卵巢早衰患者来源特异干细胞分化为单倍体细胞的研究(1)
卵巢早衰患者来源特异干细胞分化为单倍体细胞的研究,诱导多能干细胞,减数分裂,卵子
【摘要】 目的 探索卵巢早衰患者來源的诱导多能干细胞(POF-iPSC)分化为单倍体细胞的可能。方法 以卵巢早衰患者外周血单个核细胞进行核转染自行建系POF-iPSC,培养基中添加激活素A、糖原合酶激酶-3抑制剂CHIR-99021共2 d,随后添加骨形态生成蛋白4及表皮生长因子5 d,再添加视黄酸7 d,设基线(D0)、培养7 d(D7)、培养14 d(D14)组及无诱导的对照组。应用实时定量PCR及免疫荧光染色分别检测原始生殖细胞或减数分裂相关基因的mRNA及蛋白表达水平;荧光原位杂交技术(FISH)检测细胞内X染色体单体;流式细胞仪检测单倍体细胞比例。结果 POF-iPSC在诱导过程中,D0组细胞形态为长梭形纤维样,D7组细胞体积变大,但胞质稀薄,具有多个触角,D14组细胞核及核仁变得明显。在mRNA相对表达水平上,NANOG随分化而下降,BLIMP1逐步上升,STELLA、OCT4、DDX4、γH2AX、MLH1于D7组最高,DAZL、SYCP3、PRDM9于D7组及D14组逐步提高(P均< 0.01) ......
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