陈曦 李秋霞 魏秋静 古洁若

    ·基础研究论著·

    CD14在强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞和血清中的表达研究

    陈曦李秋霞魏秋静古洁若

    目的研究CD14基因在强直性脊柱炎(AS)患者外周血单个核细胞中RNA，和血清中蛋白的表达情况，并对CD14基因进行相关性分析。方法采集病情活动期AS患者的静脉血，分离外周血单个核细胞(PBMC)后提取RNA，同时从静脉血中离心分离血清于-20℃保存。其中21例AS活动期患者和20名健康志愿者的外周血行Microarray芯片检测。使用ELISA法检测另外40例活动期AS患者和40名健康志愿者血清中CD14的含量。对结果基因进行信号通路分析，探讨其参与AS发病的相关机制。结果Microarray芯片检测CD14在AS患者PBMC中mRNA的表达的荧光强度值为6 824±1 449，健康对照组为4 027±923。ELISA法检测AS患者血清中CD14蛋白含量中位数为2 568 kU/L，健康对照组为 905 kU/L。CD14在AS患者PBMC中mRNA和血清中蛋白的表达水平均高于健康对照组(P均对象与方法

    一、研究对象

    纳入Microarray芯片和ELISA研究的AS患者均来自中山大学附属第三医院门诊或住院患者，健康对照组血液标本均取自中山大学附属第三医院健康体检者，所有受试对象均知情同意并自愿参与本研究。Microarray芯片研究中，AS患者的男女比为13∶8，年龄(35±9)岁；健康对照者的男女比为10∶10，年龄(37±9)岁。ELISA研究中，AS患者的男女比为33∶7，年龄(31±12)岁；健康对照者的男女比为33∶7，年龄(30±9)岁。AS患者均符合1984年修订的AS纽约诊断标准，该组患者均处在疾病活动期，Bath AS病情活动指数(BASDAI)>4分，或ESR升高或CRP升高。纳入Microarray实验组AS患者的BASDAI为4.6(2.6，7.8)分；纳入ELISA实验组的患者BASDAI为5.0(2.9，8.2)分。AS组与健康对照组的性别构成、年龄比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。排除合并其他自身免疫性疾病、肝肾疾病、感染、恶性肿瘤及血液系统疾病等。本研究已通过医院伦理委员会审批。

    二、主要试剂与仪器

    逆转录试剂盒采用PrimeScriptRTMaster Mix (Perfect Real Time)(日本Takara公司)。微阵列芯片(Sentrix Human Ref- 8_v2 Beadchips ......