试验、醛凝试验的41例病人，耳垂采血20μl滴于滤纸上，待干后以0.2ml 0.01mol/L PBS,pH7.2,37℃ 浸泡2h或4℃冰箱内过夜。
1.3 IFAT
按常规方法进行。
1.4 IFAT结果判断标准
, 百拇医药
“+++”鞭毛体呈现强黄绿色萤光，整个虫体结构及鞭毛清晰可见。“++”虫体的荧光亮度较“+++”弱，但结构较清晰。“+”虫体仍有黄绿色荧光，但亮度与虫体结构的清晰程度较差。“-”虫体暗淡不显荧光。每次试验均作阳性及阴性血清对照。阳性者在1∶20稀释的基础上，再做倍比稀释，以观察试验的最终阳性滴度。
2 结果
1988年以来，因肝脾肿大，低烧等疑似黑热病患者来我所就诊者，其中有病案记载的病人41例，均进行过IFAT，球蛋白沉淀试验，醛凝试验，有的再根据以上结果进行淋巴结、髂骨穿刺涂片查找利什曼原虫，其中7例发现利什曼原虫被确诊为黑热病病人。这7例黑热病病人血清的荧光抗体试验均显示了较强的阳性反应，其余34例为阴性。其阳性及阴性符合率为100%，7例病人血清IFAT阳性滴度在1∶1 280～20 480之间。球蛋白沉淀试验11例显阳性，假阳性率为11.8%(4/34)。醛凝试验阳性者13例，假阳性率为17.6%(6/34)。
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3 讨论
IFAT对黑热病现症病人有高度的敏感性。虽然治愈后个别病例IFAT可保持阳性反应长达10年左右，但据我们观察，在病人治愈1～2年后，抗体阳性滴度即会降至1∶80以下，抗体阳性率也大大的降低。与黑热病现症病人有明显的不同。
41例病人有7例IFAT结果为强阳性，再进行病原学检查，结果均发现了利什曼原虫。IFAT与病原检查完全相符。根据黑热病IFAT强阳性结果，再进行病原学检查，可使多数黑热病疑似病人免除穿刺的痛苦。IFAT强阳性结果再结合病史基本上可确诊黑热病。甚至在无穿刺条件的地方根据IFAT强阳性结果也可确诊黑热病。
此法简单，不需特殊仪器，标本采集容易，滤纸干血携带方便，易于保存，可以邮寄。综上所述，微量间接荧光抗体试验诊断黑热病及了解黑热病的流行情况有一定的应用价值。
参考文献
1，管立人，吴开琛，许永湘，等.滤纸干血滴作黑热病间接荧光抗体试验的观察〔J〕.流行病学杂志，1980；1(2)∶118
2，王兆俊，鲍勇，邵其峰，等.山东省黑热病防治效果的免疫学评价与有关问题的探讨〔J〕.中国寄生虫病防治杂志，1991；4(2)∶81, http://www.100md.com
单位：傅婷霞(山东省寄生虫病防治研究所，济宁 272033)；毛德华(山东省寄生虫病防治研究所，济宁 272033)；高歌(山东省寄生虫病防治研究所，济宁 272033)；胡颖新(山东省寄生虫病防治研究所，济宁 272033)；董红(山东省寄生虫病防治研究所，济宁 272033)
关键词：
实用寄生虫病杂志000120 中图分类号：R531.6 文献标识码：B
文章编号：1005-2534(2000)01-0011-01
对黑热病的诊断，除病原检查外，过去还应用了微量补体结合试验进行过辅助诊断，但该法操作复杂，敏感性和特异性不高，推广应用不够满意。自1978年以来我们试用微量间接荧光抗体试验(IFAT)对黑热病进行诊断，取得了较好的效果，并取代了微量补体结合试验。本试验对疑似黑热病病人首先进行了IFAT、球蛋白沉淀试验及醛凝试验，最后进行了病原学检查，并对以上三种试验做了评价。现将结果报告如下：
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1 材料与方法
1.1 抗原制备
按参考文献[1]的方法，收集“NNN”培养基培养的利什曼原虫前鞭毛体，经洗涤后加入适量抗凝兔血推片制成薄血膜，-30℃干燥保存。
1.2 观察对象
1988年以来因肝脾肿大，发烧，贫血等症状来我所就诊者并经查阅病案做过IFAT、球蛋白沉淀试验、醛凝试验的41例病人，耳垂采血20μl滴于滤纸上，待干后以0.2ml 0.01mol/L PBS,pH7.2,37℃ 浸泡2h或4℃冰箱内过夜。
1.3 IFAT
按常规方法进行。
1.4 IFAT结果判断标准
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“+++”鞭毛体呈现强黄绿色萤光，整个虫体结构及鞭毛清晰可见。“++”虫体的荧光亮度较“+++”弱，但结构较清晰。“+”虫体仍有黄绿色荧光，但亮度与虫体结构的清晰程度较差。“-”虫体暗淡不显荧光。每次试验均作阳性及阴性血清对照。阳性者在1∶20稀释的基础上，再做倍比稀释，以观察试验的最终阳性滴度。
2 结果
1988年以来，因肝脾肿大，低烧等疑似黑热病患者来我所就诊者，其中有病案记载的病人41例，均进行过IFAT，球蛋白沉淀试验，醛凝试验，有的再根据以上结果进行淋巴结、髂骨穿刺涂片查找利什曼原虫，其中7例发现利什曼原虫被确诊为黑热病病人。这7例黑热病病人血清的荧光抗体试验均显示了较强的阳性反应，其余34例为阴性。其阳性及阴性符合率为100%，7例病人血清IFAT阳性滴度在1∶1 280～20 480之间。球蛋白沉淀试验11例显阳性，假阳性率为11.8%(4/34)。醛凝试验阳性者13例，假阳性率为17.6%(6/34)。
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3 讨论
IFAT对黑热病现症病人有高度的敏感性。虽然治愈后个别病例IFAT可保持阳性反应长达10年左右，但据我们观察，在病人治愈1～2年后，抗体阳性滴度即会降至1∶80以下，抗体阳性率也大大的降低。与黑热病现症病人有明显的不同。
41例病人有7例IFAT结果为强阳性，再进行病原学检查，结果均发现了利什曼原虫。IFAT与病原检查完全相符。根据黑热病IFAT强阳性结果，再进行病原学检查，可使多数黑热病疑似病人免除穿刺的痛苦。IFAT强阳性结果再结合病史基本上可确诊黑热病。甚至在无穿刺条件的地方根据IFAT强阳性结果也可确诊黑热病。
此法简单，不需特殊仪器，标本采集容易，滤纸干血携带方便，易于保存，可以邮寄。综上所述，微量间接荧光抗体试验诊断黑热病及了解黑热病的流行情况有一定的应用价值。
参考文献
1，管立人，吴开琛，许永湘，等.滤纸干血滴作黑热病间接荧光抗体试验的观察〔J〕.流行病学杂志，1980；1(2)∶118
2，王兆俊，鲍勇，邵其峰，等.山东省黑热病防治效果的免疫学评价与有关问题的探讨〔J〕.中国寄生虫病防治杂志，1991；4(2)∶81, http://www.100md.com