直肠癌细胞的流式细胞仪分析及临床意义
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作者：薛英威 耿敬姝 刘晓民 刘立人 高小敏 陈国林 赵家宏
单位：(哈尔滨医科大学附属第三医院， 黑龙江 哈尔滨 150040)
关键词：直肠肿瘤；流式细胞术；存活率
中国病理生理杂志000726 [摘 要] 目的：为了探讨直肠癌细胞增殖情况与其预后及淋巴结转移的关系。方法：本文通过对30例Ⅲ期直肠癌(DUKS C期)石蜡包埋组织块及10例正常组织对照石蜡块，进行细胞悬液制备，并采用B-D公司生产的FACS Calibur型流式细胞仪，进行细胞获取和分析。结果：①正常10例直肠组织细胞G0-G1期细胞峰值道数为49.82±1.80。②DI(DNA指数)、SPF(S期细胞百分率)、PI(细胞增殖指数)与淋巴结转移情况无关(P>0.05)。③SPF与直肠癌5年生存率关系密切(P<0.01)。结论：S期细胞百分率越高预后越差，而DI、PI与预后无关。
, 百拇医药
[中图分类号] R735.3+7 [文献标识码] A
[文章编号] 1000-4718(2000)07-0639-02
[MeSH] Rectal neoplasms; Flow cytometry; Survival rate
肿瘤细胞的增殖及DNA情况的研究，对于研究肿瘤的病理生物学行为及预后有重要意义，在这方面已进行了大量的研究。由于石蜡包埋组织块制备细胞悬液的技术问题，及直肠癌组织的复杂性，所以，该癌的石腊组织块研究资料还尚少。本文通过对30例有随访的Ⅲ期直肠癌(DUKS C期)病例石蜡块的流式细胞分析，初步总结了直肠癌细胞增殖动力学与预后及淋巴结转移的关系。
材 料 和 方 法
一、病例选择
, 百拇医药
随机抽取我院1989年3月至1992年3月随访完整直
肠癌病例的组织石蜡块36例，并附正常直肠组织蜡块10例，作为正常二倍体对照。
二、细胞悬液的制备及DNA荧光染色
参照有关文献[1]进行。
三、流式细胞检测方法
采用B-D公司生产的FACS Calibur型流式细胞仪进行细胞获取和测量，分型软件采用Modfit LT 2.0。
四、统计学方法
所有的资料统计处理采用t检验。
结 果
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一、正常10例直肠组织细胞G0-G1期细胞峰值道数为49.82±1.80。 二、36例直肠癌，病Ⅰ期(DUKS A期)1例，Ⅱ期(DUKS B期)4例，Ⅲ期(DUKS C期)30例，Ⅳ期(DUKS D期)1例。其中以DUKS C期病例为主，占83.3%(30/36)。在DUKS C期病例中，均为Mile's式手术。术后5年生存率为56.7%(17/30)。淋巴结转移度≥50%为33.3%(10/30)。按生存率将直肠癌分为≥5年和<5年两组，比较DNA指数(DI)无显著差异(t=0.50，P>0.05)。S期细胞百分比(SPF)有极显著差异(t=3.57，P<0.01)，细胞增殖指数(PI)无显著差异(t=0.8，P>0.05)，见表1，说明SPF越高，直肠癌预后越差。按直肠癌淋巴结转移度，将直肠癌分为转移度≥50%和<50%两组，比较，DI无显著差异(t=0.79，P>0.05)，SPF无显著差异(t=0.08，P>0.05)，PI无显著差异(t=0.77，P>0.05)，见表2，说明DI、SPF、PI与直肠癌淋巴结转移度无关。
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表1 直肠癌细胞增殖情况与5年生存率
Tab 1 Relationship between rectal carcinoma cell proliferation
and 5-years period survival rate (
±s)
DI
SPF
PI
≥5 years
1.16±0.45
13.23±7.90
, 百拇医药
41.66±35.37
<5 years
1.24±0.38
29.13±14.27
51.72±26.41
*P<0.01，vs <5 years; DI:DNA index; SPF: S-period frequency; PI: proliferating index表2 直肠癌细胞增殖情况与淋巴结转移度关系
Tab 2 Relationship between rectal carcinoma cell proliferation
and lymphonodus metastasis(±s)
, http://www.100md.com
DI
SPF
PI
≥50%
0.92±0.60
22.25±12.04
53.50±30.27
<50%
1.07±0.29
22.80±15.33
42.42±26.45
讨 论
, http://www.100md.com
流式细胞术在肿瘤研究方面已成为重要的手段之一，近年来引起了肿瘤研究者的极大关注，已广泛应用于肿瘤的基础和临床研究中，并通过大量的新鲜标本和石蜡包埋肿瘤组织进行，积累了较丰富的经验[2，3]，为肿瘤诊断和预后的预测提供了重要的依据。
用FCM技术对肿瘤细胞进行DNA含量和DNA倍体及S期细胞分析与肿瘤患者预后相连系是FCM技术用于临床的重要方面，特别是1983年Hedley[4]等首先制备石蜡包埋组织单细胞悬液成功以来，许多学者对流式参数与其它因素及预后的关系进行了大量的研究，结果不尽一致，大致总结出了一些DNA倍体指数及S期细胞百分率与肿瘤预后的关系情况[5]，认为，直肠癌的DNA倍体及指数与预后的关系尚难确定的占多数，而认为异倍体直肠癌预后较二倍体预后差的也有一部分[6]。S期细胞百分率被认为是与其组织学分级关系密切的，随组织学分级的增高而增高，而与其组织学类型无关的一个参数。本文在控制了直肠癌病理分期对预后影响的情况下，对直肠癌细胞参数DI、SPF、PI进行流式细胞分析，结果DI、PI对预后尚难确定，而SPF对预后有明显的指示性，其值越高指示直肠癌预后越差，大致与上述观点一致。
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在病理行为上，以淋巴结转移度为指标进行分析，发现，DI、SPF、PI均与该指标无关，关于这方面文献尚未发现报道，有待进一步研究。
[参 考 文 献]
[1] 左连富，刘洪祥，郭建文，等.流式细胞术检测石蜡包埋肿瘤细胞DNA含量样品制备方法[J].中华病理学杂志，1988， 17(3)：232～233.
[2] 左连富， 刘洪祥. 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析[M]. 左连富，主编.流式细胞术与生物医学. 第1版. 沈阳：辽宁科技出版社，1996. 129～138.
[3] Joensuu H, Rossi WP. Different opinions on classification of DNA histograms produced from paraffin-embedded tissue. Cytometry, 1998, 10:711～712.
, 百拇医药
[4] Hedley DW, James H, Osborne WF, et al. Method for analysis of cellular DNA content of paraffin embedded pathological meterial using flow cytometry[J]. Histochem Cytochem, 1983, 31:1333～1334.
[5] Koss LG. Flow cytometry measurements of DNA and other cell components in human tumors, A critical appraise[J]. Hum Pathol, 1989, 20:528～531.
[6] Sasaki I, Une Y, Shimamura T, et al. DNA ploidy pattern in resected human hepato-cellular carcinomas from the viewpoint of biological malignant potential[J]. Jpn J Cancer Chemtherapy, 1996, 23:135～138.
[收稿日期]1999-09-20
[修回日期]2000-02-10, http://www.100md.com
单位：(哈尔滨医科大学附属第三医院， 黑龙江 哈尔滨 150040)
关键词：直肠肿瘤；流式细胞术；存活率
中国病理生理杂志000726 [摘 要] 目的：为了探讨直肠癌细胞增殖情况与其预后及淋巴结转移的关系。方法：本文通过对30例Ⅲ期直肠癌(DUKS C期)石蜡包埋组织块及10例正常组织对照石蜡块，进行细胞悬液制备，并采用B-D公司生产的FACS Calibur型流式细胞仪，进行细胞获取和分析。结果：①正常10例直肠组织细胞G0-G1期细胞峰值道数为49.82±1.80。②DI(DNA指数)、SPF(S期细胞百分率)、PI(细胞增殖指数)与淋巴结转移情况无关(P>0.05)。③SPF与直肠癌5年生存率关系密切(P<0.01)。结论：S期细胞百分率越高预后越差，而DI、PI与预后无关。
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[中图分类号] R735.3+7 [文献标识码] A
[文章编号] 1000-4718(2000)07-0639-02
[MeSH] Rectal neoplasms; Flow cytometry; Survival rate
肿瘤细胞的增殖及DNA情况的研究，对于研究肿瘤的病理生物学行为及预后有重要意义，在这方面已进行了大量的研究。由于石蜡包埋组织块制备细胞悬液的技术问题，及直肠癌组织的复杂性，所以，该癌的石腊组织块研究资料还尚少。本文通过对30例有随访的Ⅲ期直肠癌(DUKS C期)病例石蜡块的流式细胞分析，初步总结了直肠癌细胞增殖动力学与预后及淋巴结转移的关系。
材 料 和 方 法
一、病例选择
, 百拇医药
随机抽取我院1989年3月至1992年3月随访完整直
肠癌病例的组织石蜡块36例，并附正常直肠组织蜡块10例，作为正常二倍体对照。
二、细胞悬液的制备及DNA荧光染色
参照有关文献[1]进行。
三、流式细胞检测方法
采用B-D公司生产的FACS Calibur型流式细胞仪进行细胞获取和测量，分型软件采用Modfit LT 2.0。
四、统计学方法
所有的资料统计处理采用t检验。
结 果
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一、正常10例直肠组织细胞G0-G1期细胞峰值道数为49.82±1.80。 二、36例直肠癌，病Ⅰ期(DUKS A期)1例，Ⅱ期(DUKS B期)4例，Ⅲ期(DUKS C期)30例，Ⅳ期(DUKS D期)1例。其中以DUKS C期病例为主，占83.3%(30/36)。在DUKS C期病例中，均为Mile's式手术。术后5年生存率为56.7%(17/30)。淋巴结转移度≥50%为33.3%(10/30)。按生存率将直肠癌分为≥5年和<5年两组，比较DNA指数(DI)无显著差异(t=0.50，P>0.05)。S期细胞百分比(SPF)有极显著差异(t=3.57，P<0.01)，细胞增殖指数(PI)无显著差异(t=0.8，P>0.05)，见表1，说明SPF越高，直肠癌预后越差。按直肠癌淋巴结转移度，将直肠癌分为转移度≥50%和<50%两组，比较，DI无显著差异(t=0.79，P>0.05)，SPF无显著差异(t=0.08，P>0.05)，PI无显著差异(t=0.77，P>0.05)，见表2，说明DI、SPF、PI与直肠癌淋巴结转移度无关。
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表1 直肠癌细胞增殖情况与5年生存率
Tab 1 Relationship between rectal carcinoma cell proliferation
and 5-years period survival rate (
±s)DI
SPF
PI
≥5 years
1.16±0.45
13.23±7.90
, 百拇医药
41.66±35.37
<5 years
1.24±0.38
29.13±14.27
51.72±26.41
*P<0.01，vs <5 years; DI:DNA index; SPF: S-period frequency; PI: proliferating index表2 直肠癌细胞增殖情况与淋巴结转移度关系
Tab 2 Relationship between rectal carcinoma cell proliferation
and lymphonodus metastasis(
±s), http://www.100md.com
DI
SPF
PI
≥50%
0.92±0.60
22.25±12.04
53.50±30.27
<50%
1.07±0.29
22.80±15.33
42.42±26.45
讨 论
, http://www.100md.com
流式细胞术在肿瘤研究方面已成为重要的手段之一，近年来引起了肿瘤研究者的极大关注，已广泛应用于肿瘤的基础和临床研究中，并通过大量的新鲜标本和石蜡包埋肿瘤组织进行，积累了较丰富的经验[2，3]，为肿瘤诊断和预后的预测提供了重要的依据。
用FCM技术对肿瘤细胞进行DNA含量和DNA倍体及S期细胞分析与肿瘤患者预后相连系是FCM技术用于临床的重要方面，特别是1983年Hedley[4]等首先制备石蜡包埋组织单细胞悬液成功以来，许多学者对流式参数与其它因素及预后的关系进行了大量的研究，结果不尽一致，大致总结出了一些DNA倍体指数及S期细胞百分率与肿瘤预后的关系情况[5]，认为，直肠癌的DNA倍体及指数与预后的关系尚难确定的占多数，而认为异倍体直肠癌预后较二倍体预后差的也有一部分[6]。S期细胞百分率被认为是与其组织学分级关系密切的，随组织学分级的增高而增高，而与其组织学类型无关的一个参数。本文在控制了直肠癌病理分期对预后影响的情况下，对直肠癌细胞参数DI、SPF、PI进行流式细胞分析，结果DI、PI对预后尚难确定，而SPF对预后有明显的指示性，其值越高指示直肠癌预后越差，大致与上述观点一致。
, http://www.100md.com
在病理行为上，以淋巴结转移度为指标进行分析，发现，DI、SPF、PI均与该指标无关，关于这方面文献尚未发现报道，有待进一步研究。
[参 考 文 献]
[1] 左连富，刘洪祥，郭建文，等.流式细胞术检测石蜡包埋肿瘤细胞DNA含量样品制备方法[J].中华病理学杂志，1988， 17(3)：232～233.
[2] 左连富， 刘洪祥. 实体肿瘤DNA倍体的FCM分析[M]. 左连富，主编.流式细胞术与生物医学. 第1版. 沈阳：辽宁科技出版社，1996. 129～138.
[3] Joensuu H, Rossi WP. Different opinions on classification of DNA histograms produced from paraffin-embedded tissue. Cytometry, 1998, 10:711～712.
, 百拇医药
[4] Hedley DW, James H, Osborne WF, et al. Method for analysis of cellular DNA content of paraffin embedded pathological meterial using flow cytometry[J]. Histochem Cytochem, 1983, 31:1333～1334.
[5] Koss LG. Flow cytometry measurements of DNA and other cell components in human tumors, A critical appraise[J]. Hum Pathol, 1989, 20:528～531.
[6] Sasaki I, Une Y, Shimamura T, et al. DNA ploidy pattern in resected human hepato-cellular carcinomas from the viewpoint of biological malignant potential[J]. Jpn J Cancer Chemtherapy, 1996, 23:135～138.
[收稿日期]1999-09-20
[修回日期]2000-02-10, http://www.100md.com