若感染效率达80%以上，即应用流式细胞仪检测3组细胞的病毒转染阳性率(GFP)及实验组和对照组IL-9表达情况。将3组细胞消化、离心、重悬后，室温、暗室、固定20 min，破膜，加入IL-9抗体(上海西格玛奥德里奇贸易有限公司)，抗体与100μl的1×Perm Wash Buffer按1∶100使用，4℃、避光，孵育30 min，离心后弃上清，Hanks重悬细胞，转移至流式管上流式细胞仪检测。

    同时，用qRT-PCR法检测3组细胞中IL-9的mRNA表达情况。提取3组细胞的总RNA后，使用Prime ScriptRT Master 试剂盒行逆转录反应，反应程序：37℃ 15 min，85℃ 15 s，4℃ 1 min，使RNA逆转录成cDNA。以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)为内参，反应程序：95℃ 5 min，95℃10 s，60℃ 30 s，共40个循环，进行PCR扩增。根据仪器自动计算所得每组标本的Ct值，计算目的基因mRNA的相对表达量2-ΔΔCt，△△Ct=实验组△Ct -对照组△Ct，△Ct=目的基因Ct值-內参Ct值 ...... 如果您在使用手机等流览时无法查看或下载全文，可能是被搜索引擎失真“转码”，请点击屏幕最下方的“电脑版”或“原网页”访问。


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