建立人类体细胞克隆胚技术的初步探索
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作者：陆长富 卢光琇
单位：陆长富(人类生殖工程研究室 长沙 410078)；卢光琇(人类生殖工程研究室 长沙 410078)
关键词：卵母细胞；颗粒细胞；克隆胚
湖南医科大学学报000137 分类号：R321.33，Q311+.6 文献标识码：B
文章编号：1000-5625(2000)01-封3▲
绵羊、小鼠和牛等体细胞克隆动物的出生， 证明了克隆技术在人类应用的可能性。由于宗教、伦理及法律方面的原因，以及克隆技术本 身的缺陷可能对克隆人造成的不利影响，使这一技术在人类的应用受到很大限制，大多数实 验人员均不主张在现阶段对人类进行克隆。但是，如果利用克隆技术将需要进行器官或组织 移植病人的体细胞核移植到去核的卵母细胞内，构建核移植胚，使其进行一定程度的发育， 并经过适当处理，对其进行诱导，使其定向发育成供病人移植所需的器官或组织，不但可解 决器官和组织来源不足的问题，还可以克服异体器官和组织移植中的免疫排斥反应，从而提 高器官和组织移植的成功率。我室自1999年9月开始进行人类体细胞克隆实验，旨在为研 究早期胚胎和干细胞的定向诱导分化、并最终培养出可供临床移植的器官和组织打下基础。
本实验中，将常规IVF-ET手术的多余卵母细胞，经患者本人同意后，用细胞松弛素B处理， 并用外径30μm、内径25μm的玻璃针将极体连同极体附近的细胞质吸掉，去掉细胞核。 然后选择形态规则、胞质均匀、细胞核清晰的颗粒细胞，用外径7.5μm、内径6.0μm 的玻璃针将颗粒细胞核注入去核母细胞内，构建克隆胚。再将克隆胚在37℃，5% CO2培养 箱内用含20%人血清的B2培养基培养。
实验共培养了11枚克隆胚，其中3枚发生卵裂并发育到桑椹胚，发育率为27.8%；2枚观察到 一个原核样核，1枚观察到两个原核样核，1枚观察到3个原核样核，观察到原核样核的4枚胚 胎均未发育；其余4枚未见明显变化。
结果表明，本实验构建的克隆胚可以进行一定程度的发育，所用方法可以作为进一步相关研 究的基础。
附图 克隆胚的构建及发育 1 吸取颗粒细胞；2 将颗粒细胞 核注入去核卵母细胞； 3 发生原核样变的克隆胚胎；4 桑椹胚阶段的克隆胚
Fig. Reconstruction and development of human embryo 1. aspirat e a cumulus cell;2. injection of a cumulus nuclear into enucleated human
oocyte ; 3.a one-cell stage reconstruction embryo with a pronuclear; 4.a morula stage r econstruction embryo
作者简介：陆长富(1966-)，男(苗族)，助理研究员
收稿日期：2000-01-13, 百拇医药
单位：陆长富(人类生殖工程研究室 长沙 410078)；卢光琇(人类生殖工程研究室 长沙 410078)
关键词：卵母细胞；颗粒细胞；克隆胚
湖南医科大学学报000137 分类号：R321.33，Q311+.6 文献标识码：B
文章编号：1000-5625(2000)01-封3▲
绵羊、小鼠和牛等体细胞克隆动物的出生， 证明了克隆技术在人类应用的可能性。由于宗教、伦理及法律方面的原因，以及克隆技术本 身的缺陷可能对克隆人造成的不利影响，使这一技术在人类的应用受到很大限制，大多数实 验人员均不主张在现阶段对人类进行克隆。但是，如果利用克隆技术将需要进行器官或组织 移植病人的体细胞核移植到去核的卵母细胞内，构建核移植胚，使其进行一定程度的发育， 并经过适当处理，对其进行诱导，使其定向发育成供病人移植所需的器官或组织，不但可解 决器官和组织来源不足的问题，还可以克服异体器官和组织移植中的免疫排斥反应，从而提 高器官和组织移植的成功率。我室自1999年9月开始进行人类体细胞克隆实验，旨在为研 究早期胚胎和干细胞的定向诱导分化、并最终培养出可供临床移植的器官和组织打下基础。
本实验中，将常规IVF-ET手术的多余卵母细胞，经患者本人同意后，用细胞松弛素B处理， 并用外径30μm、内径25μm的玻璃针将极体连同极体附近的细胞质吸掉，去掉细胞核。 然后选择形态规则、胞质均匀、细胞核清晰的颗粒细胞，用外径7.5μm、内径6.0μm 的玻璃针将颗粒细胞核注入去核母细胞内，构建克隆胚。再将克隆胚在37℃，5% CO2培养 箱内用含20%人血清的B2培养基培养。
实验共培养了11枚克隆胚，其中3枚发生卵裂并发育到桑椹胚，发育率为27.8%；2枚观察到 一个原核样核，1枚观察到两个原核样核，1枚观察到3个原核样核，观察到原核样核的4枚胚 胎均未发育；其余4枚未见明显变化。
结果表明，本实验构建的克隆胚可以进行一定程度的发育，所用方法可以作为进一步相关研 究的基础。
附图 克隆胚的构建及发育 1 吸取颗粒细胞；2 将颗粒细胞 核注入去核卵母细胞； 3 发生原核样变的克隆胚胎；4 桑椹胚阶段的克隆胚
Fig. Reconstruction and development of human embryo 1. aspirat e a cumulus cell;2. injection of a cumulus nuclear into enucleated human
oocyte ; 3.a one-cell stage reconstruction embryo with a pronuclear; 4.a morula stage r econstruction embryo
作者简介：陆长富(1966-)，男(苗族)，助理研究员
收稿日期：2000-01-13, 百拇医药