蒿甲醚体外抗阴道毛滴虫的作用
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作者：谭苹 张国华 肖少玉
单位：谭苹(武汉科技大学医学院寄生虫学教研室，武汉 430014)；张国华(武汉科技大学医学院寄生虫学教研室，武汉 430014)；肖少玉(武汉科技大学医学院寄生虫学教研室，武汉 430014)
关键词：阴道毛滴虫；蒿甲醚；甲硝唑
实用寄生虫病杂志000106 摘要 目的：为了寻找新的高效、低毒，既能口服，又可外用的抗滴虫药物。方法：将蒿甲醚的不同浓度作用于体外培养基中的阴道毛滴虫，并与甲硝唑作比较。结果：蒿甲醚各浓度组的滴虫死亡率均高于对照组，但低于甲硝唑组。结论：蒿甲醚具有一定的抗滴虫作用，但杀虫效果不及甲硝唑。
中图分类号：R382.2+1 文献标识码：B
文章编号：1005-2534(2000)01-0017-02
, 百拇医药
IN VITRO EFFECT OF ARTEMETHER ON TRICHOMONAS VAGINALIS
Tan Ping
(Department of Parasitology, Medical College to Wuhan Science and Technology University, Wuhan 430080)
Zhang Guohua
(Department of Parasitology, Medical College to Wuhan Science and Technology University, Wuhan 430080)
Xiao Shaoyu
, 百拇医药
(Department of Parasitology, Medical College to Wuhan Science and Technology University, Wuhan 430080)
ABSTRACT Aim: To seek for trichomonacide not only with higher effect and low toxicity but for oral and external use. Method: The in vitro effect of artemether with different concentrations was compared with that of metronidazole on Trichomonas vaginalis. Results: The death rates of T.vaginalis in artemether with different concentration groups were higher than that of control groups, but lower than that of metronidazole groups. Conclusion: Artemether revealed certain effect against T.vaginalis, but the effect was no better than that of metronidazole.
, 百拇医药
Key words: Trichomonas vaginalis; artemether; metronidazole
蒿甲醚(Artemether)是青蒿素的衍生物，临床研究其对治疗抗药性恶性疟疾的作用是肯定的[1]；并可防止急性血吸虫病的发生，明显减低血吸虫的感染率和感染度[2，3]；体外实验具有抗弓形虫的作用[4]，说明蒿甲醚具有抗多种寄生虫的作用。本试验将蒿甲醚作用于体外培养基中的阴道毛滴虫，并与甲硝唑作比较，旨在寻找新的高效、低毒，既能口服，又可外用的抗滴虫药物。
1 材料与方法
1.1 培养基
选用肝浸汤培养基，pH为5.8～6.0，每试管8ml，经高压灭菌和无菌试验后，置4℃冰箱待用。接种前每管加入20%灭能无菌小牛血清，初次接种及第一、二次转种时每管加入青霉素和链霉素各10万单位。
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1.2 试验虫株
取自武钢医院妇产科门诊滴虫性阴道炎患者的阴道分泌物，接种于培养管内，每3～4天转种一次，保种4周后开始试验。
1.3 药物
蒿甲醚(Artemether,Art)注射液，昆明制药厂生产，批号：960332.4，该注射液为无色澄明油溶液，实验时加吐温-80助溶。
甲硝唑(Metronidazole)注射液，武汉制药厂生产，批号：98032701。
1.4 实验分组
本试验设蒿甲醚0.2mg/ml、2mg/ml、6mg/ml三种浓度，甲硝唑0.02mg/ml、0.2mg/ml、0.6mg/ml三种浓度，每一浓度组均为5支试管，同时设0.05mg/ml吐温-80及无药培养液组各2支试管。
, 百拇医药
1.5 方法
取传代培养48h之培养管，用消毒吸管吸去上清液，加入温培养液4ml，低速离心(3 000r/min，10分钟)，弃去上清液，将浓缩液摇荡混匀后吸取0.1ml滴于血球计数器内计数，然后将含虫培养液0.8ml加入事先准备好的各实验培养管内，使每管虫数为6.4×105个。
将全部试验管放入37℃温箱中培养，于加药后4、8、24、48h分别吸取各管虫液滴片镜检。观察记录虫体形态，活动情况及死亡虫体所占百分比。死亡以虫体变圆，鞭毛和波动膜不运动甚至缺失，虫体轮廓模糊，边缘不整，失去原有的透明度，内含大量颗粒或完全颗粒变性为标准[5]。死亡率(%)=死亡滴虫数/观察的滴虫数×100%。本试验重复进行2次。
2 结果
蒿甲醚与甲硝唑在不同浓度及不同时间的杀虫效果见附表。表中每一数据皆为同浓度组实验管所得数据的平均值，重复试验数据基本相同。
, 百拇医药
将表中蒿甲醚各浓度组分别与同一时间的无药对照组比较，各用药组的滴虫死亡率均高于对照组(P<0.05)，且随蒿甲醚实验组用药浓度的增加和时间的延长，在24h内滴虫的死亡率逐渐升高，但用药后48h滴虫的死亡率反而下降，将蒿甲醚各浓度组分别与同一时间下1/10量的甲硝唑组比较，蒿甲醚各组的死亡率均低于甲硝唑组，除0.2mg/ml蒿甲醚组与0.02mg/ml甲硝唑组在4h无显著性差异(P>0.05)外，其余各组均具有非常显著性差异(P<0.01)。
附表 蒿甲醚体外抗阴道毛滴虫的效果 药物
浓度(mg/ml)
加药后滴虫死亡率(%)
4h
8h
24h
, 百拇医药
48h
蒿甲醚
0.2
8
12.7
16.5
10.2
2
17.2
29.6
41.8
33.5
6
, 百拇医药
19.7
38.5
57.2
49.8
甲硝唑
0.02
11.5
70.7
0
0
0.2
84.8
0
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0
0
0.6
99.5
0
0
0
吐温-80
0.05
0
1
1.5
2.5
无药物对照组
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1
1
1.8
2
3 讨论
体外实验结果表明，蒿甲醚在0.2mg/ml、2mg/ml、6mg/ml三种浓度时，对滴虫均有杀灭作用，且随药物浓度的增加和时间的延长，在24h内滴虫的死亡率逐渐升高，即药物浓度和作用时间与杀虫效果成正相关。但用药后48h滴虫的死亡率反而低于24h的死亡率，说明在上述三种浓度的蒿甲醚中，48h的滴虫增殖速度高于死亡速度，故蒿甲醚用于抗滴虫的有效剂量尚需进一步研究。
蒿甲醚各浓度组分别与同一时间下1/10量的甲硝唑组相比，蒿甲醚各组的死亡率均低于甲硝唑组，说明蒿甲醚在高于甲硝唑剂量10倍的浓度下，其杀虫作用不及甲硝唑。
, 百拇医药
陈乐义等曾观察Art对小鼠体内伯氏疟原虫超微结构的影响，结果发现虫体最早变化出现在线粒体[6]。Kawai等研究了在电镜下Art对夜猴体内恶性疟原虫形态的影响，同样认为主要作用于线粒体[7]。刘杨等观察了蒿甲醚对小鼠体内弓形虫作用的超微结构，发现电镜下弓形虫速殖子发生明显病理改变，药物主要作用于虫体细胞膜、线粒体及细胞核，继而广泛损伤其它膜系结构[8]。故推测Art的杀虫位点主要在线粒体，而杜之呜等报道阴道毛滴虫的超微结构中未发现线粒体[9]，酶的定位中，线粒体的标志酶，即：琥珀酸脱氢酶、细胞色素氧化酶均为阴性[10]。因此认为阴道毛滴虫缺乏线粒体，推测Art对阴道毛滴虫的作用位点仅限于细胞膜及其它膜系结构，是Art具有一定抗滴虫作用但杀虫效果不够理想的可能原因。
参考文献
1，车立刚，张有林，李兴亮，等.复方蒿甲醚片治疗抗药性恶性疟临床研究〔J〕.中国寄生虫病防治杂志，1995；8(4)∶244
, http://www.100md.com
2，王家龙，肖树华，杨忠，等.云南山区血吸虫病流行区用口服蒿甲醚控制血吸虫病的观察〔J〕.中国寄生虫学与寄生虫病杂志，1997；15(3)∶138
3，宋宇，肖树华，吴伟，等.蒿甲醚预防抗洪抢险人群感染血吸虫病的观察〔J〕.中国寄生虫学与寄生虫病杂志，1997；15(3)∶133
4，刘杨，张永浩，李哲，等.蒿甲醚体外抗弓形虫作用的实验研究〔J〕.中国寄生虫学与寄生虫病杂志，1997；15(6)∶366
5，傅艳华，孙秀琴，蔺淑芳.几种药物体外抗阴道毛滴虫效果观察〔J〕.中国寄生虫病防治杂志，1993；6∶61
6，陈乐义，胡明，张起麟，等.蒿甲醚对小鼠体内伯氏疟原虫超微结构的影响〔J〕.中国寄生虫学与寄生虫病杂志，1988；8(特辑)∶18
, http://www.100md.com 7，Kawai S,Kano S,Suzuki M.Morphologic effects of arteme-ther on Plasmodium falciparum in Aotus trivirgatus〔J〕.Am J Trop Med Hyg,1993;49∶812
8，刘杨，杨少毅，张永浩，等.蒿甲醚对小鼠体内弓形虫作用的超微结构研究〔J〕.中国寄生虫病防治杂志，1996；9∶207
9，杜之呜，周文琴，韩文素，等.阴道毛滴虫超微结构的进一步观察〔J〕.中国寄生虫学与寄生虫病杂志，1990；8(1)∶47
10，蔡蕙珍，陈文列，钟秀容，等.阴道毛滴虫酶的定位与代谢的研究〔J〕.中国寄生虫病防治杂志，1993；6∶256, 百拇医药
单位：谭苹(武汉科技大学医学院寄生虫学教研室，武汉 430014)；张国华(武汉科技大学医学院寄生虫学教研室，武汉 430014)；肖少玉(武汉科技大学医学院寄生虫学教研室，武汉 430014)
关键词：阴道毛滴虫；蒿甲醚；甲硝唑
实用寄生虫病杂志000106 摘要 目的：为了寻找新的高效、低毒，既能口服，又可外用的抗滴虫药物。方法：将蒿甲醚的不同浓度作用于体外培养基中的阴道毛滴虫，并与甲硝唑作比较。结果：蒿甲醚各浓度组的滴虫死亡率均高于对照组，但低于甲硝唑组。结论：蒿甲醚具有一定的抗滴虫作用，但杀虫效果不及甲硝唑。
中图分类号：R382.2+1 文献标识码：B
文章编号：1005-2534(2000)01-0017-02
, 百拇医药
IN VITRO EFFECT OF ARTEMETHER ON TRICHOMONAS VAGINALIS
Tan Ping
(Department of Parasitology, Medical College to Wuhan Science and Technology University, Wuhan 430080)
Zhang Guohua
(Department of Parasitology, Medical College to Wuhan Science and Technology University, Wuhan 430080)
Xiao Shaoyu
, 百拇医药
(Department of Parasitology, Medical College to Wuhan Science and Technology University, Wuhan 430080)
ABSTRACT Aim: To seek for trichomonacide not only with higher effect and low toxicity but for oral and external use. Method: The in vitro effect of artemether with different concentrations was compared with that of metronidazole on Trichomonas vaginalis. Results: The death rates of T.vaginalis in artemether with different concentration groups were higher than that of control groups, but lower than that of metronidazole groups. Conclusion: Artemether revealed certain effect against T.vaginalis, but the effect was no better than that of metronidazole.
, 百拇医药
Key words: Trichomonas vaginalis; artemether; metronidazole
蒿甲醚(Artemether)是青蒿素的衍生物，临床研究其对治疗抗药性恶性疟疾的作用是肯定的[1]；并可防止急性血吸虫病的发生，明显减低血吸虫的感染率和感染度[2，3]；体外实验具有抗弓形虫的作用[4]，说明蒿甲醚具有抗多种寄生虫的作用。本试验将蒿甲醚作用于体外培养基中的阴道毛滴虫，并与甲硝唑作比较，旨在寻找新的高效、低毒，既能口服，又可外用的抗滴虫药物。
1 材料与方法
1.1 培养基
选用肝浸汤培养基，pH为5.8～6.0，每试管8ml，经高压灭菌和无菌试验后，置4℃冰箱待用。接种前每管加入20%灭能无菌小牛血清，初次接种及第一、二次转种时每管加入青霉素和链霉素各10万单位。
, http://www.100md.com
1.2 试验虫株
取自武钢医院妇产科门诊滴虫性阴道炎患者的阴道分泌物，接种于培养管内，每3～4天转种一次，保种4周后开始试验。
1.3 药物
蒿甲醚(Artemether,Art)注射液，昆明制药厂生产，批号：960332.4，该注射液为无色澄明油溶液，实验时加吐温-80助溶。
甲硝唑(Metronidazole)注射液，武汉制药厂生产，批号：98032701。
1.4 实验分组
本试验设蒿甲醚0.2mg/ml、2mg/ml、6mg/ml三种浓度，甲硝唑0.02mg/ml、0.2mg/ml、0.6mg/ml三种浓度，每一浓度组均为5支试管，同时设0.05mg/ml吐温-80及无药培养液组各2支试管。
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1.5 方法
取传代培养48h之培养管，用消毒吸管吸去上清液，加入温培养液4ml，低速离心(3 000r/min，10分钟)，弃去上清液，将浓缩液摇荡混匀后吸取0.1ml滴于血球计数器内计数，然后将含虫培养液0.8ml加入事先准备好的各实验培养管内，使每管虫数为6.4×105个。
将全部试验管放入37℃温箱中培养，于加药后4、8、24、48h分别吸取各管虫液滴片镜检。观察记录虫体形态，活动情况及死亡虫体所占百分比。死亡以虫体变圆，鞭毛和波动膜不运动甚至缺失，虫体轮廓模糊，边缘不整，失去原有的透明度，内含大量颗粒或完全颗粒变性为标准[5]。死亡率(%)=死亡滴虫数/观察的滴虫数×100%。本试验重复进行2次。
2 结果
蒿甲醚与甲硝唑在不同浓度及不同时间的杀虫效果见附表。表中每一数据皆为同浓度组实验管所得数据的平均值，重复试验数据基本相同。
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将表中蒿甲醚各浓度组分别与同一时间的无药对照组比较，各用药组的滴虫死亡率均高于对照组(P<0.05)，且随蒿甲醚实验组用药浓度的增加和时间的延长，在24h内滴虫的死亡率逐渐升高，但用药后48h滴虫的死亡率反而下降，将蒿甲醚各浓度组分别与同一时间下1/10量的甲硝唑组比较，蒿甲醚各组的死亡率均低于甲硝唑组，除0.2mg/ml蒿甲醚组与0.02mg/ml甲硝唑组在4h无显著性差异(P>0.05)外，其余各组均具有非常显著性差异(P<0.01)。
附表 蒿甲醚体外抗阴道毛滴虫的效果 药物
浓度(mg/ml)
加药后滴虫死亡率(%)
4h
8h
24h
, 百拇医药
48h
蒿甲醚
0.2
8
12.7
16.5
10.2
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17.2
29.6
41.8
33.5
6
, 百拇医药
19.7
38.5
57.2
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甲硝唑
0.02
11.5
70.7
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0
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0.6
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吐温-80
0.05
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1.5
2.5
无药物对照组
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1
1
1.8
2
3 讨论
体外实验结果表明，蒿甲醚在0.2mg/ml、2mg/ml、6mg/ml三种浓度时，对滴虫均有杀灭作用，且随药物浓度的增加和时间的延长，在24h内滴虫的死亡率逐渐升高，即药物浓度和作用时间与杀虫效果成正相关。但用药后48h滴虫的死亡率反而低于24h的死亡率，说明在上述三种浓度的蒿甲醚中，48h的滴虫增殖速度高于死亡速度，故蒿甲醚用于抗滴虫的有效剂量尚需进一步研究。
蒿甲醚各浓度组分别与同一时间下1/10量的甲硝唑组相比，蒿甲醚各组的死亡率均低于甲硝唑组，说明蒿甲醚在高于甲硝唑剂量10倍的浓度下，其杀虫作用不及甲硝唑。
, 百拇医药
陈乐义等曾观察Art对小鼠体内伯氏疟原虫超微结构的影响，结果发现虫体最早变化出现在线粒体[6]。Kawai等研究了在电镜下Art对夜猴体内恶性疟原虫形态的影响，同样认为主要作用于线粒体[7]。刘杨等观察了蒿甲醚对小鼠体内弓形虫作用的超微结构，发现电镜下弓形虫速殖子发生明显病理改变，药物主要作用于虫体细胞膜、线粒体及细胞核，继而广泛损伤其它膜系结构[8]。故推测Art的杀虫位点主要在线粒体，而杜之呜等报道阴道毛滴虫的超微结构中未发现线粒体[9]，酶的定位中，线粒体的标志酶，即：琥珀酸脱氢酶、细胞色素氧化酶均为阴性[10]。因此认为阴道毛滴虫缺乏线粒体，推测Art对阴道毛滴虫的作用位点仅限于细胞膜及其它膜系结构，是Art具有一定抗滴虫作用但杀虫效果不够理想的可能原因。
参考文献
1，车立刚，张有林，李兴亮，等.复方蒿甲醚片治疗抗药性恶性疟临床研究〔J〕.中国寄生虫病防治杂志，1995；8(4)∶244
, http://www.100md.com
2，王家龙，肖树华，杨忠，等.云南山区血吸虫病流行区用口服蒿甲醚控制血吸虫病的观察〔J〕.中国寄生虫学与寄生虫病杂志，1997；15(3)∶138
3，宋宇，肖树华，吴伟，等.蒿甲醚预防抗洪抢险人群感染血吸虫病的观察〔J〕.中国寄生虫学与寄生虫病杂志，1997；15(3)∶133
4，刘杨，张永浩，李哲，等.蒿甲醚体外抗弓形虫作用的实验研究〔J〕.中国寄生虫学与寄生虫病杂志，1997；15(6)∶366
5，傅艳华，孙秀琴，蔺淑芳.几种药物体外抗阴道毛滴虫效果观察〔J〕.中国寄生虫病防治杂志，1993；6∶61
6，陈乐义，胡明，张起麟，等.蒿甲醚对小鼠体内伯氏疟原虫超微结构的影响〔J〕.中国寄生虫学与寄生虫病杂志，1988；8(特辑)∶18
, http://www.100md.com 7，Kawai S,Kano S,Suzuki M.Morphologic effects of arteme-ther on Plasmodium falciparum in Aotus trivirgatus〔J〕.Am J Trop Med Hyg,1993;49∶812
8，刘杨，杨少毅，张永浩，等.蒿甲醚对小鼠体内弓形虫作用的超微结构研究〔J〕.中国寄生虫病防治杂志，1996；9∶207
9，杜之呜，周文琴，韩文素，等.阴道毛滴虫超微结构的进一步观察〔J〕.中国寄生虫学与寄生虫病杂志，1990；8(1)∶47
10，蔡蕙珍，陈文列，钟秀容，等.阴道毛滴虫酶的定位与代谢的研究〔J〕.中国寄生虫病防治杂志，1993；6∶256, 百拇医药