范大为 刘凯 袁成刚 杜晓媛

    124010 锦州，辽宁医学院病理教研室(范大为，杜晓媛)；124010 锦州，辽河油田总医院欢喜岭医院 (范大为，袁成刚)；124010 锦州，辽河油田总医院 (刘凯)

    Beclin-1与EZH2在肾透明细胞癌中的表达及其意义

    范大为刘凯袁成刚杜晓媛

    124010 锦州，辽宁医学院病理教研室(范大为，杜晓媛)；124010 锦州，辽河油田总医院欢喜岭医院 (范大为，袁成刚)；124010 锦州，辽河油田总医院 (刘凯)

    【摘要】目的探讨自噬相关基因Beclin-1和果蝇Zeste同源物增强子2(EZH2)基因在肾透明细胞癌(肾癌)中的表达水平及其相关性，分析其预测肾癌预后的作用。方法收集30对肾肿瘤及癌旁肾组织新鲜标本以及133例肾癌石蜡组织标本，采用免疫组织化学染色法(免疫组化)、实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测上述标本中Beclin-1及EZH2的表达情况，分析Beclin-1与EZH2表达的相关性，以及两者对预测肾癌术后复发及生存率的差异，并使用Cox回归分析肾癌的病理分级、TNM分期、淋巴结转移、年龄、性别与两者表达的相关性，探讨其是否为肾癌预后的影响因素。结果30对肾癌及癌旁肾组织中，肾癌组织中Beclin-1蛋白及mRNA表达水平均低于癌旁肾组织，而EZH2蛋白及mRNA表达水平均高于癌旁肾组织(P均65岁13例，开放手术18例、腹腔镜手术12例，肿瘤分期T1～T4分别为11、8、5、6例，肿瘤分级G1～G3级分别为9、12、9例，淋巴结转移1例。另收集2005年5月至2009年5月在辽宁医学院附属医院及辽河油田总医院进行肾癌根治术的133例患者肾癌石蜡组织标本。来源者男74例、女59例，年龄≤65岁41例、>65岁92例，开放手术42例、腹腔镜手术91例，肿瘤分期T1～T4分别为50、33、30、17例，肿瘤分级G1～G3级分别为15、52、56例，淋巴结转移23例。

    二、Beclin-1、EZH2蛋白表达水平的检测

    采用蛋白免疫印迹法检测，按照试剂盒说明书操作。Beclin-1抗体(美国Santa Cruz，1∶200稀释)；EZH2(美国Abcam，1∶100)。以β-actin为内参照，各组所得条带灰度值与β-actin灰度值之比为蛋白相对表达水平。

    三、Beclin-1、EZH2 mRNA表达水平的检测

    采用实时荧光定量PCR检测，按照试剂说明书进行。即用型实时定量 PCR (qPCR) 试剂盒SYBR Green qPCR SuperMix购自日本Takara公司 ......