用细菌／杆状病毒系统在昆虫细胞中表达HIV-2 外膜糖蛋白gp105和跨膜糖蛋白gp36
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作者：张应玖 金宁一 金善荣 王宏伟 沈家骢
单位：张应玖 沈家骢(吉林大学生命科学学院，吉林 长春 130023)；金宁一 王宏伟(解放军军需大学基因工程实验室，吉林 长春 130062)；金善荣(汉城大学遗传工程研究所)
关键词：HIV-2；gp105；gp36；杆状病毒；昆虫细胞
免疫学杂志010104 摘 要：目的 用细菌/杆状病毒(BactoBac)表达系统在昆虫细胞Sf9中表达HIV-2外膜糖蛋白gp105和跨膜糖蛋白gp36，为研制艾滋病疫苗和诊断试剂奠定基础。方法 分别将HIV-2外膜蛋白gp105和跨膜蛋白gp36全基因序列克隆到杆状病毒转座载体pFastBacHTa和pFastBacHTb中多角体启动子下游，构建成重组转座载体pFastBacHTa-gp105和pFastBacHTb-gp36，利用细菌/杆状病毒(BactoBac)表达系统筛选重组杆状病毒，并在昆虫细胞Sf9中表达HIV-2的gp105和gp36。结果 SDS-PAGE分析结果表明，gp105基因表达产物为一66000u糖蛋白，gp36基因则表达一41000u糖蛋白，与天然产物一致。Westernblot结果显示：两者均具有抗原特异性。结论 gp105和gp36在昆虫细胞中得到了高效表达，并均被糖基化；gp105接近天然产物，gp36与天然产物一致。
, 百拇医药
分类号：R392 文献标识码：A
文章编号：1000-8861(2001)01-0013-04
Expression of external glycoprotein gp105 and transmembrane glycoprotein gp36 of human immunodeficiency virus type 2 in insect cell by Bac-to-Bac system
ZHANG Ying-jiu(College of Life Science， Jilin University， Changchun 130023，China)
JIN Ning-yi(Genetic Engineering Laboratory， the Quartermaster University of PLA， Changchun 130062，China)
, 百拇医药
KIM Sun-yong(Genetic Engineering institute of Seoul University)
WANG Hong-wei(Genetic Engineering Laboratory， the Quartermaster University of PLA， Changchun 130062，China)
SHEN Jia-cong(College of Life Science， Jilin University， Changchun 130023，China)
Abstract：Objective To develop effective vaccine and diagnostic agents of AIDS， the external glycoprotein gp105 and transmembrane glycoprotein gp36 of human immunodeficiency virus type 2 were expressed in insect cells Spodoptera frugiperda (Sf9) using baculovirus expression system ： Bac-to-Bac system. Methods The recombinant transfer vector pFast Bac HTa-gp105 and pFast Bac HTb-gp36 were constructed by cloning HIV-2 gp105 gene and gp36 gene into the end of polyhedrin promoter of baculovirus transfer vector pFast Bac HTa and pFast Bac HTb respectively. HIV-2 external glycoprotein gp105 and transmembrane glycoprotein gp36 were expressed in insect cells Spodoptera frugiperda (Sf9) by transposing these two foreign genes to shuttle vector bacmid respectively using Bac-to-Bac system. Results The resulting products determined by SDS-PAGE showed that recombinant baculovirusescontaining gp105 gene expressed a 66 kDa glycoprotein， whereas those contai-ning gp36 gene generated a 41 000u glycoprotein， the apparent molecular weight of which is equivalent to that of natural gp36. Western blot indicated that both gp105 and gp36 showed antigenic specificity. Conclusions gp105 and gp36 has been expressed in insect cells Spodoptera frugiperda (Sf9) using baculovirus expression system.
, 百拇医药
Keywords：HIV-2；gp105；gp36；baculovirus；Spodoptera frugiperda (Sf9)
基金项目：国家杰出青年基金资助项目(39825119)
作者简介：张应玖(1962-)，女，吉林长春市人，副教授，博士，主要从事蛋白质结构与功能的研究。Tel：(0431)8922331-3762； E-mail：zyingjiu＠public.cc.jl.cn
参考文献：
[1]Boeri E， Giri A，Lillo F. In vivo genetic variability of the human immunodeficiency virus type 2 V3 region[J]. J Viral， 1992， 66(7) ： 4 546-4 550.
, 百拇医药
[2]Baiter M. How does HIV overcome the body ’s T cell bodyguards[J]. Science， 1997，278(5 342) ：1 399-1 403.
[3]Garzino-Demo A， Devico AL， Gallo RC. Chemokine receptors and chemokines in HIV infection[J]. J Clin Immunol， 1998， 18(4) ：243-255.
[4]Sambrook J， Fritsch EF， Maniatis T. Molecular Cloning[A].In： A laboratory manual[M]. 2nd ed. New York ： Cold Spring Harbor Laboratory Press， 1989. 16-69.
, 百拇医药 [5]Matsuura Y， Possee RD， Overton HA. Baculovirus expression vectors ： the requirements for high-level expression of proteins， including glycoproteins[J]. J Gen Viral， 1987，68(5) ： 1 233-1 250.
[6]Luckow VA， Lee SC， Barry GF. Efficient generation of infectious recombinant baculovirus by site-specific transposing - mediated insertion foreign gene into baculovirus genome propagated in Escherichia coli[J]. J Virol， 1993， 67(8) ： 4 566-4 579.
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[7]齐义鹏.基因及其操作原理[M].武汉：武汉大学出版社，1998. 105-152.
[8]Guyader M， Emerman M， Sonigo P. Genome organization and transactivation of the human immunodeficiency virus type 2[J]. Nature， 1987， 326(16)： 662-669.
收稿日期：2000年8月29日
修稿日期：2000年10月16日
出版日期：2001年1月15日, 百拇医药
单位：张应玖 沈家骢(吉林大学生命科学学院，吉林 长春 130023)；金宁一 王宏伟(解放军军需大学基因工程实验室，吉林 长春 130062)；金善荣(汉城大学遗传工程研究所)
关键词：HIV-2；gp105；gp36；杆状病毒；昆虫细胞
免疫学杂志010104 摘 要：目的 用细菌/杆状病毒(BactoBac)表达系统在昆虫细胞Sf9中表达HIV-2外膜糖蛋白gp105和跨膜糖蛋白gp36，为研制艾滋病疫苗和诊断试剂奠定基础。方法 分别将HIV-2外膜蛋白gp105和跨膜蛋白gp36全基因序列克隆到杆状病毒转座载体pFastBacHTa和pFastBacHTb中多角体启动子下游，构建成重组转座载体pFastBacHTa-gp105和pFastBacHTb-gp36，利用细菌/杆状病毒(BactoBac)表达系统筛选重组杆状病毒，并在昆虫细胞Sf9中表达HIV-2的gp105和gp36。结果 SDS-PAGE分析结果表明，gp105基因表达产物为一66000u糖蛋白，gp36基因则表达一41000u糖蛋白，与天然产物一致。Westernblot结果显示：两者均具有抗原特异性。结论 gp105和gp36在昆虫细胞中得到了高效表达，并均被糖基化；gp105接近天然产物，gp36与天然产物一致。
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分类号：R392 文献标识码：A
文章编号：1000-8861(2001)01-0013-04
Expression of external glycoprotein gp105 and transmembrane glycoprotein gp36 of human immunodeficiency virus type 2 in insect cell by Bac-to-Bac system
ZHANG Ying-jiu(College of Life Science， Jilin University， Changchun 130023，China)
JIN Ning-yi(Genetic Engineering Laboratory， the Quartermaster University of PLA， Changchun 130062，China)
, 百拇医药
KIM Sun-yong(Genetic Engineering institute of Seoul University)
WANG Hong-wei(Genetic Engineering Laboratory， the Quartermaster University of PLA， Changchun 130062，China)
SHEN Jia-cong(College of Life Science， Jilin University， Changchun 130023，China)
Abstract：Objective To develop effective vaccine and diagnostic agents of AIDS， the external glycoprotein gp105 and transmembrane glycoprotein gp36 of human immunodeficiency virus type 2 were expressed in insect cells Spodoptera frugiperda (Sf9) using baculovirus expression system ： Bac-to-Bac system. Methods The recombinant transfer vector pFast Bac HTa-gp105 and pFast Bac HTb-gp36 were constructed by cloning HIV-2 gp105 gene and gp36 gene into the end of polyhedrin promoter of baculovirus transfer vector pFast Bac HTa and pFast Bac HTb respectively. HIV-2 external glycoprotein gp105 and transmembrane glycoprotein gp36 were expressed in insect cells Spodoptera frugiperda (Sf9) by transposing these two foreign genes to shuttle vector bacmid respectively using Bac-to-Bac system. Results The resulting products determined by SDS-PAGE showed that recombinant baculovirusescontaining gp105 gene expressed a 66 kDa glycoprotein， whereas those contai-ning gp36 gene generated a 41 000u glycoprotein， the apparent molecular weight of which is equivalent to that of natural gp36. Western blot indicated that both gp105 and gp36 showed antigenic specificity. Conclusions gp105 and gp36 has been expressed in insect cells Spodoptera frugiperda (Sf9) using baculovirus expression system.
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Keywords：HIV-2；gp105；gp36；baculovirus；Spodoptera frugiperda (Sf9)
基金项目：国家杰出青年基金资助项目(39825119)
作者简介：张应玖(1962-)，女，吉林长春市人，副教授，博士，主要从事蛋白质结构与功能的研究。Tel：(0431)8922331-3762； E-mail：zyingjiu＠public.cc.jl.cn
参考文献：
[1]Boeri E， Giri A，Lillo F. In vivo genetic variability of the human immunodeficiency virus type 2 V3 region[J]. J Viral， 1992， 66(7) ： 4 546-4 550.
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[2]Baiter M. How does HIV overcome the body ’s T cell bodyguards[J]. Science， 1997，278(5 342) ：1 399-1 403.
[3]Garzino-Demo A， Devico AL， Gallo RC. Chemokine receptors and chemokines in HIV infection[J]. J Clin Immunol， 1998， 18(4) ：243-255.
[4]Sambrook J， Fritsch EF， Maniatis T. Molecular Cloning[A].In： A laboratory manual[M]. 2nd ed. New York ： Cold Spring Harbor Laboratory Press， 1989. 16-69.
, 百拇医药 [5]Matsuura Y， Possee RD， Overton HA. Baculovirus expression vectors ： the requirements for high-level expression of proteins， including glycoproteins[J]. J Gen Viral， 1987，68(5) ： 1 233-1 250.
[6]Luckow VA， Lee SC， Barry GF. Efficient generation of infectious recombinant baculovirus by site-specific transposing - mediated insertion foreign gene into baculovirus genome propagated in Escherichia coli[J]. J Virol， 1993， 67(8) ： 4 566-4 579.
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[7]齐义鹏.基因及其操作原理[M].武汉：武汉大学出版社，1998. 105-152.
[8]Guyader M， Emerman M， Sonigo P. Genome organization and transactivation of the human immunodeficiency virus type 2[J]. Nature， 1987， 326(16)： 662-669.
收稿日期：2000年8月29日
修稿日期：2000年10月16日
出版日期：2001年1月15日, 百拇医药