·基础研究论著·

    作者单位：510120 广州，中山大学孙逸仙纪念医院消化内科

    1型糖尿病小鼠肠道潘氏细胞的杀菌功能改变

    1型糖尿病是以慢性血糖升高为特征的代谢性疾病，主要由胰岛B细胞破坏，胰岛素绝对缺乏引起[1]。近年来，越来越多的临床调查研究提示1型糖尿病患者发生肠道细菌、病毒和真菌等病原体感染的几率显著增加[2-4]。在正常机体中，肠道黏膜的屏障功能是维持机体内外稳态的重要基础。其中，肠道黏膜上皮隐窝底部的潘氏细胞所分泌的溶菌酶在保持肠道菌群平衡以及抵御病原生物侵袭等方面起着极其重要的作用[5-6]。

    研究显示，在肠道潘氏细胞的分化、成熟过程中主要受Wnt和Notch信号通路调控[7]。本实验组的前期研究发现，包括潘氏细胞在内，1型糖尿病小鼠的各种肠上皮细胞均存在分化比例的改变[8]。然而，在1型糖尿病的病理状态下，机体中的胰岛素绝对缺乏，除了诱发肠上皮细胞分化比例异常，是否影响潘氏细胞的成熟及其杀菌功能，目前相关报道不多，还需要进一步研究探讨。因此，本研究旨在探讨在1型糖尿病小鼠模型中肠道潘氏细胞杀菌功能的改变，以及恢复胰岛素水平对其功能的影响，为糖尿病肠道感染的相关研究提供实验依据。

    材料与方法

    一、主要试剂

    链脲菌素购自Sigma公司；柠檬酸购自广州化学试剂厂；中性鱼精蛋白胰岛素购于诺和诺德公司；ELISA试验盒购于Merck Millipore公司；大肠埃希菌K12 ER2738菌株购于New England Biolabs公司，兔抗小鼠溶菌酶抗体购于Santa Cruz公司；免疫组织化学检查SP试剂盒购于迈新公司。

    二、实验动物

    实验动物为C57BL/6J小鼠，共30只，雌雄各半，8周龄，购于中山大学北校区实验动物中心，在中山大学北校区实验中心屏障环境中饲养。所有有关动物的实验过程均在中山大学实验动物伦理委员会的监督指导下完成，符合实验动物伦理学要求。

    三、实验方法

    1.糖尿病小鼠模型的建立

    将30只C57BL/6J小鼠随机分为3组，每组10只：正常对照组(Control组)、1型糖尿病组(UDM组)、胰岛素治疗组(IDM组)。1%链脲菌素溶液由无菌0.1 mol/L柠檬酸缓冲液(pH=4.5)溶解链脲菌素制成，并立即对UDM及IDM组小鼠行腹腔内注射，剂量为70 mg/kg，1次/日，连续5 d。Control组给予相同体积的无菌0.1 mol/L柠檬酸缓冲液腹腔内注射，1次/日 ......