4.cGMP ELISA试剂盒检测工程菌分泌的尿鸟苷素的生物活性

    将含重组质粒pBV 220-ESS-uroguanylin的双歧杆菌(重组质粒组)37℃培养36h，然后再42℃诱导表达16h，同样方法培养野生型双歧杆菌(空白对照组)和含有pBV220质粒的双歧杆菌(空载对照组)。在4个6孔板用含有10%胎牛血清的DMEM洗2次培养结肠癌细胞T84，48h后吸去每孔的培养基，然后每孔加入1ml含10%胎牛血清的DMEM洗2次;每孔再加入1ml含10%胎牛血清和1mmol/L 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤的DMEM、37℃孵育1h;然后将各组细菌培养上清液加入到孔板中(每组菌液上清分别加8个孔，每孔1ml)，孵育1h。去除培养液，每孔加入一ml lmol/LHCl 20℃孵育30min，裂解细胞获得cGMP(该方法参考Cuppoletti等[6]提取肿瘤细胞cGMP的步骤);离心取上清液用cGMP ELISA试剂盒检测工程菌分泌的尿鸟苷素的生物活性 ......