噪音对大鼠脑神经细胞损伤的机制研究
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作者：刘岌虹 游国雄
单位：刘岌虹(解放军230医院，辽宁 丹东 118000)；游国雄(第四军医大学唐都医院)
关键词：
现代康复000343
本实验是采用C-fos癌基因的形态学方法研究心理应激。
1材料与方法
1.1材料成年雄性SD大鼠24只，体重250～300g。根据实验目的分为3组，除正常对照组(无噪音组)3只外，其余每组均为7只，分为3组；异搏定、安定、蒸馏水组。
主要试剂与仪器：Leitzhryomat1700冰冻切片机，光电分析天平(分度值0.1mg)、OlympusBH-α显微镜、噪音刺激器，异搏定、安定、蒸馏水，Tritonχ-100液、蔗糖、葡萄糖氧化酶、0.05%二氨基联苯胺(DAB，Sigme美国)，卵白素-生物素-过氧化酶复合物ABC(1：500Sigma美国)，羊抗Fos抗体(1：2000CambridgeRescarchBiochemical,英国)，生物素结合驴抗羊血清(1：200，美国)。
, 百拇医药
1.2实验方法86dB噪音刺激SD大鼠5min后分组给腹腔注射异搏定5mg/kg，安定16.6mg/kg，蒸馏水1mg/只,继续噪音刺激2h处死。立即左心室灌注4℃4%多聚甲醛(0.1ml/L磷酸缓冲液配制)。然后取大鼠全脑浸入15%蔗糖液中2～24h，冰冻切片50μm的连续冠状切片。ABC免疫组化法染色，呈色结束后常规铬明胶贴片，空气干燥脱水，透明后用DPX封片。
1.3观测方法观测脑干听觉通路神经元以及与情绪和自主神经有关的边缘系统皮质下部位的杏仁核和下丘脑室旁核(PVN)、视上核等处出现的Fos蛋白聚集。
1.4图像定量分析IPS-500型图像处理系统对3组切片图像摄入计算机，用系统内设计的程序测定切片上Fos蛋白染色的密度值，达到测定范围后，系统自动分析并显示染色密度值。所得数值进行统计学分析。
2结果
, 百拇医药 86dB噪音刺激组与蒸馏水组2h后在大鼠脑干听觉通路的耳蜗核、上橄榄核、外侧丘系；下丘脑室旁核、隔区、丘脑前核、杏仁核等处，均具明显Fos蛋白阳性标记，异搏定组为(5.43±1.27)%,安定组为(9.86±1.07)%,蒸馏水组为(79.64±1.52)%。用药组与不用药组比较差异有显著性意义(P〈0.05)大鼠在86dB噪声刺激后出现全身哆嗦，继之反应迟钝，动作减少，以至无探索行为。注射蒸馏水组表现基本同上述。注射异搏定和安定组则异常行为表现程度明显减轻。
3讨论
本实验采用的C-fos癌基因表达法是利用神经元受到兴奋性刺激时，其C-fos癌基因的表达急剧增加，在胞浆中合成的Fos蛋白迅速大量地堆积与胞核的特点，用抗Fos蛋白抗体免疫组化法在脑切片上对受刺激的神经元加以染色，从而提示出受到兴奋的神经组织的部位[1,2]。从本实验结果出发，异搏定组Fos蛋白表达密度值低于蒸馏水组，表明了该药抑制了C-fos癌基因的转录及表达，这可能是该药抑制噪音刺激后脑神经核团损伤的机制之一。根据实验结果推测，噪音刺激激活了兴奋性氨基酸(谷氨酸)，从而激活了GA-NMDA(N-甲基-D-天门冬氨酸)受体及-系列第2信使，使有关神经细胞胞膜渗透性发生改变，导致大量Ca2+内流和细胞内Ca2+超载，使神经细胞严重受损。而该药抵制了上述结果，其机制可能即在于阻断了Ca2+内流过程[3,4]，以达到保护心理应激所致脑损害的目的。
, 百拇医药
参考文献：
[1]张遐，鞠躬.C-fos癌基因的诱导和显示[J]. 生物科学进展，1991，22：229
[2]Dragunow M,Faull RLM,Jansen KLR.MK-801,an antagonist of NMDA receptors,inhibits injury- induced C- fos protein accumulation in rat brain[J].Neurosci Lett,1990,109:128
[3]Imaki T,Shibasaki T,Wang XQ,et al.Intracereb-ro ventricular administration of corticotropin-relea-sing factor antagonist attenuates C- fos mRNA expression in the paraventricular nucleus after stress[J].Neuroendocrinol,1995,61:445
[4]徐如祥，陈长才，袁冠前.脑损伤早期神经细胞C-fos基因表达变化与脑水肿[J].解放军医学杂志，1995，20(2)：83
收稿日期：2000-01-02, 百拇医药
单位：刘岌虹(解放军230医院，辽宁 丹东 118000)；游国雄(第四军医大学唐都医院)
关键词：
现代康复000343
本实验是采用C-fos癌基因的形态学方法研究心理应激。
1材料与方法
1.1材料成年雄性SD大鼠24只，体重250～300g。根据实验目的分为3组，除正常对照组(无噪音组)3只外，其余每组均为7只，分为3组；异搏定、安定、蒸馏水组。
主要试剂与仪器：Leitzhryomat1700冰冻切片机，光电分析天平(分度值0.1mg)、OlympusBH-α显微镜、噪音刺激器，异搏定、安定、蒸馏水，Tritonχ-100液、蔗糖、葡萄糖氧化酶、0.05%二氨基联苯胺(DAB，Sigme美国)，卵白素-生物素-过氧化酶复合物ABC(1：500Sigma美国)，羊抗Fos抗体(1：2000CambridgeRescarchBiochemical,英国)，生物素结合驴抗羊血清(1：200，美国)。
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1.2实验方法86dB噪音刺激SD大鼠5min后分组给腹腔注射异搏定5mg/kg，安定16.6mg/kg，蒸馏水1mg/只,继续噪音刺激2h处死。立即左心室灌注4℃4%多聚甲醛(0.1ml/L磷酸缓冲液配制)。然后取大鼠全脑浸入15%蔗糖液中2～24h，冰冻切片50μm的连续冠状切片。ABC免疫组化法染色，呈色结束后常规铬明胶贴片，空气干燥脱水，透明后用DPX封片。
1.3观测方法观测脑干听觉通路神经元以及与情绪和自主神经有关的边缘系统皮质下部位的杏仁核和下丘脑室旁核(PVN)、视上核等处出现的Fos蛋白聚集。
1.4图像定量分析IPS-500型图像处理系统对3组切片图像摄入计算机，用系统内设计的程序测定切片上Fos蛋白染色的密度值，达到测定范围后，系统自动分析并显示染色密度值。所得数值进行统计学分析。
2结果
, 百拇医药 86dB噪音刺激组与蒸馏水组2h后在大鼠脑干听觉通路的耳蜗核、上橄榄核、外侧丘系；下丘脑室旁核、隔区、丘脑前核、杏仁核等处，均具明显Fos蛋白阳性标记，异搏定组为(5.43±1.27)%,安定组为(9.86±1.07)%,蒸馏水组为(79.64±1.52)%。用药组与不用药组比较差异有显著性意义(P〈0.05)大鼠在86dB噪声刺激后出现全身哆嗦，继之反应迟钝，动作减少，以至无探索行为。注射蒸馏水组表现基本同上述。注射异搏定和安定组则异常行为表现程度明显减轻。
3讨论
本实验采用的C-fos癌基因表达法是利用神经元受到兴奋性刺激时，其C-fos癌基因的表达急剧增加，在胞浆中合成的Fos蛋白迅速大量地堆积与胞核的特点，用抗Fos蛋白抗体免疫组化法在脑切片上对受刺激的神经元加以染色，从而提示出受到兴奋的神经组织的部位[1,2]。从本实验结果出发，异搏定组Fos蛋白表达密度值低于蒸馏水组，表明了该药抑制了C-fos癌基因的转录及表达，这可能是该药抑制噪音刺激后脑神经核团损伤的机制之一。根据实验结果推测，噪音刺激激活了兴奋性氨基酸(谷氨酸)，从而激活了GA-NMDA(N-甲基-D-天门冬氨酸)受体及-系列第2信使，使有关神经细胞胞膜渗透性发生改变，导致大量Ca2+内流和细胞内Ca2+超载，使神经细胞严重受损。而该药抵制了上述结果，其机制可能即在于阻断了Ca2+内流过程[3,4]，以达到保护心理应激所致脑损害的目的。
, 百拇医药
参考文献：
[1]张遐，鞠躬.C-fos癌基因的诱导和显示[J]. 生物科学进展，1991，22：229
[2]Dragunow M,Faull RLM,Jansen KLR.MK-801,an antagonist of NMDA receptors,inhibits injury- induced C- fos protein accumulation in rat brain[J].Neurosci Lett,1990,109:128
[3]Imaki T,Shibasaki T,Wang XQ,et al.Intracereb-ro ventricular administration of corticotropin-relea-sing factor antagonist attenuates C- fos mRNA expression in the paraventricular nucleus after stress[J].Neuroendocrinol,1995,61:445
[4]徐如祥，陈长才，袁冠前.脑损伤早期神经细胞C-fos基因表达变化与脑水肿[J].解放军医学杂志，1995，20(2)：83
收稿日期：2000-01-02, 百拇医药