HPLC内标法测定克拉霉素分散片的含量
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作者：张丽 林小玲
单位：广东健力宝药业有限公司 广东三水 528100
关键词：
广东药学000612 克拉霉素又称甲基红霉素，其最大特点是耐酸，缺点为味苦，故经过加入甜味剂抑制其苦味，制成分散片，以便于人体吸收利用。我国克拉霉素分散片的含量测定方法为微生物效价法，主要存在检验时间长，人为因素影响大的问题。本文建立了HPLC紫外检测法，用于测定分散片中克拉霉素的含量。
1 仪器与试药
岛津高效液相色谱仪LC-6A泵；SPD-6AV检测器；C-R4A型数据处理机；
克拉霉素对照品(批号981001，效价968μ/mg，100mg装)；
, 百拇医药
克拉霉素分散片(批号991101、991102、991103 广东健力宝药业)；
乙腈为色谱纯；磷酸氢二铵、对羟基苯甲酸丁酯均为分析纯；水为重蒸馏水。
2 实验方法和结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Water Nova-Pak C18 柱(15×3.9mm，4μm);流动相0.025mol/L磷酸氢二铵溶液(pH 6.5)-乙腈(3∶2)；流速1.0ml/min；检测波长210nm；进样量20μl；柱温30℃。
2.2 线性关系
精密称取对羟基苯甲酸丁酯0.0139g，用流动相溶解并稀释至250ml,作为内标溶液；精密称取对照品适量，置50ml量瓶中，用流动相溶解，分别加入5.0ml内标溶液，并用流动相稀释至刻度，使其浓度为100、200、400、800、1000μg/ml。分别由定量环进样20μl，记录色谱图(图1)，以对照品与内标物质的峰面积之比(y)对浓度(x)回归，得回归方程为：y=0.02572+2.9936x,r=0.99991,结果表明，浓度在100～1000μg/ml范围之内具有良好的线性关系。
, 百拇医药
2.3 回收率试验
精密称取对照品50mg，置25ml量瓶中，按处方比例，加入空白全辅料，加流动相溶解并定容，滤过，取续滤液5ml，置25ml量瓶中，精密加 入2ml内标溶液，加流动相稀释至刻度，进样测定，求得平均回收率为99.7%,RSD=1.03%(n=5)。
2.4 精密度试验
用本法测定同批样品，对方法重现性进行考察，求得RSD=0.78%(n=5)。
图1 HPLC色谱图
1.克拉霉素(5.2min) 2.内标(11.7min)
, 百拇医药
2.5 灵敏度试验
当信噪比为3时，对照品的检测限为10μg/ml。
2.6 样品测定
取样品10片，精密称定，计算平均片重，精密称取适量(约相当于克拉霉素100mg)，置250ml量瓶中。加流动相适量，超声处理30min，加入内标溶液4ml，流动相定容，滤过，取续液，进样，按内标法计算含量，结果见表1。
表1 样品测定结果(标示量%,n=3) 批 号
本法
微生物效价法
991101
101.5
, 百拇医药
102.3
991102
99.9
100.8
991103
101.9
103.2
3 讨论 3.1 由克拉霉素色谱分离图谱可见，内标物质并不影响克拉霉素及其相关物质的分离，克拉霉素峰与内标峰的分离度大于3。
3.2 流动相酸碱度对克拉霉素保留行为有所影响，pH值递增则保留时间增长，而对内标物质无影响，考虑到分离度要求选择pH6.5。
3.3 辅料按测定方法操作时，辅料在样品及内标物质的保留时间处为一直线，说明辅料对检测无干扰。
3.4 由测定结果可见，本法具有精密度高，重现性好，简便快速的特点，与微生物效价法测定的结果基本相符。
(收稿日期：2000-07-26), 百拇医药
单位：广东健力宝药业有限公司 广东三水 528100
关键词：
广东药学000612 克拉霉素又称甲基红霉素，其最大特点是耐酸，缺点为味苦，故经过加入甜味剂抑制其苦味，制成分散片，以便于人体吸收利用。我国克拉霉素分散片的含量测定方法为微生物效价法，主要存在检验时间长，人为因素影响大的问题。本文建立了HPLC紫外检测法，用于测定分散片中克拉霉素的含量。
1 仪器与试药
岛津高效液相色谱仪LC-6A泵；SPD-6AV检测器；C-R4A型数据处理机；
克拉霉素对照品(批号981001，效价968μ/mg，100mg装)；
, 百拇医药
克拉霉素分散片(批号991101、991102、991103 广东健力宝药业)；
乙腈为色谱纯；磷酸氢二铵、对羟基苯甲酸丁酯均为分析纯；水为重蒸馏水。
2 实验方法和结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Water Nova-Pak C18 柱(15×3.9mm，4μm);流动相0.025mol/L磷酸氢二铵溶液(pH 6.5)-乙腈(3∶2)；流速1.0ml/min；检测波长210nm；进样量20μl；柱温30℃。
2.2 线性关系
精密称取对羟基苯甲酸丁酯0.0139g，用流动相溶解并稀释至250ml,作为内标溶液；精密称取对照品适量，置50ml量瓶中，用流动相溶解，分别加入5.0ml内标溶液，并用流动相稀释至刻度，使其浓度为100、200、400、800、1000μg/ml。分别由定量环进样20μl，记录色谱图(图1)，以对照品与内标物质的峰面积之比(y)对浓度(x)回归，得回归方程为：y=0.02572+2.9936x,r=0.99991,结果表明，浓度在100～1000μg/ml范围之内具有良好的线性关系。
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2.3 回收率试验
精密称取对照品50mg，置25ml量瓶中，按处方比例，加入空白全辅料，加流动相溶解并定容，滤过，取续滤液5ml，置25ml量瓶中，精密加 入2ml内标溶液，加流动相稀释至刻度，进样测定，求得平均回收率为99.7%,RSD=1.03%(n=5)。
2.4 精密度试验
用本法测定同批样品，对方法重现性进行考察，求得RSD=0.78%(n=5)。
图1 HPLC色谱图
1.克拉霉素(5.2min) 2.内标(11.7min)
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2.5 灵敏度试验
当信噪比为3时，对照品的检测限为10μg/ml。
2.6 样品测定
取样品10片，精密称定，计算平均片重，精密称取适量(约相当于克拉霉素100mg)，置250ml量瓶中。加流动相适量，超声处理30min，加入内标溶液4ml，流动相定容，滤过，取续液，进样，按内标法计算含量，结果见表1。
表1 样品测定结果(标示量%,n=3) 批 号
本法
微生物效价法
991101
101.5
, 百拇医药
102.3
991102
99.9
100.8
991103
101.9
103.2
3 讨论 3.1 由克拉霉素色谱分离图谱可见，内标物质并不影响克拉霉素及其相关物质的分离，克拉霉素峰与内标峰的分离度大于3。
3.2 流动相酸碱度对克拉霉素保留行为有所影响，pH值递增则保留时间增长，而对内标物质无影响，考虑到分离度要求选择pH6.5。
3.3 辅料按测定方法操作时，辅料在样品及内标物质的保留时间处为一直线，说明辅料对检测无干扰。
3.4 由测定结果可见，本法具有精密度高，重现性好，简便快速的特点，与微生物效价法测定的结果基本相符。
(收稿日期：2000-07-26), 百拇医药