·基础研究论著·

    作者单位：510120 广州，广州医科大学附属第一医院肾病科

    肾胺酶预防大鼠缺血再灌注致急性肾损伤的机制研究

    急性肾损伤(AKI)在住院患者中的发病率达21.6%，病死率达23.9%，并加快慢性肾衰竭的进展速度，因此对其的诊断及防治是临床和基础研究的热点[1-3]。AKI的病因多种多样，其中以缺血再灌注损伤(IRI)最常见。肾胺酶是近年来发现的、主要由肾小管上皮细胞合成和分泌并降解循环系统中儿茶酚胺的蛋白质，对其研究领域最初主要集中在心血管系统，后来发现其能够改善缺血再灌注(IR)引起的器官损伤，譬如心脏、脑和肾脏等[4-7]。但是，目前有关肾胺酶对IR所致AKI(IR-AKI)的预防作用，其具体机制尚未完全阐明，因此进一步探讨肾胺酶预防IR-AKI的机制，为其在AKI的应用具有重要意义。本研究构建IR-AKI的大鼠模型，予外源性人重组肾胺酶预处理，旨在了解外源性人重组肾胺酶对IR-AKI的影响，并探讨其可能机制。

    材料与方法

    一、实验动物与主要试剂

    实验用SD大鼠由南方医科大学实验动物中心提供，合格证号SCXK-(粤)2011-0015。实验方案通过广州医科大学动物伦理审查委员会审核批准，实验在广州医科大学实验动物中心完成。重组人肾胺酶购自以色列ProSpecbio公司；兔抗鼠Bax及Bcl-2多克隆抗体均由武汉博士德公司提供，山羊抗兔二抗由北京中杉金桥公司提供，丙二醛由南京建成生物工程研究所提供。

    二、方 法

    1. 动物分组

    36只SD雄性大鼠适应性喂养7 d后随机分为假手术组、空白对照组(IR组)、肾胺酶干预组(IR+肾胺酶组)，每组各12只。

    2. IR-AKI大鼠模型的构建

    参照文献[8]方法，建立IR-AKI的SD大鼠模型：10%水合氯醛3 ml/kg腹腔注射麻醉生效后，腹正中线行一3~4 cm切口，找到左肾门，分离输尿管游离出左肾蒂；动脉血管夹夹闭肾蒂，肉眼可见左肾由鲜红转为暗红，最后呈紫黑色，30 min后松开血管夹，待观察左肾充血由紫黑转暗红再转为鲜红色后，肾表面可见散在出血点，切除右肾，缝合切口。假手术组大鼠仅游离出双侧肾蒂，不夹闭肾动脉，伤口用生理盐水纱布覆盖，30 min后缝合切口。IR+肾胺酶组按照文献[9]方法，麻醉前20 min腹腔注射重组人肾胺酶(1 mg/kg)；IR组麻醉前腹腔注射等剂量0.1 ml生理盐水。18 h后3组大鼠麻醉后开腹，下腔静脉采血后全部处死，血液经高速离心后留上清血浆于-20℃保存 ......