基底细胞癌、鳞状细胞癌和Bowen病9p21、9q22.2－q22.3杂合性丢失的研究
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37c医学网
作者：何春涤 张学 王雅坤 孙开来 陈洪铎
单位：何春涤 王雅坤 陈洪铎(110001沈阳，中国医科大学第一临床学院皮肤科)；张学 孙开来(中国医科大学基础医学院遗传教研室)
关键词：癌；基底细胞；癌；鳞状细胞；Bowen病；杂合子丢失；染色体；人；9对
中华皮肤科杂志000410
【摘要】目的探讨9号染色体的改变在皮肤肿瘤发生过程中的作用。方法应用D9S319(9p21)和D9S299(9q22.2-q22.3)2个座位微卫星DNA多态标记，对基底细胞癌、鳞状细胞癌和Bowen病进行了杂合性丢失分析。结果在可提供信息的10例基底细胞癌、19例鳞状细胞癌和4例Bowen病中，均未观察到D9S319(9p21)杂合性丢失的存在；10例基底细胞癌中，有2例在9q22.2-q22.3(D9S299)位点出现杂合性丢失；因此，在9q可能存在具有潜力的抑癌基因。而在21例鳞状细胞癌及4例Bowen病中，均未观察到D9S299杂合性丢失的存在。结论9q22.2-q22.3可能存在具有潜力的抑癌基因，其缺失在基底细胞癌的发生中起一定作用。
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Loss of Heterozygosity on Chromosome 9p21, 9q22.2- 22.3 in Basal Cell Carcinoma, Squamous Cell Carcinoma andBowen′ s Disease
HE Chundi，ZHANG Xue，WANG Yakun，et al.
(Department of Dermatology, No.1 Hospital，China Medical University, Shenyang 110001)
【Abstract】 Objective To investigate the role of allele loss on chromosome 9 in the pathogenesis of basal cell carcinoma,squamous cell carcinoma and Bowen′ s disease.Methods Two polymorphic microsatellite sequences at loci D9S319 (9p21)and D9S299 (9q22.2- q22.3) were examined by polymerase chain reaction for loss of heterozygosity. Results Loss of heterozygosity with D9S319 (9p21) marker was not observed in 10 informative cases of sporadic basal cell carcinoma, 19 cases of squamous cell carcinoma and 4 cases of Bowen′ s disease. Allelic deletion of D9S299 was not found in all 21 informative cases of squamous cell carcinoma and 4 cases of Bowen′ s disease. D9S299 (9q22.2- 22.3) allele loss occurred in 2 of 10 informative cases of sporadic basal cell carcinoma, indicating that there might be a susceptible tumor suppressor gene on chromosome 9. Conclusion Our findings suggest that chromosome 9q22.2- 22.3 might contain a putative tumor suppressor gene, and loss of which may play an important role in the pathogenesis of basal cell carcinoma.
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【 Key words】 Carcinoma,basal cell Carcinoma,squamous cell Bowen′ s disease Loss of heterozygosity Chromosomes,human, pair 9
癌发生是一个多步骤、多阶段的过程，它是以多个癌基因的激活和/或抑癌基因(tumor suppressorgene，TSG)的失活或丢失为基础，二者在细胞繁殖过程中起着正负调节作用。杂 合性丢失(lossofheterozygosity，LOH)是指肿瘤基因组中特定染色体上某种DNA多态标记的等 位基因片段，由同一患者正常组织基因组的两种变成一种，即由杂合状态变为半合性 (hemizygo sity)、纯合性(homozygosity)或零合性(nullizygosity)。LOH是肿瘤细胞中染色体缺失的表现。检查 肿瘤基因组中特定染色体上的多态标记，通过LOH分析，可准确定位抑癌基因，并能发 现新的抑癌基因座位。国外报道在皮肤鳞状细胞癌和基底细胞癌中发现9号染色 体的部分或节段性缺失，即鳞状细胞癌在9号染色体短臂(9p)[1]、基底细胞癌在9号染 色体长臂(9q)[2-6]位点存在LOH。我们应用D9S319(9p21)和D9S299(9q22.2-q22.3)2个杂合度 高且易于PCR检测的微卫星DNA多态标记，对基底细胞癌、鳞状细胞癌和Bowen病进行了 LOH分析。
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病例和方法
一、病例资料
正常皮肤16例，年龄22～62岁,平均40.8岁，男7例，女9例，取材部位：面部3例、颈项1例 、躯干8例、上肢2例、下肢2例。Bowen病5例，年龄45～60岁，平均53.6岁，男4例，女1例 ，皮损位于面部1例、躯干1例、上肢1例、下肢2例。基底细胞癌14例，年龄38～71岁，平 均57.9岁，男9例，女5例，皮损位于头部2例、面部8例、躯干2例、下肢2例。鳞状细胞癌25例，其中Ⅰ～Ⅱ级10例，年龄49～ 80岁，平均61.1岁，男9例，女1例，皮损位于头部1例、面部2例、躯干3例、阴部1例、上 肢1例、下肢2例；Ⅲ级7例，年龄37～78岁，平均61.2岁，男5例，女2例，皮损位于面部 2例、上肢1例、下肢4例；Ⅳ级8例，年龄33～82岁，平均57.1岁，男5例，女3例，皮损位 于头部2例、面部4例、耳廓2例。
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N：同一患者的正常组织；T：肿瘤组织。例1、5、7、9、10保持杂合状态，未见LOH；例 2为纯合状态；例3、4不提供信息
图1鳞状细胞癌D9S319(9p21)位点微卫星多态标记分析
二、方法
1.DNA提取：①将OCT包埋的组织块置无菌TE溶液(10mmol/LTrispH8.0，0.1mol/LEDTA)，在0℃ 状态下逐渐融化。用镊子剔除半透明OCT包埋物后，TE溶液反复洗涤3次。无OCT包埋的 组织块省略此步骤。②解剖显微镜下剔去皮下组织，分离病损处及病损旁外观正常皮肤 ，切碎后加10倍体积的TE溶液，在预冷(-20℃)的研钵中研磨成匀浆状。③移入1.5mL的 Eppendorf管内，加入蛋白酶K(终质量浓度为100μg/mL)和十二烷基硫酸钠(SDS，终浓度0.5% )，40℃消化过夜。④等体积平衡酚:氯仿抽提2次，加入1/20体积乙酸钠(3mol/L，pH5.2)及 2倍体积4℃无水乙醇，轻轻混合沉淀DNA后，用15.20mol/L(70%)乙醇漂洗2次。⑤将提取的 DNA溶解在TE溶液中稀释成100ng/μL，4℃保存。
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2.微卫星多态标记引物：选择9号染色体上2个DNA微卫星多态标记D9S319和D9S299，分别 位于染色体9p21和9q22.2-q22.3。引物顺序D9S319为5′-GCCAGTGTTCTCCAGAGAAA-3′和 5′-TGGGATA TGTCAGCCAAAAT-3′；D9S299为5′-AAGTGTTGC ATCAGAGCCTC-3′和5′-AGTGTGAACATTATTTCA TTCTGG-3′，引物由上海细胞生物学研究所DNA合成室合成，其扩增的产物均为短的串 联重复顺序，重复单位含4个碱基序列，分别为GATA和TAGA；等位片段长度分别为173 bp和216bp，杂合度分别为88%和70%(CooperativeHumanLinkageCenter,CHLC数据库资料)。
3.LOH分析：在含100ng基因组DNA10μL反应体系中，加入α-32P-dCTP(北京亚辉生物工 程公司)标记产物进行PCR扩增。具体操作方法为：取1μL基因组DNA(约100ng)，1μL10× PCR缓冲液，1μLMgCl2，1μLdNTP，0.25μL引物混合液(各20mmol/L)，α-32P-dCTP0.5 μL,Taq酶0.5U(武汉华中农业大学)，无菌去离子水5.15μL，加20μL矿物油(Sigma公司)覆盖 ，混匀，瞬间离心，置PE480DNA扩增仪(PE公司)内扩增。扩增条件为：95℃2min后，经 94℃45s→50℃45s→72℃1min30个循环，72℃延伸5min。PCR产物用甲酰胺变性示踪液稀 释2～10倍，95℃10min变性。取2～3μL上样于含7mol/L尿素和20%甲酰胺的5%聚丙烯酰 胺变性凝胶内，55℃80W电泳2h，将电泳凝胶移至厚滤纸上，保鲜膜覆盖，置增感屏暗 盒内，上覆X光胶片(FUJI公司)，-70℃放射自显影24～48h后洗片。
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4.LOH结果判定：皮损旁外观正常组织基因组DNA为某一标记的杂合子时，即出现2个等 位片段，可提供信息用于LOH分析。如果出现1个片段，即不能提供信息。与皮损旁外观 正常组织对比，皮损组织DNAPCR扩增产物带1条消失或其中1条带信号明显减弱时，则为 LOH。
结果
在可提供信息的10例基底细胞癌、19例鳞状细胞癌(图1)和4例Bowen病中，均未观察到 D9S319(9p21)LOH的存在；10例基底细胞癌中，有2例在D9S299位点出现LOH(图2)；而21例鳞 状细胞癌及4例Bowen病中均未观察到D9S299LOH的存在。
讨论
Gailani等[2]在8例基底细胞癌中观察到4例于9p13(D9S18)位点出现LOH。Quinn等[4]在9例 可提供信息的鳞状细胞癌中，发现3例出现9p21-23(D9S162)的LOH，但在可提供信息的 19例基底细胞癌和7例Bowen病中,未发现该座位存在LOH,我们在可提供信息的4例Bowen病,10例基底细胞癌和19例鳞状细胞癌中,未观察到9p21(D9S319)LOH的存在.因此,9p21区域与基底细胞癌和鳞状细胞癌关系尚需进一步研究.
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图2基底细胞癌D9S299(9q22.2-q22.3)位点微卫星多态标记分析
Quinn等[4]对24例基底细胞癌、14例鳞状细胞癌和16例Bowen病进行了9q13-21.2(D9S9)、 9q22.2-q22.3(D9S12)、9q22.3(D9S29)、9q3(D9S 160)和9q34(D9S7)等多个座位的筛查，结果在14例基底细胞癌(14/24，58%)、4例鳞状细胞癌 (4/14，28%)和3例Bowen病(3/16，19%)中存在9q的LOH。
Gailani等[2]在5个痣样基底细胞癌综合征(又称Gorlin综合征)家系及16个散发性基底细胞癌 中，发现9号染色体的9q31(D9S29)、9q31-q34(D9S28)、9q34(ABL、D9S10和D9S7)的LOH高达 72%。Shanley等[4]在101例基底细胞癌(散发63例，家族性38例)中，观察到9q22.2-q31位 点的LOH为46%。Konishi等[3]在11例基底细胞癌可提供信息的5例中，有2例(占40%)出现 9q31-q34(D9S28)和9q31(D9S29)的LOH。我们在9例提供信息的基底细胞癌中，观察到2例出现 9q22.2-q22.3(D9S299)位点的LOH。因此，在9q可能存在具有潜力的抑癌基因，并在基底细 胞癌的发生中起一定作用。
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Zaphiropoulos等[5]在10例鳞状细胞癌中，有5例观察到9q22.3-q31(D9S109)位点的微卫星 DNA标记出现异常游动带，有1例出现LOH。而本研究在可提供信息的21例鳞状细胞癌和 4例Bowen病中，未观察到9q22.2-q22.3(D9S299)的LOH。因此，鳞状细胞癌的抑癌基因是否 存在其它座位上，值得进一步研究。
国家自然科学基金资助课题(39470651)
参考文献
[1]Quinn AG, Campbell C, Healy E, et al. Chromosome 9 allele loss occurs in both basal and squamous cell carcinomas of the skin. J Invest Dermatol, 1994,102:300- 303.
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[2]Gailani MR, Bale SJ, Leffell DJ, et al. Developmental defects in Gorlin syndrome related to a putative tumor suppressor gene on chromosome 9. Cell, 1992,69:111- 117.
[3]Konishi K, Yamanishi K, Ishizaki K, et al. Analysis of p53 gene mutations and loss of heterozygosity for loci on chromosome 9q in basal cell carcinoma. Cancer Lett, 1994,79:67- 72.
[4]Shanley SM, Dawkins H, Wainwright BJ, et al. Fine deletion mapping on the long arm of chromosome 9 in sporadic and familial basal cell carcinomas. Hum Mol Genet, 1995,4:129- 133.
, 百拇医药
[5]Zaphiropoulos PG, Soderkvist P, Hedblad MA, et al. Genetic instability of microsatellite markers in region q22.3- q31 of chromosome 9 in skin squamous cell carcinomas. Biochem Biophys Res Commun, 1994,201:1495- 1501.
[6]Ohta M, Berd D, Shimizu M, et al. Deletion mapping of chromosome region 9p21- p22 surrounding the CDKN2 locus in melanoma. Int J Cancer, 1996,65:762- 767.
(收稿日期：1999-10-07), 百拇医药
单位：何春涤 王雅坤 陈洪铎(110001沈阳，中国医科大学第一临床学院皮肤科)；张学 孙开来(中国医科大学基础医学院遗传教研室)
关键词：癌；基底细胞；癌；鳞状细胞；Bowen病；杂合子丢失；染色体；人；9对
中华皮肤科杂志000410
【摘要】目的探讨9号染色体的改变在皮肤肿瘤发生过程中的作用。方法应用D9S319(9p21)和D9S299(9q22.2-q22.3)2个座位微卫星DNA多态标记，对基底细胞癌、鳞状细胞癌和Bowen病进行了杂合性丢失分析。结果在可提供信息的10例基底细胞癌、19例鳞状细胞癌和4例Bowen病中，均未观察到D9S319(9p21)杂合性丢失的存在；10例基底细胞癌中，有2例在9q22.2-q22.3(D9S299)位点出现杂合性丢失；因此，在9q可能存在具有潜力的抑癌基因。而在21例鳞状细胞癌及4例Bowen病中，均未观察到D9S299杂合性丢失的存在。结论9q22.2-q22.3可能存在具有潜力的抑癌基因，其缺失在基底细胞癌的发生中起一定作用。
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Loss of Heterozygosity on Chromosome 9p21, 9q22.2- 22.3 in Basal Cell Carcinoma, Squamous Cell Carcinoma andBowen′ s Disease
HE Chundi，ZHANG Xue，WANG Yakun，et al.
(Department of Dermatology, No.1 Hospital，China Medical University, Shenyang 110001)
【Abstract】 Objective To investigate the role of allele loss on chromosome 9 in the pathogenesis of basal cell carcinoma,squamous cell carcinoma and Bowen′ s disease.Methods Two polymorphic microsatellite sequences at loci D9S319 (9p21)and D9S299 (9q22.2- q22.3) were examined by polymerase chain reaction for loss of heterozygosity. Results Loss of heterozygosity with D9S319 (9p21) marker was not observed in 10 informative cases of sporadic basal cell carcinoma, 19 cases of squamous cell carcinoma and 4 cases of Bowen′ s disease. Allelic deletion of D9S299 was not found in all 21 informative cases of squamous cell carcinoma and 4 cases of Bowen′ s disease. D9S299 (9q22.2- 22.3) allele loss occurred in 2 of 10 informative cases of sporadic basal cell carcinoma, indicating that there might be a susceptible tumor suppressor gene on chromosome 9. Conclusion Our findings suggest that chromosome 9q22.2- 22.3 might contain a putative tumor suppressor gene, and loss of which may play an important role in the pathogenesis of basal cell carcinoma.
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【 Key words】 Carcinoma,basal cell Carcinoma,squamous cell Bowen′ s disease Loss of heterozygosity Chromosomes,human, pair 9
癌发生是一个多步骤、多阶段的过程，它是以多个癌基因的激活和/或抑癌基因(tumor suppressorgene，TSG)的失活或丢失为基础，二者在细胞繁殖过程中起着正负调节作用。杂 合性丢失(lossofheterozygosity，LOH)是指肿瘤基因组中特定染色体上某种DNA多态标记的等 位基因片段，由同一患者正常组织基因组的两种变成一种，即由杂合状态变为半合性 (hemizygo sity)、纯合性(homozygosity)或零合性(nullizygosity)。LOH是肿瘤细胞中染色体缺失的表现。检查 肿瘤基因组中特定染色体上的多态标记，通过LOH分析，可准确定位抑癌基因，并能发 现新的抑癌基因座位。国外报道在皮肤鳞状细胞癌和基底细胞癌中发现9号染色 体的部分或节段性缺失，即鳞状细胞癌在9号染色体短臂(9p)[1]、基底细胞癌在9号染 色体长臂(9q)[2-6]位点存在LOH。我们应用D9S319(9p21)和D9S299(9q22.2-q22.3)2个杂合度 高且易于PCR检测的微卫星DNA多态标记，对基底细胞癌、鳞状细胞癌和Bowen病进行了 LOH分析。
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病例和方法
一、病例资料
正常皮肤16例，年龄22～62岁,平均40.8岁，男7例，女9例，取材部位：面部3例、颈项1例 、躯干8例、上肢2例、下肢2例。Bowen病5例，年龄45～60岁，平均53.6岁，男4例，女1例 ，皮损位于面部1例、躯干1例、上肢1例、下肢2例。基底细胞癌14例，年龄38～71岁，平 均57.9岁，男9例，女5例，皮损位于头部2例、面部8例、躯干2例、下肢2例。鳞状细胞癌25例，其中Ⅰ～Ⅱ级10例，年龄49～ 80岁，平均61.1岁，男9例，女1例，皮损位于头部1例、面部2例、躯干3例、阴部1例、上 肢1例、下肢2例；Ⅲ级7例，年龄37～78岁，平均61.2岁，男5例，女2例，皮损位于面部 2例、上肢1例、下肢4例；Ⅳ级8例，年龄33～82岁，平均57.1岁，男5例，女3例，皮损位 于头部2例、面部4例、耳廓2例。
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N：同一患者的正常组织；T：肿瘤组织。例1、5、7、9、10保持杂合状态，未见LOH；例 2为纯合状态；例3、4不提供信息
图1鳞状细胞癌D9S319(9p21)位点微卫星多态标记分析
二、方法
1.DNA提取：①将OCT包埋的组织块置无菌TE溶液(10mmol/LTrispH8.0，0.1mol/LEDTA)，在0℃ 状态下逐渐融化。用镊子剔除半透明OCT包埋物后，TE溶液反复洗涤3次。无OCT包埋的 组织块省略此步骤。②解剖显微镜下剔去皮下组织，分离病损处及病损旁外观正常皮肤 ，切碎后加10倍体积的TE溶液，在预冷(-20℃)的研钵中研磨成匀浆状。③移入1.5mL的 Eppendorf管内，加入蛋白酶K(终质量浓度为100μg/mL)和十二烷基硫酸钠(SDS，终浓度0.5% )，40℃消化过夜。④等体积平衡酚:氯仿抽提2次，加入1/20体积乙酸钠(3mol/L，pH5.2)及 2倍体积4℃无水乙醇，轻轻混合沉淀DNA后，用15.20mol/L(70%)乙醇漂洗2次。⑤将提取的 DNA溶解在TE溶液中稀释成100ng/μL，4℃保存。
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2.微卫星多态标记引物：选择9号染色体上2个DNA微卫星多态标记D9S319和D9S299，分别 位于染色体9p21和9q22.2-q22.3。引物顺序D9S319为5′-GCCAGTGTTCTCCAGAGAAA-3′和 5′-TGGGATA TGTCAGCCAAAAT-3′；D9S299为5′-AAGTGTTGC ATCAGAGCCTC-3′和5′-AGTGTGAACATTATTTCA TTCTGG-3′，引物由上海细胞生物学研究所DNA合成室合成，其扩增的产物均为短的串 联重复顺序，重复单位含4个碱基序列，分别为GATA和TAGA；等位片段长度分别为173 bp和216bp，杂合度分别为88%和70%(CooperativeHumanLinkageCenter,CHLC数据库资料)。
3.LOH分析：在含100ng基因组DNA10μL反应体系中，加入α-32P-dCTP(北京亚辉生物工 程公司)标记产物进行PCR扩增。具体操作方法为：取1μL基因组DNA(约100ng)，1μL10× PCR缓冲液，1μLMgCl2，1μLdNTP，0.25μL引物混合液(各20mmol/L)，α-32P-dCTP0.5 μL,Taq酶0.5U(武汉华中农业大学)，无菌去离子水5.15μL，加20μL矿物油(Sigma公司)覆盖 ，混匀，瞬间离心，置PE480DNA扩增仪(PE公司)内扩增。扩增条件为：95℃2min后，经 94℃45s→50℃45s→72℃1min30个循环，72℃延伸5min。PCR产物用甲酰胺变性示踪液稀 释2～10倍，95℃10min变性。取2～3μL上样于含7mol/L尿素和20%甲酰胺的5%聚丙烯酰 胺变性凝胶内，55℃80W电泳2h，将电泳凝胶移至厚滤纸上，保鲜膜覆盖，置增感屏暗 盒内，上覆X光胶片(FUJI公司)，-70℃放射自显影24～48h后洗片。
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4.LOH结果判定：皮损旁外观正常组织基因组DNA为某一标记的杂合子时，即出现2个等 位片段，可提供信息用于LOH分析。如果出现1个片段，即不能提供信息。与皮损旁外观 正常组织对比，皮损组织DNAPCR扩增产物带1条消失或其中1条带信号明显减弱时，则为 LOH。
结果
在可提供信息的10例基底细胞癌、19例鳞状细胞癌(图1)和4例Bowen病中，均未观察到 D9S319(9p21)LOH的存在；10例基底细胞癌中，有2例在D9S299位点出现LOH(图2)；而21例鳞 状细胞癌及4例Bowen病中均未观察到D9S299LOH的存在。
讨论
Gailani等[2]在8例基底细胞癌中观察到4例于9p13(D9S18)位点出现LOH。Quinn等[4]在9例 可提供信息的鳞状细胞癌中，发现3例出现9p21-23(D9S162)的LOH，但在可提供信息的 19例基底细胞癌和7例Bowen病中,未发现该座位存在LOH,我们在可提供信息的4例Bowen病,10例基底细胞癌和19例鳞状细胞癌中,未观察到9p21(D9S319)LOH的存在.因此,9p21区域与基底细胞癌和鳞状细胞癌关系尚需进一步研究.
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图2基底细胞癌D9S299(9q22.2-q22.3)位点微卫星多态标记分析
Quinn等[4]对24例基底细胞癌、14例鳞状细胞癌和16例Bowen病进行了9q13-21.2(D9S9)、 9q22.2-q22.3(D9S12)、9q22.3(D9S29)、9q3(D9S 160)和9q34(D9S7)等多个座位的筛查，结果在14例基底细胞癌(14/24，58%)、4例鳞状细胞癌 (4/14，28%)和3例Bowen病(3/16，19%)中存在9q的LOH。
Gailani等[2]在5个痣样基底细胞癌综合征(又称Gorlin综合征)家系及16个散发性基底细胞癌 中，发现9号染色体的9q31(D9S29)、9q31-q34(D9S28)、9q34(ABL、D9S10和D9S7)的LOH高达 72%。Shanley等[4]在101例基底细胞癌(散发63例，家族性38例)中，观察到9q22.2-q31位 点的LOH为46%。Konishi等[3]在11例基底细胞癌可提供信息的5例中，有2例(占40%)出现 9q31-q34(D9S28)和9q31(D9S29)的LOH。我们在9例提供信息的基底细胞癌中，观察到2例出现 9q22.2-q22.3(D9S299)位点的LOH。因此，在9q可能存在具有潜力的抑癌基因，并在基底细 胞癌的发生中起一定作用。
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Zaphiropoulos等[5]在10例鳞状细胞癌中，有5例观察到9q22.3-q31(D9S109)位点的微卫星 DNA标记出现异常游动带，有1例出现LOH。而本研究在可提供信息的21例鳞状细胞癌和 4例Bowen病中，未观察到9q22.2-q22.3(D9S299)的LOH。因此，鳞状细胞癌的抑癌基因是否 存在其它座位上，值得进一步研究。
国家自然科学基金资助课题(39470651)
参考文献
[1]Quinn AG, Campbell C, Healy E, et al. Chromosome 9 allele loss occurs in both basal and squamous cell carcinomas of the skin. J Invest Dermatol, 1994,102:300- 303.
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[2]Gailani MR, Bale SJ, Leffell DJ, et al. Developmental defects in Gorlin syndrome related to a putative tumor suppressor gene on chromosome 9. Cell, 1992,69:111- 117.
[3]Konishi K, Yamanishi K, Ishizaki K, et al. Analysis of p53 gene mutations and loss of heterozygosity for loci on chromosome 9q in basal cell carcinoma. Cancer Lett, 1994,79:67- 72.
[4]Shanley SM, Dawkins H, Wainwright BJ, et al. Fine deletion mapping on the long arm of chromosome 9 in sporadic and familial basal cell carcinomas. Hum Mol Genet, 1995,4:129- 133.
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[5]Zaphiropoulos PG, Soderkvist P, Hedblad MA, et al. Genetic instability of microsatellite markers in region q22.3- q31 of chromosome 9 in skin squamous cell carcinomas. Biochem Biophys Res Commun, 1994,201:1495- 1501.
[6]Ohta M, Berd D, Shimizu M, et al. Deletion mapping of chromosome region 9p21- p22 surrounding the CDKN2 locus in melanoma. Int J Cancer, 1996,65:762- 767.
(收稿日期：1999-10-07), 百拇医药