多发性硬化患者血清TGF-β1的检测及其临床意义
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作者：何志义 吕昌龙 刘凤芝 付国 王刚
单位：何志义(中国医科大学第一临床学院神经内科，沈阳110001)；吕昌龙(中国医科大学基础医学院免疫教研室，沈阳110001)；刘凤芝(中国医科大学基础医学院免疫教研室，沈阳110001)；王刚(中国医科大学第一临床学院急诊科，沈阳110001)
关键词：多发性硬化；血清TGF-β1
中国免疫学杂志000320 摘 要 目的：探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在多发性硬化(MS)发生、发展中的作用。方法：采用酶联免疫吸附ELISA方法，对45例MS患者血清TGF-β1的含量进行了测定。结果：与对照组和NIND组相比，MS患者血清TGF-β1含量明显下降(P<0.01)；与Stable MS组相比，RRMS组和CPMS组TGF-β1含量亦明显下降(P<0.05)；动态观察显示，随着病情的好转，TGF-β1含量亦逐渐升高。结论：血清中TGF-β1的检测对判断MS患者的病情变化具有重要的临床实用价值。
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中国图书分类号 R744.5
Measurements of TGF-β1 in serum from multiple sclerosis and their significance in clinical sclerosis
HE Zhi-Yi L Chang-Long LIU Feng-Zhi et al.
(Department of Neurology,The First Affiliated Hospital,China Medical University,Shenyang 110001)
Abstract：Objective： To explore the effects of transforming growth factor-β1(TGF-β1)on the development of multiple sclerosis(MS). Levels of TGF-β1 in serum were measured in 45 patients with MS by ELISA method.Results:The results showed that the levels of TGF-β1 in the serum of MS were decreased,as compared with in the normal and noninflammatory neurologic disease(NIND) groups(P<0.01).The levels of TGF-β1in the serum of RRMS and CPMS were decreased, as compared with in the stable MS groups(P<0.05).The TGF-β1levels increased after treatment against MS.Conclusion:Measuring serum TGF-β1 might be one of the important parameters for clinical evaluation in patients with MS.
, 百拇医药
Key words：MS TGF-β1 in serum
目前研究表明，细胞因子在自身免疫性疾病(如多发性硬化，MS)中的作用日益受到人们的重视[1]。本文检测了45例MS患者血清转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量，旨在探讨其在MS发生、发展中的作用。
1 材料与方法
1.1 研究对象 MS组：45例，男19例，女26例，年龄16～50岁，平均年龄32.1±13.7岁。其中，良好型(Stable MS)10例，缓解-复发型(Relapsing-remittingMS，RRMS)26例，慢性进展型(Chronic progressive MS,CPMS)9例。头颅MRI按受累部位依次为视神经、侧脑室旁、基底节，大脑半球，小脑及脑干，病灶呈点状或融合成片两种。上述病例均符合Poser[2]等修订的诊断标准。
, 百拇医药
为动态观察治疗前、后患者血清TGF-β1含量变化与临床疗效之间的关系，对RRMS 26例中的15例患者在给予甲基强的松龙500 mg/日冲击治疗5 d，氢化考的松100 mg/日7d，然后用强的松30 mg/日口服治疗1个月后进行第2次采血。上述病例在采血前2周均未用过激素或其它免疫抑制剂。
对照组：非炎症性神经病组(NIND)45例，男25例，女20例，平均年龄32.2±15.6岁。包括脑血管病10例，震颤麻痹8例，周期性麻痹2例，脊髓空洞症4例，运动神经元病6例，癔病5例，偏头痛10例。
正常对照组(NC)：45例，健康献血员，年龄、性别等均与MS组相匹配。
1.2 方法 采取空腹肘静脉血5 ml，分离血清，-70℃保存备用。血清TGF-β1的测定采用酶联免疫吸附ELISA方法，试剂盒购于深圳市晶生实业有限公司，TGF-β1的全部操作均按上述试剂盒说明书进行，OD495值由美国产EL-309全自动酶标检测仪(Bio-TEK instruments,U.S.A)测定。
, 百拇医药
根据各稀释标准品TGF-β1的单位及OD495值绘制参考标准曲线，再根据标准曲线算出待测标本TGF-β1的浓度。
1.3 统计学分析 数据以
±s表示，各均数间比较采用t检验。
2 结果
2.1 MS患者血清含量的变化与Control和NIND组相比，MS患者血清含量明显下降(P<0.01)，见表1。
表1 MS患者血清TGF-β1水平的变化(±s)
Tab.1 The level of TGF-β1 in multiple sclerosis(±s) Group
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n
TGF-β1(ng/ml)
MS
45
22.8±10.31)
NIND
45
33.6±11.2
Control
45
35.8±13.9
Note: Values are x±s,By t test;MS:Multiple sclerosis;NIND:Non inflammatory neurological diseases；1)P<0.01，compared with control group and NIND group
, 百拇医药
2.2 MS各型血清中TGF-β1含量的比较 与Stable MS组相比，RRMS组和CPMS组的TGF-β1含量明显降低(P<0.05)，见表2。
表2 MS各型患者血清TGF-β1水平的比较(±s)
Tab.2 The level of TGF-β1 in different type of multiple sclerosis(±s) Group
n
TGF-β1(ng/ml)
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RRMS
26
17.8±9.31)
CPMS
9
19.2±10.61)
Stable MS
10
36.7±15.8
Note:Values are x±s,By t test;RRMS:Relapsing-Remitting MS;CPMS:Chronic progressive MS;1)P<0.05 compared with stable MS group
, 百拇医药
2.3 MS患者治疗前、后血清TGF-β1的含量变化 MS患者治疗前血清TGF-β1的含量为(23.6±9.1) ng/ml，与治疗后的(37.2±12.3) ng/ml相比，明显升高(P<0.01)。
3 讨论
近年来研究认为TGF-β1细胞因子在MS中重要作用已引起众多学者的关注[1]。为探明其详细的作用机制，本文对MS患者血清TGF-β1的含量进行了检测，结果显示，与NC组和NIND组相比，MS患者血清TGF-β1含量明显降低。经激素治疗后TGF-β1含量明显上升。另外，从MS各分型的结果来看，与Stable MS相比，RRMS和CPMS组中TGF-β1的含量显著减少。上述结果表明，TGF-β1含量的高低可作为判断MS患者病情变化和疗效的指标之一。 TGF-β1是近年来发现与细胞凋亡密切相关的细胞内源性因子，TGF-β1分子为二聚体肽，由二硫键相连接，分子量为25kD，属于表皮生长抑制因子，是参与各种器官分化和退化的蛋白家族成员之一。TGF-β1对细胞增殖起促进还是起抑制作用，取决于细胞类型及其它生长因子的存在[3]。此外，局灶性脑缺血TGF-β1高表达对缺血神经元损伤的保护作用，是通过抑制炎症过程及促进缺血脑组织损伤的修复而实现的。这种保护作用与抗氧化及抑制细胞凋亡的作用密切相关[4]。此外，TGF-β1亦是一种免疫调节细胞因子，其作为中枢神经系统(CNS)和免疫系统之间信息交流的重要活性分子，直接影响CNS的功能，同时，它亦可视为机体免疫状态的监测指标[3]。
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于国平等报道[5]，TGF-β1在MS急性期病灶中的巨噬细胞，小胶质细胞和脑血管内皮细胞中呈阳性表达，这提示TGF-β1参与MS的发生。TGF-β1在MS的主要作用机制包括：①抑制T细胞及B细胞功能；②介导IgM和IgG转换；③降低MHC-Ⅱ类抗原表达；④调节整合素表达；⑤抑制炎症反应及脑水肿[6]。此外，TGF-β1还参与血管反应，影响细胞外基质蛋白酶的活性，从而对机体组织损伤的修复亦起重要的作用。我们的结果显示RRMS和CPMS患者血清TGF-β1含量明显下降，因此，提示MS患者血清TGF-β1的降低可能参与MS的发生，并与疾病的活动有关。但是，血清TGF-β1的浓度与中枢神经系统TGF-β1的浓度是否一致尚不十分清楚，这些均有待于今后进一步研究。
目前人们正在探索如何发挥TGF-β1在中枢神经系统损伤中的保护和修复作用来达到治疗MS的目的。这些研究可能会为今后临床治疗MS开辟一条新的途径。
, 百拇医药
作者简介：何志义，男，37岁，博士，副教授，从事神经病学和神经免疫学研究；
参考文献：
[1]戚晓昆，朱 克. 粘附分子在炎性脱髓鞘病中的作用. 中华神经科杂志，1997；30(6)：375
[2]Poser C M,Paty D W,Scheinberg L et al. New diagnostic criteria for MS:Guidelines for research protocols.Ann Neurol,1983;13:227
[3]张晓东，王文亮. 细胞凋亡相关基因研究进展.国外医学*分子生物学分册，1994；16(4)：148
[4]Wang X,Yveo T L,White R F et al. Transforming growth factor-betal exhibits delayed gene expression following focal cerebral ischemia.Brain Res Bull,1995;36(6):607
[5]于国平，朱 克，田东华et al.多发性硬化症脑脱髓鞘病灶TGF-β1和bFGF的表达. 中华神经科杂志，1998；31(2)：86
[6]杜 静，龚非力. TGF-β1与中枢神经系统疾病. 国外医学.免疫学分册，1997；20(2)：98
收稿日期：1998-11-10
修改日期：1999-12-11
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单位：何志义(中国医科大学第一临床学院神经内科，沈阳110001)；吕昌龙(中国医科大学基础医学院免疫教研室，沈阳110001)；刘凤芝(中国医科大学基础医学院免疫教研室，沈阳110001)；王刚(中国医科大学第一临床学院急诊科，沈阳110001)
关键词：多发性硬化；血清TGF-β1
中国免疫学杂志000320 摘 要 目的：探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在多发性硬化(MS)发生、发展中的作用。方法：采用酶联免疫吸附ELISA方法，对45例MS患者血清TGF-β1的含量进行了测定。结果：与对照组和NIND组相比，MS患者血清TGF-β1含量明显下降(P<0.01)；与Stable MS组相比，RRMS组和CPMS组TGF-β1含量亦明显下降(P<0.05)；动态观察显示，随着病情的好转，TGF-β1含量亦逐渐升高。结论：血清中TGF-β1的检测对判断MS患者的病情变化具有重要的临床实用价值。
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中国图书分类号 R744.5
Measurements of TGF-β1 in serum from multiple sclerosis and their significance in clinical sclerosis
HE Zhi-Yi L Chang-Long LIU Feng-Zhi et al.
(Department of Neurology,The First Affiliated Hospital,China Medical University,Shenyang 110001)
Abstract：Objective： To explore the effects of transforming growth factor-β1(TGF-β1)on the development of multiple sclerosis(MS). Levels of TGF-β1 in serum were measured in 45 patients with MS by ELISA method.Results:The results showed that the levels of TGF-β1 in the serum of MS were decreased,as compared with in the normal and noninflammatory neurologic disease(NIND) groups(P<0.01).The levels of TGF-β1in the serum of RRMS and CPMS were decreased, as compared with in the stable MS groups(P<0.05).The TGF-β1levels increased after treatment against MS.Conclusion:Measuring serum TGF-β1 might be one of the important parameters for clinical evaluation in patients with MS.
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Key words：MS TGF-β1 in serum
目前研究表明，细胞因子在自身免疫性疾病(如多发性硬化，MS)中的作用日益受到人们的重视[1]。本文检测了45例MS患者血清转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量，旨在探讨其在MS发生、发展中的作用。
1 材料与方法
1.1 研究对象 MS组：45例，男19例，女26例，年龄16～50岁，平均年龄32.1±13.7岁。其中，良好型(Stable MS)10例，缓解-复发型(Relapsing-remittingMS，RRMS)26例，慢性进展型(Chronic progressive MS,CPMS)9例。头颅MRI按受累部位依次为视神经、侧脑室旁、基底节，大脑半球，小脑及脑干，病灶呈点状或融合成片两种。上述病例均符合Poser[2]等修订的诊断标准。
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为动态观察治疗前、后患者血清TGF-β1含量变化与临床疗效之间的关系，对RRMS 26例中的15例患者在给予甲基强的松龙500 mg/日冲击治疗5 d，氢化考的松100 mg/日7d，然后用强的松30 mg/日口服治疗1个月后进行第2次采血。上述病例在采血前2周均未用过激素或其它免疫抑制剂。
对照组：非炎症性神经病组(NIND)45例，男25例，女20例，平均年龄32.2±15.6岁。包括脑血管病10例，震颤麻痹8例，周期性麻痹2例，脊髓空洞症4例，运动神经元病6例，癔病5例，偏头痛10例。
正常对照组(NC)：45例，健康献血员，年龄、性别等均与MS组相匹配。
1.2 方法 采取空腹肘静脉血5 ml，分离血清，-70℃保存备用。血清TGF-β1的测定采用酶联免疫吸附ELISA方法，试剂盒购于深圳市晶生实业有限公司，TGF-β1的全部操作均按上述试剂盒说明书进行，OD495值由美国产EL-309全自动酶标检测仪(Bio-TEK instruments,U.S.A)测定。
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根据各稀释标准品TGF-β1的单位及OD495值绘制参考标准曲线，再根据标准曲线算出待测标本TGF-β1的浓度。
1.3 统计学分析 数据以
±s表示，各均数间比较采用t检验。2 结果
2.1 MS患者血清含量的变化与Control和NIND组相比，MS患者血清含量明显下降(P<0.01)，见表1。
表1 MS患者血清TGF-β1水平的变化(
±s)Tab.1 The level of TGF-β1 in multiple sclerosis(
±s) Group, http://www.100md.com
n
TGF-β1(ng/ml)
MS
45
22.8±10.31)
NIND
45
33.6±11.2
Control
45
35.8±13.9
Note: Values are x±s,By t test;MS:Multiple sclerosis;NIND:Non inflammatory neurological diseases；1)P<0.01，compared with control group and NIND group
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2.2 MS各型血清中TGF-β1含量的比较 与Stable MS组相比，RRMS组和CPMS组的TGF-β1含量明显降低(P<0.05)，见表2。
表2 MS各型患者血清TGF-β1水平的比较(
±s)Tab.2 The level of TGF-β1 in different type of multiple sclerosis(
±s) Groupn
TGF-β1(ng/ml)
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RRMS
26
17.8±9.31)
CPMS
9
19.2±10.61)
Stable MS
10
36.7±15.8
Note:Values are x±s,By t test;RRMS:Relapsing-Remitting MS;CPMS:Chronic progressive MS;1)P<0.05 compared with stable MS group
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2.3 MS患者治疗前、后血清TGF-β1的含量变化 MS患者治疗前血清TGF-β1的含量为(23.6±9.1) ng/ml，与治疗后的(37.2±12.3) ng/ml相比，明显升高(P<0.01)。
3 讨论
近年来研究认为TGF-β1细胞因子在MS中重要作用已引起众多学者的关注[1]。为探明其详细的作用机制，本文对MS患者血清TGF-β1的含量进行了检测，结果显示，与NC组和NIND组相比，MS患者血清TGF-β1含量明显降低。经激素治疗后TGF-β1含量明显上升。另外，从MS各分型的结果来看，与Stable MS相比，RRMS和CPMS组中TGF-β1的含量显著减少。上述结果表明，TGF-β1含量的高低可作为判断MS患者病情变化和疗效的指标之一。 TGF-β1是近年来发现与细胞凋亡密切相关的细胞内源性因子，TGF-β1分子为二聚体肽，由二硫键相连接，分子量为25kD，属于表皮生长抑制因子，是参与各种器官分化和退化的蛋白家族成员之一。TGF-β1对细胞增殖起促进还是起抑制作用，取决于细胞类型及其它生长因子的存在[3]。此外，局灶性脑缺血TGF-β1高表达对缺血神经元损伤的保护作用，是通过抑制炎症过程及促进缺血脑组织损伤的修复而实现的。这种保护作用与抗氧化及抑制细胞凋亡的作用密切相关[4]。此外，TGF-β1亦是一种免疫调节细胞因子，其作为中枢神经系统(CNS)和免疫系统之间信息交流的重要活性分子，直接影响CNS的功能，同时，它亦可视为机体免疫状态的监测指标[3]。
, http://www.100md.com
于国平等报道[5]，TGF-β1在MS急性期病灶中的巨噬细胞，小胶质细胞和脑血管内皮细胞中呈阳性表达，这提示TGF-β1参与MS的发生。TGF-β1在MS的主要作用机制包括：①抑制T细胞及B细胞功能；②介导IgM和IgG转换；③降低MHC-Ⅱ类抗原表达；④调节整合素表达；⑤抑制炎症反应及脑水肿[6]。此外，TGF-β1还参与血管反应，影响细胞外基质蛋白酶的活性，从而对机体组织损伤的修复亦起重要的作用。我们的结果显示RRMS和CPMS患者血清TGF-β1含量明显下降，因此，提示MS患者血清TGF-β1的降低可能参与MS的发生，并与疾病的活动有关。但是，血清TGF-β1的浓度与中枢神经系统TGF-β1的浓度是否一致尚不十分清楚，这些均有待于今后进一步研究。
目前人们正在探索如何发挥TGF-β1在中枢神经系统损伤中的保护和修复作用来达到治疗MS的目的。这些研究可能会为今后临床治疗MS开辟一条新的途径。
, 百拇医药
作者简介：何志义，男，37岁，博士，副教授，从事神经病学和神经免疫学研究；
参考文献：
[1]戚晓昆，朱 克. 粘附分子在炎性脱髓鞘病中的作用. 中华神经科杂志，1997；30(6)：375
[2]Poser C M,Paty D W,Scheinberg L et al. New diagnostic criteria for MS:Guidelines for research protocols.Ann Neurol,1983;13:227
[3]张晓东，王文亮. 细胞凋亡相关基因研究进展.国外医学*分子生物学分册，1994；16(4)：148
[4]Wang X,Yveo T L,White R F et al. Transforming growth factor-betal exhibits delayed gene expression following focal cerebral ischemia.Brain Res Bull,1995;36(6):607
[5]于国平，朱 克，田东华et al.多发性硬化症脑脱髓鞘病灶TGF-β1和bFGF的表达. 中华神经科杂志，1998；31(2)：86
[6]杜 静，龚非力. TGF-β1与中枢神经系统疾病. 国外医学.免疫学分册，1997；20(2)：98
收稿日期：1998-11-10
修改日期：1999-12-11
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