王丽娟 巴音吉力 卢淮武 李晶 林仲秋

    临床研究论著

    CRP+1444 C/T基因多态性与子宫内膜癌的相关性研究

    王丽娟 巴音吉力 卢淮武 李晶 林仲秋

    目的探讨CRP+1444C/T基因多态性与子宫内膜癌(EC)的相关性。方法选择203例EC患者(EC组)和同期健康体检者203名(对照组)，采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RELP)方法检测CRP+1444C/T基因多态性，并结合血清超敏CRP(hsCRP)水平及其他临床资料进行分析。结果EC组的血清hsCRP高于对照组(P0.05)。与子宫内膜癌BMI对象与方法

    一、研究对象

    2011年3月至2014年10月在我院就诊的无血缘关系的203例汉族EC患者(EC组)，其EC均经手术病理活组织检查(活检)证实。以一对一选取年龄相匹配的203名汉族女性健康体检者为对照组。2组均排除合并其他恶性肿瘤或有家族性肿瘤病史者。

    二、方法

    1.采血及外周血DNA提取

    研究组患者于入院后行体格检查并于次日清晨采集空腹血进行相关指标检测，对照组女性的数据为体检时获得。抽取入选者外周静脉血3 ml，以32 g/L柠檬酸钠抗凝，采用低渗破裂红细胞、标准蛋白酶K消化和饱和DNA试剂盒(北京天根公司)抽取外周血白细胞基因组DNA，-20℃保存。

    2.CRP基因多态性分析

    根据GenBank公布的CRP基因全序列设计引物，由Invitrogen生物工程有限公司合成。上游引物：5-AGCTCGTTAACTATGCTGGGGCA-3，下游引物：5-CTTCTCAGCTCTTGCCTTATGAGT-3，扩增的PCR产物为181 bp。PCR反应体系为25 μl，包括预制Taq混和物12.5 μl、Template DNA 1.5 μl、上下游引物各2 μl、灭菌蒸馏水7 μl。PCR反应条件：95℃预变性5 min，94℃变性40 s，55℃退火40 s，72℃延伸90 s，共35个循环，72℃延伸10 min，4℃保存。取PCR产物5 μl采用1%琼脂糖凝胶-溴乙锭染色法进行电泳，使用UVI自动凝胶成像及分析系统观察扩增结果。

    3.PCR产物的限制性酶切

    使用限制性内切酶HpyCH4Ⅲ对CRP+1444C/T位点的PCR扩增产物进行酶切。酶切体系为30 μl，包括PCR产物10 μl、HpyCH4Ⅲ内切酶1 μl，10倍FastDigest缓冲液2 μl，灭菌蒸馏水17 μl。于37℃孵育1～2 h ......