老年口腔鳞状细胞癌细胞凋亡相关基因蛋白的表达及分析
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作者：郭玲玲 盛江筠 张永格 李红
单位：郭玲玲 李红(山东医科大学附属医院病理科 济南市 250012)；盛江筠(山东医科大学口腔医院 济南市 250012)；张永格(河北省衡水卫校 衡水市 053000)
关键词：口腔疾病；鳞状细胞癌；癌基因；免疫组织化学
肿瘤防治杂志000407
【摘要】目的：探讨老年口腔鳞状细胞癌组织细胞凋亡相关基因蛋白表达及其与临床病理特征的关系。方法：采用微波处理LSAB法，分析62例老年口腔鳞癌手术切除石蜡包埋组织中细胞凋亡相关基因bcl-2、bax和p53蛋白表达情况。另取正常老年人口腔粘膜做对照。结果：bcl-2阳性率48.38%，在分化程度高者高表达，且与淋巴结转移呈负相关(P<0.05)；p53阳性率为32.26%，多见于中、低分化和有淋巴结转移的患者(P<0.05)；bax的表达在不同分化及淋巴结转移方面未显示有统计学差异。结论：表明细胞凋亡相关基因bcl-2、bax及p53蛋白与老年口腔鳞癌的发生及生物学行为有关。
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中图分类号：R739.85 文献标识码：A
文章编号：1009-4571(2000)04-0353-03
Experssion and Analysis of Apoptosis-Related Gene Products in the Tissue of Old Pral Sqsuamous Cacinoma
Guo Ling-ling,SHENG Jiang-yun,et al.
(Dept.of Pathology,Shandong Medical University,Jinan 250012)
【Abstract】Objective：To evaluate the expression pattern of apoptosis-related factors and compare the expression with clinicopathological findings in senile oral squamous carcinoma (OSC).Methods：62 cases of senile OSC were examined by using immunohistochemistry.Results：bcl-2 stainning was detected in 48.38% senile OSC.p53 expression was linked with high histological grade and found in 32.26% senile OSC.Conclusions:Poptosis-related factors bcl-2 and p53 were involved in some biological behaviour of senile OSC and they may play an important role in the development of senile OSC.
, 百拇医药
【Key words】oral disease;squamous carcinoma;oncogenes;immunohistochemistry
肿瘤的发生、发展不仅取决于细胞的增殖速率，而且与细胞凋亡的相对比率有关。研究表明，bcl-2、bax和p53参与细胞凋亡的基因调控。为探讨这些基因与老年口腔鳞癌的发生、临床病理特征及生物学行为的关系，笔者利用免疫组化LSAB法检测了其在老年口腔鳞癌组织中的表达情况。
1 材料与方法
1.1 研究对象
收集山东医科大学附属医院病理科1988～1996年老年口腔鳞癌手术切除标本62例。患者年龄60～78岁，平均68.7岁。其中牙龈癌39例，口底癌11例，舌癌6例，口唇癌4例，软腭癌2例。术后病理组织学分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级分别为28例、25例和9例。有淋巴结转移者13例，另取正常口腔粘膜6例做对照研究。试剂bcl-2和bax单克隆抗体为Santa Cruz Biotechnology公司产品。p53(DO-1)为DAKO公司产品，LSAB试剂盒为Vector产品。
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1.2 实验方法
免疫组化采用LSAB法。切片厚4 μm。bcl-2、bax和p53单抗工作浓度均为1∶40。bcl-2阳性对照为涎腺腺样囊性癌组织，bax和p53阳性对照为肺鳞癌组织，阴性对照以PBS代替一抗进行。
1.3 结果判定
bcl-2和bax以胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性，呈片状、巢状(图1)或散在分布。按显色有无及阳性细胞多少分为两个等级。阴性：无阳性细胞或阳性细胞数<3%，阳性：阳性细胞数>3%，正常对照组6例口腔粘膜中4例基底层细胞有散在阳性细胞。p53阳性：细胞核内出现棕黄色颗粒(图2)，无胞核内棕黄色颗粒为阴性。
图1 口底中分化鳞状细胞癌，bcl-2阳性，阳性着色位于细胞浆(LSAB×100)
, 百拇医药
图2 舌中分鳞状细胞癌，p53阳性
阳性着色，位于细胞核(LSAB×200)
1.4 统计学处理
用χ2检验。
2 结果
免疫组化结果见表1。bcl-2和bax蛋白免疫组化染色阳性位于细胞浆。bcl-2表达在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级分化组织中阳性率分别为57.14%、52%和11.11%，呈递减趋势，差异具有显著性(P<0.05)；在有、无淋巴结转移组，bcl-2表达率分别为15.38%和55.10%，有统计学意义(P<0.05)。bax在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级分化的癌组织中阳性率分别为39.29%、60%和44.4%，没有统计学差异。在有、无淋巴结转移组，bax阳性分别为46.15%、55.10%，其在有淋巴结转移组的表达高于bcl-2，但没有统计学差异(P>0.05)。p53在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级癌组织中阳性率分别为10.71%、44%和66.67%，呈递减趋势，三者之间差异具有显著性(P<0.05)。在有淋巴结转移组表达增强，阳性率为69.23%，无淋巴结转移组阳性率为26.53%，差异有显著性(P<0.05)。
, 百拇医药
表1 bcl-2、bax和p53表达与口腔鳞癌病理指标的关系 病理
n
bcl-2
bax
p53
+
%
+
%
+
%
组织分化
Ⅰ
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28
16
57.14
11
39.29
3
10.71
Ⅱ
25
13
52
15
60
, 百拇医药 11
44※
Ⅲ
9
1
11.11※
4
44.44
6
66.67
淋巴结转移
有
13
, http://www.100md.com
2
15.38
6
46.15
9
69.23
无
49
27
55.10※
27
55.10
13
, 百拇医药
26.53※
注：※各指标内比较P<0.05。
3 讨论
bcl-2是近年来发现的一种原癌基因，它的基因产物可以阻断细胞程序性死亡，而不影响细胞增殖[1]。bcl-2是正常细胞所携带的基因，通过基因变更或移位后，使之表达增强[2]。本组实验在正常口腔粘膜上皮基底细胞呈散在阳性，在口腔鳞癌中与分化程度呈正相关，无淋巴结转移组bcl-2高表达，提示bcl-2基因的过度表达可能是肿瘤发生的早期事件。口腔鳞癌发生的早期，bcl-2表达抑制了细胞的凋亡过程。
p53基因是调控细胞凋亡的重要基因。野生型p53可促进细胞凋亡，突变型p53则抑制细胞的凋亡[3]。一些学者发现，突变型p53可下调bcl-2的表达，成为bcl-2的调控因子[4，5]。p53过度表达能在蛋白及mRNA水平上下调bcl-2表达，说明野生型p53可在转录水平上抑制bcl-2。本研究p53在正常口腔粘膜阴性，而多见于中、低分化、有淋巴结转移的病例；p53表达与bcl-2呈负相关，与文献报道一致，表明p53水平与肿瘤的恶性表型及生物学行为呈正相关，提示p53过度表达可作为老年口腔鳞癌患者预后不良的肿瘤标志物。
, 百拇医药
Bax是bcl-2家族成员之一，在细胞内可与bcl-2形成异二聚体。bax/bcl-2比值对决定细胞接受信号刺激后存活与否起关键的作用，bax过度表达细胞死亡，bcl-2过度表达则细胞存活，因而认为bax是一种细胞凋亡促进因子[6]。曾昕[7]等报道口腔鳞癌组织bax蛋白表达弱于异常增生。本研究中，bax在老年口腔鳞癌组织中阳性率为53.23%。未发现其与bcl-2之间的关系，其确切价值尚待进一步研究。
参考文献：
[1]Nunez G,Londan L,Hockenbery V,et al.Deregulated Bcl-2 gene expression sselectively prolongs suvival of growth factor deprived hematopoietic cell lines[J].J Immunol,1990,144:3602～3604.
, 百拇医药
[2]Korsmeyer SJ,et al.Bcl-2 initiates a new category of oncogenes. reglator of cell death[J]. Blood,1992,80:879～880.
[3]Garson DA,Ribeiro JM,et al.Apoptosis and disease[J].Lancet,1993,341:1251～1253.
[4]Silviastrini R,Veneroni S,Daidone MG,et al.The bcl-2 protein:in lymph node negative breast cancer patients[J].J Netl cancer Inst,1994,86:499～501.
[5]Halder S,Negrini M,Monne M,et al.Downregulation of bcl-2 by p53 in breast cancer cell[J].Cancer Res,1994,54:2095～2096.
[6]Willims GT,Smith CA.Molecular regulation of apoptosis:Genetic controls on cell death[J].Cancer.1993，74:727～729.
[7]曾昕，陈谦明，李秉琦.口腔粘膜癌前损害过程中bax蛋白表达水平的免疫组化初步观察[J].中华口腔医学杂志，1999，34：375～376.
收稿日期：2000-03-10
修回日期：2000-05-06, http://www.100md.com
单位：郭玲玲 李红(山东医科大学附属医院病理科 济南市 250012)；盛江筠(山东医科大学口腔医院 济南市 250012)；张永格(河北省衡水卫校 衡水市 053000)
关键词：口腔疾病；鳞状细胞癌；癌基因；免疫组织化学
肿瘤防治杂志000407
【摘要】目的：探讨老年口腔鳞状细胞癌组织细胞凋亡相关基因蛋白表达及其与临床病理特征的关系。方法：采用微波处理LSAB法，分析62例老年口腔鳞癌手术切除石蜡包埋组织中细胞凋亡相关基因bcl-2、bax和p53蛋白表达情况。另取正常老年人口腔粘膜做对照。结果：bcl-2阳性率48.38%，在分化程度高者高表达，且与淋巴结转移呈负相关(P<0.05)；p53阳性率为32.26%，多见于中、低分化和有淋巴结转移的患者(P<0.05)；bax的表达在不同分化及淋巴结转移方面未显示有统计学差异。结论：表明细胞凋亡相关基因bcl-2、bax及p53蛋白与老年口腔鳞癌的发生及生物学行为有关。
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中图分类号：R739.85 文献标识码：A
文章编号：1009-4571(2000)04-0353-03
Experssion and Analysis of Apoptosis-Related Gene Products in the Tissue of Old Pral Sqsuamous Cacinoma
Guo Ling-ling,SHENG Jiang-yun,et al.
(Dept.of Pathology,Shandong Medical University,Jinan 250012)
【Abstract】Objective：To evaluate the expression pattern of apoptosis-related factors and compare the expression with clinicopathological findings in senile oral squamous carcinoma (OSC).Methods：62 cases of senile OSC were examined by using immunohistochemistry.Results：bcl-2 stainning was detected in 48.38% senile OSC.p53 expression was linked with high histological grade and found in 32.26% senile OSC.Conclusions:Poptosis-related factors bcl-2 and p53 were involved in some biological behaviour of senile OSC and they may play an important role in the development of senile OSC.
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【Key words】oral disease;squamous carcinoma;oncogenes;immunohistochemistry
肿瘤的发生、发展不仅取决于细胞的增殖速率，而且与细胞凋亡的相对比率有关。研究表明，bcl-2、bax和p53参与细胞凋亡的基因调控。为探讨这些基因与老年口腔鳞癌的发生、临床病理特征及生物学行为的关系，笔者利用免疫组化LSAB法检测了其在老年口腔鳞癌组织中的表达情况。
1 材料与方法
1.1 研究对象
收集山东医科大学附属医院病理科1988～1996年老年口腔鳞癌手术切除标本62例。患者年龄60～78岁，平均68.7岁。其中牙龈癌39例，口底癌11例，舌癌6例，口唇癌4例，软腭癌2例。术后病理组织学分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级分别为28例、25例和9例。有淋巴结转移者13例，另取正常口腔粘膜6例做对照研究。试剂bcl-2和bax单克隆抗体为Santa Cruz Biotechnology公司产品。p53(DO-1)为DAKO公司产品，LSAB试剂盒为Vector产品。
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1.2 实验方法
免疫组化采用LSAB法。切片厚4 μm。bcl-2、bax和p53单抗工作浓度均为1∶40。bcl-2阳性对照为涎腺腺样囊性癌组织，bax和p53阳性对照为肺鳞癌组织，阴性对照以PBS代替一抗进行。
1.3 结果判定
bcl-2和bax以胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性，呈片状、巢状(图1)或散在分布。按显色有无及阳性细胞多少分为两个等级。阴性：无阳性细胞或阳性细胞数<3%，阳性：阳性细胞数>3%，正常对照组6例口腔粘膜中4例基底层细胞有散在阳性细胞。p53阳性：细胞核内出现棕黄色颗粒(图2)，无胞核内棕黄色颗粒为阴性。
图1 口底中分化鳞状细胞癌，bcl-2阳性，阳性着色位于细胞浆(LSAB×100)
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图2 舌中分鳞状细胞癌，p53阳性
阳性着色，位于细胞核(LSAB×200)
1.4 统计学处理
用χ2检验。
2 结果
免疫组化结果见表1。bcl-2和bax蛋白免疫组化染色阳性位于细胞浆。bcl-2表达在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级分化组织中阳性率分别为57.14%、52%和11.11%，呈递减趋势，差异具有显著性(P<0.05)；在有、无淋巴结转移组，bcl-2表达率分别为15.38%和55.10%，有统计学意义(P<0.05)。bax在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级分化的癌组织中阳性率分别为39.29%、60%和44.4%，没有统计学差异。在有、无淋巴结转移组，bax阳性分别为46.15%、55.10%，其在有淋巴结转移组的表达高于bcl-2，但没有统计学差异(P>0.05)。p53在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级癌组织中阳性率分别为10.71%、44%和66.67%，呈递减趋势，三者之间差异具有显著性(P<0.05)。在有淋巴结转移组表达增强，阳性率为69.23%，无淋巴结转移组阳性率为26.53%，差异有显著性(P<0.05)。
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表1 bcl-2、bax和p53表达与口腔鳞癌病理指标的关系 病理
n
bcl-2
bax
p53
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组织分化
Ⅰ
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28
16
57.14
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Ⅱ
25
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Ⅲ
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11.11※
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66.67
淋巴结转移
有
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2
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26.53※
注：※各指标内比较P<0.05。
3 讨论
bcl-2是近年来发现的一种原癌基因，它的基因产物可以阻断细胞程序性死亡，而不影响细胞增殖[1]。bcl-2是正常细胞所携带的基因，通过基因变更或移位后，使之表达增强[2]。本组实验在正常口腔粘膜上皮基底细胞呈散在阳性，在口腔鳞癌中与分化程度呈正相关，无淋巴结转移组bcl-2高表达，提示bcl-2基因的过度表达可能是肿瘤发生的早期事件。口腔鳞癌发生的早期，bcl-2表达抑制了细胞的凋亡过程。
p53基因是调控细胞凋亡的重要基因。野生型p53可促进细胞凋亡，突变型p53则抑制细胞的凋亡[3]。一些学者发现，突变型p53可下调bcl-2的表达，成为bcl-2的调控因子[4，5]。p53过度表达能在蛋白及mRNA水平上下调bcl-2表达，说明野生型p53可在转录水平上抑制bcl-2。本研究p53在正常口腔粘膜阴性，而多见于中、低分化、有淋巴结转移的病例；p53表达与bcl-2呈负相关，与文献报道一致，表明p53水平与肿瘤的恶性表型及生物学行为呈正相关，提示p53过度表达可作为老年口腔鳞癌患者预后不良的肿瘤标志物。
, 百拇医药
Bax是bcl-2家族成员之一，在细胞内可与bcl-2形成异二聚体。bax/bcl-2比值对决定细胞接受信号刺激后存活与否起关键的作用，bax过度表达细胞死亡，bcl-2过度表达则细胞存活，因而认为bax是一种细胞凋亡促进因子[6]。曾昕[7]等报道口腔鳞癌组织bax蛋白表达弱于异常增生。本研究中，bax在老年口腔鳞癌组织中阳性率为53.23%。未发现其与bcl-2之间的关系，其确切价值尚待进一步研究。
参考文献：
[1]Nunez G,Londan L,Hockenbery V,et al.Deregulated Bcl-2 gene expression sselectively prolongs suvival of growth factor deprived hematopoietic cell lines[J].J Immunol,1990,144:3602～3604.
, 百拇医药
[2]Korsmeyer SJ,et al.Bcl-2 initiates a new category of oncogenes. reglator of cell death[J]. Blood,1992,80:879～880.
[3]Garson DA,Ribeiro JM,et al.Apoptosis and disease[J].Lancet,1993,341:1251～1253.
[4]Silviastrini R,Veneroni S,Daidone MG,et al.The bcl-2 protein:in lymph node negative breast cancer patients[J].J Netl cancer Inst,1994,86:499～501.
[5]Halder S,Negrini M,Monne M,et al.Downregulation of bcl-2 by p53 in breast cancer cell[J].Cancer Res,1994,54:2095～2096.
[6]Willims GT,Smith CA.Molecular regulation of apoptosis:Genetic controls on cell death[J].Cancer.1993，74:727～729.
[7]曾昕，陈谦明，李秉琦.口腔粘膜癌前损害过程中bax蛋白表达水平的免疫组化初步观察[J].中华口腔医学杂志，1999，34：375～376.
收稿日期：2000-03-10
修回日期：2000-05-06, http://www.100md.com