碘油抗癌药造影栓塞乳剂配制比例的实验研究
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作者：周步良 李萍 谈恒山
单位：周步良 李萍(南京医科大学第三附属医院，仪征，211900)；谈恒山(南京军区南京总医院药理科)
关键词：乳化栓塞剂；碘化油；配制
苏州医学院学报000613 摘要 目的 观察LMU乳化栓塞剂不同配制比的物理稳定性、释放速度及乳粒大小，考证其临床适用性。方法 将丝裂霉素C(MMC)溶解于60%复方泛影葡胺(UR)中，采用“二泵一间隔”法与40%LIP混合成不同配制比，静置于室温下，观察其油水分层时间。用显微镜观察不同时间油水分层和乳粒变化及特征，测定不同比例的乳粒大小。用ZKS-4智能溶出仪以浆叶法测定MMC含量，计算释放累积百分率，用紫外法测定其吸收值并与不同浓度进行线性回归，求其标准曲线方程，按PKBP-N1程序中威布尔公式计算释放参数。结果 LMU 5∶3分层慢，开始分层时间为3.5h，完全分层时间15h，乳滴稳定，直径为20～100μm，稳定性好，粘稠度小，易于推注，价廉，配制容易，乳粒适中，效用持久，为该实验最佳乳化比。LMU 5∶3经超声乳化后也有理想结果。结论 乳化剂的选择与配制比例影响药物的释放速度和物理稳定性。
, 百拇医药
中图法分类号 R981.1
The Experimental Study on Embolism Emulsion of Lipiodol
of Anti-cancer Contrast Medium
Zhou Buliang, Li Ping, Tan Hengshan
(The Third Hospital Affiliated to Nanjing Medical University,Jiangshu Yizheng,211900)
Abstract Objective To investigate its clinical applicability,the physical stabilization,release rate and size of emulsion granular observed in the different ratio of LMU.Method MMC was dissolved in 60% UR,then it was mixed with 40% LIP in the different ratio by means of “Two Pumps-Interval”,the separate time of oil-water was observed and recorded in room temperature.The separation of oil-water,the change and characteristic of emulsion particles were studied by microscope and the size of emulsion particles in different ratio were measured.The content of MMC was determined with ZKS-4 intelligence instrument in the manner of Jiang Ye.The accumulated release percentage was counted,its absorption value was surveyed by ultraviolet and linear regression was made in different concentration.Finally,its standard curve equation was evaluated and released parameter was counted according to Weber's formula in PKBP-Ni program.Result LMU 5∶3 separated slow,the initial separation time was 3.5 hours and the complete separation time was 15 hours,the stable size of granular was 20～100μm,the ratio was the best one in the experiment due to good stability,low viscosity,easy IV infusion,low price,easy preparation,suitable granular and long affection.There was also a satisfactory result in LMU 5∶3 after ultrasonic emulsification.Conclusion The choice of emulsifying agent and compound preparation rate affected the release speed and physical stabilization of the drug.
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Key words emulsion;embolism;lipiodol
碘油(Lipiodol,LIP)造影剂和抗癌药混合乳剂是目前国内常用的肝动脉栓塞剂。但造影剂的种类及配制比例对物理稳定性和释放速率的影响，很少有人考证。本实验比较不同种类和不同配制比例的栓塞乳剂，以考证其临床适用性。
1 材料和方法
1.1 材料 40%LIP(上海淮海制药厂生产)，丝裂霉素C (MMC，日本协和发酵工业株式会社生产)，60%复方泛影葡胺(UR，上海信谊药厂生产)。
1.2 乳剂的配制 先将MMC溶解于UR中，再分别与LIP混合(LMU)。将所需成份装入用乳化针头连接的两个注射器中，来回推抽(泵法)20次，静置2～3min，再推抽20次。各比例乳剂均于8ml中加入MMC 4mg。在“泵法”的基础上，将配制好的乳剂置入H65025T超声震荡仪中，在0.6～0.8MA条个下超声处理15min后取出。
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1.3 物理稳定性观察 各比例乳剂配置后均静置于室温24h，观察油水分层时间。显微镜观察不同时间油水分层和乳粒变化及特征，并测定不同比例的乳剂颗粒大小。
1.4 释放度试验[1] 用ZKS-4智能溶出仪，将乳剂8ml注入pH 7.4浓度0.01mmol/L的PBS 100ml中，以浆叶法在37℃下连续搅拌4.5h，浆叶转速100r/min，于不同时间抽取4ml释放液测定MMC含量，计算释放累积百分率。同时再加入等量的新鲜PBS以维持起始量。
1.5 紫外法测定MMC含量[2] 用UV-754分光光度计测量。MMC的吸收峰为363μm,空白对照用PBS。MMC样品定量称取，用PBS稀释配制不同浓度，测定吸收值，用它的吸收值与不同浓度进行线性回归，求其标准曲线方程。将抽取的每份PBS中的MMC以释放累积百分率表示，绘出药时释放曲线，结果用PKBP-N1程序中威布尔公式计算释放参数。
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2 结果
2.1 配制比例与油水分层情况 不同比例乳剂静置状态下油水分层情况见附表。以LMU配制的1∶1，2∶1，3∶1，5∶1乳剂以及造影剂优维显和安其格纳芬及76% UR配制的各比例乳剂，均于0～10min分层；LMU 4∶1比2h开始，3h完全分层。LMU 5∶3和5∶2比开始为3.5～6.5h,完全分层时间为15、12h；加用超声乳化后LMU 5∶3比开始分层时间为8h，完全分层时间为12.5h。
2.2 紫外法标准曲线方程 标准曲线方程式：A=0.037C+0.0112(A为吸收度，r为相关系数，C为药物浓度)，r=0.9997。
2.3 乳剂释放结果 见附图。LMU5∶3乳剂的药物释放速度慢，释放速率常数Kr=1.0844,释放半衰期长，T50为0.29h;LMU5∶2虽然释放速率慢，但不稳定。
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2.4 物理稳定性 几种比例乳剂配制后即刻、24～48h时，LMU5∶3组乳粒稳定无破碎，较多分布于油相中，乳滴直径为20～100μm(平均为60μm)。24～48h乳粒分布和大小无变化。5∶2和3∶1组乳粒不稳定，破碎明显；乳滴直径为30～120μm(平均80μm)，1∶1组无乳粒，无分层，均为油状介质。
附表 不同乳剂静置24h油水分层情况 乳剂成份、比例
混合
方法
分层时间
碘油
水溶液
油乳∶水
(开始～完全)
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LIp
UR
1∶1
泵
即刻～即刻
LIp
UR
2∶1
泵
即刻～5min
LIp
UR
3∶1
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泵
即刻～5min
LIp
UR
4∶1
泵
2h～3h
LIp
UR
5∶1
泵
即刻～10min
LIp
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UR
5∶2
泵
6.5h～12h
LIp
UR
5∶3
泵
3.5h～15h
LIp
UR
5∶3
泵超泵
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8h～12.5h
LIp
优维显
5∶3
泵
即刻～5min
LIp
76%UR
5∶3
泵
即刻～即刻
LIp
安其格纳芬
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5∶3
泵
即刻～10min
时间(h)
附图 丝裂霉素混合乳剂释放曲线图
3 讨论
自从用肝动脉栓塞术(HAE)治疗肝癌以来，随着栓塞剂和栓塞方法的改进，HAE已成为非手术治疗肝癌的有效手段。栓塞剂的物理稳定性、释放速率和乳粒大小是决定栓塞疗效的重要因素。LIP是目前普通应用的微栓剂，其微小油滴可栓直径为0.05mm的血管，在乳化状态下由虹吸作用充填于微小动脉和肝窦中。单纯LIP没有治疗作用，常与抗癌药混合成较稳定的混悬液，但使用时经导管推注阻力大，具有一定难度。超液化碘油(Uitra-Fluid Lipiodol)粘度小，但与化疗药混合后药物释放快[2]。本实验考证的结果说明：①乳化剂的种类对栓塞剂的稳定性有明显影响。不同乳化剂配制后，静置24h油水分层结果，用优维显、安其格纳芬和76%UR配制的乳剂极不稳定，油水分层快，可能是上述造影剂与LIP的比重有差异(60%LIP比重1.47，76%UR比重高)。因此，用造影剂作乳化剂时，最好选择60%UR。②乳化剂和配制比例对栓塞剂的稳定性有明显影响。施海彬等[2]认为，LIP与UR配制的乳剂不稳定。本实验中，LMU 5∶3药物释放速度慢，释放半衰期长，维持时间长，为最佳配制比。
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采用“泵法”+“超声法”配制的LMU 5∶3结果较理想。LMU 5∶2虽然分层慢，但药物释放快。其它配制比的乳剂药物溶出均呈短时间内一过性高峰。表明栓塞乳剂只要乳化剂的种类和配制比例适宜，同样具有理想的稳定性。③乳化剂混合方法采用“二泵一间隔”的方法，即在乳化针头内来回推抽20次，静置2～3min后再推抽20次，这样的乳化比过去单纯“泵法”更均匀，无大油滴沉积，而且易于推注。对比较稳定的LMU5∶3加用超声乳化的方法结果，分层时间更加延长(8h)，而且静置后乳剂混合更均匀，因此超声乳化方法有待进一步探讨。④肝癌组织中的微血管，直径7～400μm,肿瘤边缘新生动脉血管直径25～75μm，直径>20μm栓塞物就不致通过毛细血管和肝窦。显微镜下观察LMU 5∶3有较多的乳粒分布于油相中乳滴稳定，静置48h无变化。肝动脉栓塞的理想部位是在毛细血管前微动脉段，即毛细血管吻合支水平，阻断肝内外动脉吻合支和肿瘤供血。既不引起栓塞动脉再通，又难以产生侧支循环。即属于微循环肝动脉栓塞，又不致引起肝实质损害。因此，LMU 5∶3乳粒直径为20～100μm完全达到了栓塞水平的要求，增强了“肝脏第一动力效应”。LMU 5∶2乳粒虽可见，但不稳定，易破裂。其余配制比均不稳定或呈油状介质。
, 百拇医药
实验证明，LIP、抗癌药与60%UR按5∶3比例配制，稳定性和释放速率理想，乳粒大小适中，可达到微栓作用，克服了LIP与药物机械混合入肝后分离快的缺点，延长了局部栓塞时间及药物与瘤细胞的接触时间；且配制容易，易于推注，价廉，稳定性好，效用持久。如配制中加用超声乳化方法，结果则更稳定。
参考文献
[1] 蔡剑秋，主编.中华人民共和国药典.第二部.附录.北京∶化学工业出版社，1995∶66
[2] 施海彬，李麟荪，谈恒山，等.碘油抗癌药乳剂与混悬剂的基础实验研究.介入放射学杂志，1994，3(1)∶33
(1999年9月1日收稿), 百拇医药
单位：周步良 李萍(南京医科大学第三附属医院，仪征，211900)；谈恒山(南京军区南京总医院药理科)
关键词：乳化栓塞剂；碘化油；配制
苏州医学院学报000613 摘要 目的 观察LMU乳化栓塞剂不同配制比的物理稳定性、释放速度及乳粒大小，考证其临床适用性。方法 将丝裂霉素C(MMC)溶解于60%复方泛影葡胺(UR)中，采用“二泵一间隔”法与40%LIP混合成不同配制比，静置于室温下，观察其油水分层时间。用显微镜观察不同时间油水分层和乳粒变化及特征，测定不同比例的乳粒大小。用ZKS-4智能溶出仪以浆叶法测定MMC含量，计算释放累积百分率，用紫外法测定其吸收值并与不同浓度进行线性回归，求其标准曲线方程，按PKBP-N1程序中威布尔公式计算释放参数。结果 LMU 5∶3分层慢，开始分层时间为3.5h，完全分层时间15h，乳滴稳定，直径为20～100μm，稳定性好，粘稠度小，易于推注，价廉，配制容易，乳粒适中，效用持久，为该实验最佳乳化比。LMU 5∶3经超声乳化后也有理想结果。结论 乳化剂的选择与配制比例影响药物的释放速度和物理稳定性。
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中图法分类号 R981.1
The Experimental Study on Embolism Emulsion of Lipiodol
of Anti-cancer Contrast Medium
Zhou Buliang, Li Ping, Tan Hengshan
(The Third Hospital Affiliated to Nanjing Medical University,Jiangshu Yizheng,211900)
Abstract Objective To investigate its clinical applicability,the physical stabilization,release rate and size of emulsion granular observed in the different ratio of LMU.Method MMC was dissolved in 60% UR,then it was mixed with 40% LIP in the different ratio by means of “Two Pumps-Interval”,the separate time of oil-water was observed and recorded in room temperature.The separation of oil-water,the change and characteristic of emulsion particles were studied by microscope and the size of emulsion particles in different ratio were measured.The content of MMC was determined with ZKS-4 intelligence instrument in the manner of Jiang Ye.The accumulated release percentage was counted,its absorption value was surveyed by ultraviolet and linear regression was made in different concentration.Finally,its standard curve equation was evaluated and released parameter was counted according to Weber's formula in PKBP-Ni program.Result LMU 5∶3 separated slow,the initial separation time was 3.5 hours and the complete separation time was 15 hours,the stable size of granular was 20～100μm,the ratio was the best one in the experiment due to good stability,low viscosity,easy IV infusion,low price,easy preparation,suitable granular and long affection.There was also a satisfactory result in LMU 5∶3 after ultrasonic emulsification.Conclusion The choice of emulsifying agent and compound preparation rate affected the release speed and physical stabilization of the drug.
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Key words emulsion;embolism;lipiodol
碘油(Lipiodol,LIP)造影剂和抗癌药混合乳剂是目前国内常用的肝动脉栓塞剂。但造影剂的种类及配制比例对物理稳定性和释放速率的影响，很少有人考证。本实验比较不同种类和不同配制比例的栓塞乳剂，以考证其临床适用性。
1 材料和方法
1.1 材料 40%LIP(上海淮海制药厂生产)，丝裂霉素C (MMC，日本协和发酵工业株式会社生产)，60%复方泛影葡胺(UR，上海信谊药厂生产)。
1.2 乳剂的配制 先将MMC溶解于UR中，再分别与LIP混合(LMU)。将所需成份装入用乳化针头连接的两个注射器中，来回推抽(泵法)20次，静置2～3min，再推抽20次。各比例乳剂均于8ml中加入MMC 4mg。在“泵法”的基础上，将配制好的乳剂置入H65025T超声震荡仪中，在0.6～0.8MA条个下超声处理15min后取出。
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1.3 物理稳定性观察 各比例乳剂配置后均静置于室温24h，观察油水分层时间。显微镜观察不同时间油水分层和乳粒变化及特征，并测定不同比例的乳剂颗粒大小。
1.4 释放度试验[1] 用ZKS-4智能溶出仪，将乳剂8ml注入pH 7.4浓度0.01mmol/L的PBS 100ml中，以浆叶法在37℃下连续搅拌4.5h，浆叶转速100r/min，于不同时间抽取4ml释放液测定MMC含量，计算释放累积百分率。同时再加入等量的新鲜PBS以维持起始量。
1.5 紫外法测定MMC含量[2] 用UV-754分光光度计测量。MMC的吸收峰为363μm,空白对照用PBS。MMC样品定量称取，用PBS稀释配制不同浓度，测定吸收值，用它的吸收值与不同浓度进行线性回归，求其标准曲线方程。将抽取的每份PBS中的MMC以释放累积百分率表示，绘出药时释放曲线，结果用PKBP-N1程序中威布尔公式计算释放参数。
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2 结果
2.1 配制比例与油水分层情况 不同比例乳剂静置状态下油水分层情况见附表。以LMU配制的1∶1，2∶1，3∶1，5∶1乳剂以及造影剂优维显和安其格纳芬及76% UR配制的各比例乳剂，均于0～10min分层；LMU 4∶1比2h开始，3h完全分层。LMU 5∶3和5∶2比开始为3.5～6.5h,完全分层时间为15、12h；加用超声乳化后LMU 5∶3比开始分层时间为8h，完全分层时间为12.5h。
2.2 紫外法标准曲线方程 标准曲线方程式：A=0.037C+0.0112(A为吸收度，r为相关系数，C为药物浓度)，r=0.9997。
2.3 乳剂释放结果 见附图。LMU5∶3乳剂的药物释放速度慢，释放速率常数Kr=1.0844,释放半衰期长，T50为0.29h;LMU5∶2虽然释放速率慢，但不稳定。
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2.4 物理稳定性 几种比例乳剂配制后即刻、24～48h时，LMU5∶3组乳粒稳定无破碎，较多分布于油相中，乳滴直径为20～100μm(平均为60μm)。24～48h乳粒分布和大小无变化。5∶2和3∶1组乳粒不稳定，破碎明显；乳滴直径为30～120μm(平均80μm)，1∶1组无乳粒，无分层，均为油状介质。
附表 不同乳剂静置24h油水分层情况 乳剂成份、比例
混合
方法
分层时间
碘油
水溶液
油乳∶水
(开始～完全)
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LIp
UR
1∶1
泵
即刻～即刻
LIp
UR
2∶1
泵
即刻～5min
LIp
UR
3∶1
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即刻～5min
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UR
4∶1
泵
2h～3h
LIp
UR
5∶1
泵
即刻～10min
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5∶2
泵
6.5h～12h
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UR
5∶3
泵
3.5h～15h
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UR
5∶3
泵超泵
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优维显
5∶3
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即刻～5min
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5∶3
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即刻～即刻
LIp
安其格纳芬
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5∶3
泵
即刻～10min
时间(h)
附图 丝裂霉素混合乳剂释放曲线图
3 讨论
自从用肝动脉栓塞术(HAE)治疗肝癌以来，随着栓塞剂和栓塞方法的改进，HAE已成为非手术治疗肝癌的有效手段。栓塞剂的物理稳定性、释放速率和乳粒大小是决定栓塞疗效的重要因素。LIP是目前普通应用的微栓剂，其微小油滴可栓直径为0.05mm的血管，在乳化状态下由虹吸作用充填于微小动脉和肝窦中。单纯LIP没有治疗作用，常与抗癌药混合成较稳定的混悬液，但使用时经导管推注阻力大，具有一定难度。超液化碘油(Uitra-Fluid Lipiodol)粘度小，但与化疗药混合后药物释放快[2]。本实验考证的结果说明：①乳化剂的种类对栓塞剂的稳定性有明显影响。不同乳化剂配制后，静置24h油水分层结果，用优维显、安其格纳芬和76%UR配制的乳剂极不稳定，油水分层快，可能是上述造影剂与LIP的比重有差异(60%LIP比重1.47，76%UR比重高)。因此，用造影剂作乳化剂时，最好选择60%UR。②乳化剂和配制比例对栓塞剂的稳定性有明显影响。施海彬等[2]认为，LIP与UR配制的乳剂不稳定。本实验中，LMU 5∶3药物释放速度慢，释放半衰期长，维持时间长，为最佳配制比。
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采用“泵法”+“超声法”配制的LMU 5∶3结果较理想。LMU 5∶2虽然分层慢，但药物释放快。其它配制比的乳剂药物溶出均呈短时间内一过性高峰。表明栓塞乳剂只要乳化剂的种类和配制比例适宜，同样具有理想的稳定性。③乳化剂混合方法采用“二泵一间隔”的方法，即在乳化针头内来回推抽20次，静置2～3min后再推抽20次，这样的乳化比过去单纯“泵法”更均匀，无大油滴沉积，而且易于推注。对比较稳定的LMU5∶3加用超声乳化的方法结果，分层时间更加延长(8h)，而且静置后乳剂混合更均匀，因此超声乳化方法有待进一步探讨。④肝癌组织中的微血管，直径7～400μm,肿瘤边缘新生动脉血管直径25～75μm，直径>20μm栓塞物就不致通过毛细血管和肝窦。显微镜下观察LMU 5∶3有较多的乳粒分布于油相中乳滴稳定，静置48h无变化。肝动脉栓塞的理想部位是在毛细血管前微动脉段，即毛细血管吻合支水平，阻断肝内外动脉吻合支和肿瘤供血。既不引起栓塞动脉再通，又难以产生侧支循环。即属于微循环肝动脉栓塞，又不致引起肝实质损害。因此，LMU 5∶3乳粒直径为20～100μm完全达到了栓塞水平的要求，增强了“肝脏第一动力效应”。LMU 5∶2乳粒虽可见，但不稳定，易破裂。其余配制比均不稳定或呈油状介质。
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实验证明，LIP、抗癌药与60%UR按5∶3比例配制，稳定性和释放速率理想，乳粒大小适中，可达到微栓作用，克服了LIP与药物机械混合入肝后分离快的缺点，延长了局部栓塞时间及药物与瘤细胞的接触时间；且配制容易，易于推注，价廉，稳定性好，效用持久。如配制中加用超声乳化方法，结果则更稳定。
参考文献
[1] 蔡剑秋，主编.中华人民共和国药典.第二部.附录.北京∶化学工业出版社，1995∶66
[2] 施海彬，李麟荪，谈恒山，等.碘油抗癌药乳剂与混悬剂的基础实验研究.介入放射学杂志，1994，3(1)∶33
(1999年9月1日收稿), 百拇医药