Bcl-2基因转染人白血病细胞系(K562)的生物学特性的观察
http://www.100md.com
37c医学网
作者：赵钧铭 隋雪梅 褚建新 王淑萍
单位：中国医学科学院 血液学研究所 实验血液学国家重点实验室，天津 300020
关键词：
中国病理生理杂志0010192
目的：我们在慢性粒细胞白血病(CML)急变研究中发现CML急变细胞bcl-2基因表达明显高于慢性期，甚至高于其他急性粒细胞白血病(中华血液学杂志，1999，20：27)；而CML急变时化疗反应甚差，是目前白血病治疗难题之一。为了进一步阐明Bcl-2基因在CML急变中的作用，我们将bcl-2基因转染人CML细胞系——K562，建立了一株bcl-2基因高表达的细胞株——K562/bcl-2，并对它的生物学特性，特别对抗肿瘤药物的反应进行了研究。方法：Bcl-2cDNA逆转录病毒载体质粒由中国医学科学院肿瘤研究所吴教授惠赠，按常规转染PA317细胞，经筛选、克隆获高病毒滴度细胞——D3。将成对数生长的K562细胞直接加在呈贴壁生长的D3细胞上进行转染，然后取出悬浮细胞在含G418培基中筛选出抗性细胞，即K562/bcl-2细胞。结果：1.BCL-2蛋白表达：K562/bcl-2细胞明显高于未转染的K562细胞，阳性率和阳性指数分别为71%和38%，95和41。 2.细胞形态学：K562/bcl-2细胞有明显聚集成丛现象，核分裂指数低于K562细胞，分别为0.8%和1.4%。3.细胞生长：细胞凋亡率和K562细胞的增殖速度接近，倍增时分别为22 h和22.7 h。 4.FACS检测：K562/bcl-2细胞凋亡率稍低于K562，分别为2.1%和4.8%，细胞周期两者无明显差别。5.核型：均为Ph阳性。6.细胞耐药性观察：通过Ara-C、高三杉脂碱(HHT)和柔红霉素(DNR)对比观察，发现K562/bcl-2细胞对Ara-C和HHT的耐受性明显高于K562细胞，对DNR的耐受性也有所增高。结论：Bcl-2基因转染使K562细胞发生聚集(提示细胞接触性抑制减低)，对化疗药物耐受性增加，进一步证明Bcl-2基因高表达与CML急变治疗反应差和预后不良有关，而与细胞增殖周期无明显关系，这就为CML急变的治疗提供了线索。, 百拇医药
单位：中国医学科学院 血液学研究所 实验血液学国家重点实验室，天津 300020
关键词：
中国病理生理杂志0010192
目的：我们在慢性粒细胞白血病(CML)急变研究中发现CML急变细胞bcl-2基因表达明显高于慢性期，甚至高于其他急性粒细胞白血病(中华血液学杂志，1999，20：27)；而CML急变时化疗反应甚差，是目前白血病治疗难题之一。为了进一步阐明Bcl-2基因在CML急变中的作用，我们将bcl-2基因转染人CML细胞系——K562，建立了一株bcl-2基因高表达的细胞株——K562/bcl-2，并对它的生物学特性，特别对抗肿瘤药物的反应进行了研究。方法：Bcl-2cDNA逆转录病毒载体质粒由中国医学科学院肿瘤研究所吴教授惠赠，按常规转染PA317细胞，经筛选、克隆获高病毒滴度细胞——D3。将成对数生长的K562细胞直接加在呈贴壁生长的D3细胞上进行转染，然后取出悬浮细胞在含G418培基中筛选出抗性细胞，即K562/bcl-2细胞。结果：1.BCL-2蛋白表达：K562/bcl-2细胞明显高于未转染的K562细胞，阳性率和阳性指数分别为71%和38%，95和41。 2.细胞形态学：K562/bcl-2细胞有明显聚集成丛现象，核分裂指数低于K562细胞，分别为0.8%和1.4%。3.细胞生长：细胞凋亡率和K562细胞的增殖速度接近，倍增时分别为22 h和22.7 h。 4.FACS检测：K562/bcl-2细胞凋亡率稍低于K562，分别为2.1%和4.8%，细胞周期两者无明显差别。5.核型：均为Ph阳性。6.细胞耐药性观察：通过Ara-C、高三杉脂碱(HHT)和柔红霉素(DNR)对比观察，发现K562/bcl-2细胞对Ara-C和HHT的耐受性明显高于K562细胞，对DNR的耐受性也有所增高。结论：Bcl-2基因转染使K562细胞发生聚集(提示细胞接触性抑制减低)，对化疗药物耐受性增加，进一步证明Bcl-2基因高表达与CML急变治疗反应差和预后不良有关，而与细胞增殖周期无明显关系，这就为CML急变的治疗提供了线索。, 百拇医药