阿米巴肝脓肿病人血清NO和TNFα的水平
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作者：朱家勇 魏泉德 陈传
单位：广东医学院寄生虫学教研室(湛江，524023)
关键词：
中国人兽共患病杂志990242 80年代末，自内源性NO被发现以来，其生物学作用日益被引起重视。NO具有许多生理功能，在抗寄生虫感染上发挥着重要作用。溶组织内阿米巴原虫在体外对NO介导的杀伤作用敏感，TNFα可作用于巨噬细胞等细胞而诱导NO的产生。阿米巴肝脓肿病人的NO水平及作用如何，未见有关报道。为此，我们测定了25例阿米巴肝脓肿病人血清中NO的含量，同时检测了病人血清中TNFα的水平。
1 材料和方法
1.1 研究对象 25例临床证实为阿米巴肝脓肿病人均为本院传染科住院病人，男14例，女11例，年龄20～59。病人入院后治疗前，抽取静脉血，常规分离血清，保存于-20℃，待检。正常对照组32份健康人血清均采自本院健康体检者。
, 百拇医药
1.2 NO的测定 NO测试盒由军事医学科学院提供，按说明书操作。用VIS-723型分光光度计(上海第三分析仪器厂产品)，545nm比色，读OD值。用亚硝酸钠为标准品，绘制标准曲线，根据样品OD值，按标准曲线计算NO含量。
1.3 TNFα的测定 TNFα酶联免疫检测试剂盒由军事医学科学院提供。采用双单克隆抗体夹心法，以波长492nm比色，测OD值(酶联免疫检测仪系华东电子管厂DG-3022型)，绘制标准曲线，从标准曲线上查找样品对应浓度，确定样品含量。
2 结果
2.1 NO测定结果 25例阿米巴肝脓肿病人血清NO的含量平均为59.43±2.91μM，显著高于正常对照组NO为50.04±6.23μM(P<0.05)(表1)。
2.2 TNFα测定结果 25例阿米巴肝脓肿病人血清TNFα的含量平均为0.876±0.251mg/ml，显著地高于正常对照组(0.118±0.051mg/ml)(P<0.01)(表1)。
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表1 25例阿米巴肝脓肿病人血清
NO和TNFα水平的测定结果(x±s) 组别
例数
NO
(μM)
TNFα
(mg/ml)
病人
25
59.43±2.91
0.876±0.251
健康人
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32
50.04±6.23
0.118±0.051
3 讨论
近些年来，发现NO具有抑制和杀伤原虫和蠕虫的作用。NO对溶组织内阿米巴原虫、利什曼原虫、锥虫、疟原虫、弓形虫、血吸虫等寄生虫具较强的抑制和杀伤作用[1-5]，其抑制和杀伤效应主要依赖其细胞毒作用以及在对寄生虫的生化代谢和信息传导通路的障碍作用[6-8]。NO主要由巨噬细胞和中性粒细胞产生，细胞因子中IFN-γ，TNFα和IL-I等可作用于巨噬细胞等细胞而诱导NO的产生[9]本文检测了25例阿米巴肝脓肿病人的NO，发现其水平显著地高于正常对照组的NO水平；同时测定了这批病人血清的TNFα的水平，也非常显著地高于正常对照组TNFα的水平。这可能为阿米巴肝脓肿病人体内的溶组织内阿米巴原虫与巨噬细胞接触后，刺激巨噬细胞产生TNFα，而TNFα则通过增加巨噬细胞的诱导型NO合酶(iNOS)的mRN A表达而增加NO的产生[1]。
, 百拇医药
国外学者研究表明，TNFα活化巨噬细胞产生的NO可杀灭组织内62%～73%的阿米巴[10]。本文结果表明了病人体内NO水平的升高，NO和TNFα一样，在宿主体内抗溶组织内阿米巴原虫感染方面是一种重要的防御性介质，由NO介导的杀灭效应在阿米巴肝脓病程中起着重要作用。 4 参考文献
1.Lin JY，et al.Tumor necrosis factor alpha augments nitric oxide-dependent macroph age cytotoxicity against Entamoeba histoly tica by enhanced expression of the nitric oxide syntheses gene.Infect Immunol，1994，62(5)：1534.
2.Liew FY，et al.Macrophage Killing of leishmania parasite in vivo is mediated by nitric oxide from L-arginine.J Immunol，1990，144(12)：4794.
, 百拇医药
3.Torrico F，et al.Endogenous IFN-r is required for resistance to acute trypan osoma cruzi infection mice.J Immunol，1991，146(10)：3626.
4.Mellouk S，et al.IFN-r inhibits development of Plasmodium berghei exoerythrocytic stages in hepatocytes by an Larginine-dependent effector mechanism，J Immunol，1991，146(10)：3971.
5.Wynn TA，et al.Elevated expression of Thl cytokines and nitric oxide synthase in the lungs of vaccinated mice after challenge infection with Schintosoma manaoni.J Immunol，1994，153(11)：5200.
, 百拇医药
6.Radi R，et al.Peroxynitrite oxidation of sulfhydryls：The cytotoxic potential of superoxide and nitric oxide.J Biol Chem，1991，266(7)：4244.
7.Radi R，et al.Peroxynitrite-induced membrane lipid peroxidation：the cytotoxic potential of superoxide and nitric oxide.Arch Biochem Biophys，1991，288(2)：481.
8.Cross SS，et al.Nitric oxide：Pathophy siological mechanisms.Annu Rev Physiol，1995，57：737.
9.Seguin R，et al.The tumor necrosis factor alpha-stimulating region of galactose-inhibitable lectin of Entamoeba histolytica activates gamma interferon-primed macro phages for amebicidal activity medi ated by nitric oxide.Infect Immun，1997，65(7)：2552.
10.Lin JY，et al.Macrophage cytotoxicity against Entamoeba histolytica trophozoites is mediated by nitric oxide from L-arginine.J Immunol，1992，148(12)：3999.
1998年3月27日收稿, 百拇医药
单位：广东医学院寄生虫学教研室(湛江，524023)
关键词：
中国人兽共患病杂志990242 80年代末，自内源性NO被发现以来，其生物学作用日益被引起重视。NO具有许多生理功能，在抗寄生虫感染上发挥着重要作用。溶组织内阿米巴原虫在体外对NO介导的杀伤作用敏感，TNFα可作用于巨噬细胞等细胞而诱导NO的产生。阿米巴肝脓肿病人的NO水平及作用如何，未见有关报道。为此，我们测定了25例阿米巴肝脓肿病人血清中NO的含量，同时检测了病人血清中TNFα的水平。
1 材料和方法
1.1 研究对象 25例临床证实为阿米巴肝脓肿病人均为本院传染科住院病人，男14例，女11例，年龄20～59。病人入院后治疗前，抽取静脉血，常规分离血清，保存于-20℃，待检。正常对照组32份健康人血清均采自本院健康体检者。
, 百拇医药
1.2 NO的测定 NO测试盒由军事医学科学院提供，按说明书操作。用VIS-723型分光光度计(上海第三分析仪器厂产品)，545nm比色，读OD值。用亚硝酸钠为标准品，绘制标准曲线，根据样品OD值，按标准曲线计算NO含量。
1.3 TNFα的测定 TNFα酶联免疫检测试剂盒由军事医学科学院提供。采用双单克隆抗体夹心法，以波长492nm比色，测OD值(酶联免疫检测仪系华东电子管厂DG-3022型)，绘制标准曲线，从标准曲线上查找样品对应浓度，确定样品含量。
2 结果
2.1 NO测定结果 25例阿米巴肝脓肿病人血清NO的含量平均为59.43±2.91μM，显著高于正常对照组NO为50.04±6.23μM(P<0.05)(表1)。
2.2 TNFα测定结果 25例阿米巴肝脓肿病人血清TNFα的含量平均为0.876±0.251mg/ml，显著地高于正常对照组(0.118±0.051mg/ml)(P<0.01)(表1)。
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表1 25例阿米巴肝脓肿病人血清
NO和TNFα水平的测定结果(x±s) 组别
例数
NO
(μM)
TNFα
(mg/ml)
病人
25
59.43±2.91
0.876±0.251
健康人
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32
50.04±6.23
0.118±0.051
3 讨论
近些年来，发现NO具有抑制和杀伤原虫和蠕虫的作用。NO对溶组织内阿米巴原虫、利什曼原虫、锥虫、疟原虫、弓形虫、血吸虫等寄生虫具较强的抑制和杀伤作用[1-5]，其抑制和杀伤效应主要依赖其细胞毒作用以及在对寄生虫的生化代谢和信息传导通路的障碍作用[6-8]。NO主要由巨噬细胞和中性粒细胞产生，细胞因子中IFN-γ，TNFα和IL-I等可作用于巨噬细胞等细胞而诱导NO的产生[9]本文检测了25例阿米巴肝脓肿病人的NO，发现其水平显著地高于正常对照组的NO水平；同时测定了这批病人血清的TNFα的水平，也非常显著地高于正常对照组TNFα的水平。这可能为阿米巴肝脓肿病人体内的溶组织内阿米巴原虫与巨噬细胞接触后，刺激巨噬细胞产生TNFα，而TNFα则通过增加巨噬细胞的诱导型NO合酶(iNOS)的mRN A表达而增加NO的产生[1]。
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国外学者研究表明，TNFα活化巨噬细胞产生的NO可杀灭组织内62%～73%的阿米巴[10]。本文结果表明了病人体内NO水平的升高，NO和TNFα一样，在宿主体内抗溶组织内阿米巴原虫感染方面是一种重要的防御性介质，由NO介导的杀灭效应在阿米巴肝脓病程中起着重要作用。 4 参考文献
1.Lin JY，et al.Tumor necrosis factor alpha augments nitric oxide-dependent macroph age cytotoxicity against Entamoeba histoly tica by enhanced expression of the nitric oxide syntheses gene.Infect Immunol，1994，62(5)：1534.
2.Liew FY，et al.Macrophage Killing of leishmania parasite in vivo is mediated by nitric oxide from L-arginine.J Immunol，1990，144(12)：4794.
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3.Torrico F，et al.Endogenous IFN-r is required for resistance to acute trypan osoma cruzi infection mice.J Immunol，1991，146(10)：3626.
4.Mellouk S，et al.IFN-r inhibits development of Plasmodium berghei exoerythrocytic stages in hepatocytes by an Larginine-dependent effector mechanism，J Immunol，1991，146(10)：3971.
5.Wynn TA，et al.Elevated expression of Thl cytokines and nitric oxide synthase in the lungs of vaccinated mice after challenge infection with Schintosoma manaoni.J Immunol，1994，153(11)：5200.
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6.Radi R，et al.Peroxynitrite oxidation of sulfhydryls：The cytotoxic potential of superoxide and nitric oxide.J Biol Chem，1991，266(7)：4244.
7.Radi R，et al.Peroxynitrite-induced membrane lipid peroxidation：the cytotoxic potential of superoxide and nitric oxide.Arch Biochem Biophys，1991，288(2)：481.
8.Cross SS，et al.Nitric oxide：Pathophy siological mechanisms.Annu Rev Physiol，1995，57：737.
9.Seguin R，et al.The tumor necrosis factor alpha-stimulating region of galactose-inhibitable lectin of Entamoeba histolytica activates gamma interferon-primed macro phages for amebicidal activity medi ated by nitric oxide.Infect Immun，1997，65(7)：2552.
10.Lin JY，et al.Macrophage cytotoxicity against Entamoeba histolytica trophozoites is mediated by nitric oxide from L-arginine.J Immunol，1992，148(12)：3999.
1998年3月27日收稿, 百拇医药