131I标记适配子的优化研究及其稳定性的(3)
适配子JHIT2本质是一条含有61个核苷酸的单链DNA。之前已有多项关于125I(或131I)标记核苷酸链的研究[李丹等(2010年)、欧晓红等(2006年)、王荣福等(2004年)、刘生等(2004年)的研究]，但存在直接标记的标记效率低下和稳定性差或标记时需要连接螯合剂导致实验过程烦琐等缺点。本研究以本课题组前期实验中筛选出的适配子 JHIT2为基础，在其末端连接上功能基团FAM为131I标记提供位点，避免对适配子链进行直接标记而导致其结构的破坏，并提高标记效能和标记产物的稳定性。结果显示，氯氨T法和Iodogen法的标记率在反应时间4 min内较佳，可达90%以上;其中反应时间为1 min时，标记率最好，可达94%以上，远高于课题组前期实验中131I直接标记适配子的标记率(67.8±0.5)%和欧晓红等(2006年)用131I直接标记寡核苷酸链的标记率(37.6±2.4)%。另外，标记产物于PBS中24 h后放射性化学纯度仍大于90%，且低温可提高其稳定性，有利于该标记产物的保存和运输;标记产物无论是在低温或室温条件下置于含血清的培养基或纯血清时的稳定性均降低，这可能是血清中含有的核酸酶对适配子链的降解所致，但低温可抑制核酸酶的活性，从而减缓核酸链的降解，提高标记产物的稳定性。
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综上所述，在本研究中，我们通过在适配子的末端连接上功能基团FAM提供多个131I标记的位点，为131I的标记提供结构基础，然后分别用氯氨T法和Iodogen法对其进行131I标记，结果显示2种标记方法均能获得较高的标记率，且反应时间仅需1 min。标记产物在无血清条件中稳定性好，且低温可提高标记产物的稳定性。本研究为适配子介导的肝癌靶向放射显像和放射治疗奠定了基础。我们将在之后的研究中探讨131I标记的适配子进行靶向肝癌显像的可能性，必要时对适配子进行相应的稳定性修饰，提高其在血清中的稳定性，以便更好地应用于体内。
参 考 文 献
[1] 杨婷，曹素娥，焦举，邹琼，朱姝，张勇. 前列腺癌适配体的研究进展. 新医学， 2016，47(12)：789-796.
[2] Fang X， Tan W. Aptamers generated from cell-SELEX for molecular medicine： a chemical biology approach. Acc Chem Res， 2010，43(1)：48-57.
, 百拇医药
[3] Shangguan D， Li Y， Tang Z， Cao ZC， Chen HW， Mallikaratchy P， Sefah K， Yang CJ， Tan W. Aptamers evolved from live cells as effective molecular probes for cancer study. Proc Natl Acad Sci U S A， 2006，103(32)：11838-11843.
[4] Xu J， Teng IT， Zhang L， Delgado S， Champanhac C， Cansiz S， Wu C， Shan H， Tan W. Molecular recognition of human liver cancer cells using dna aptamers generated. PLoS One， 2015，10(5)：e125810-e125863.
[5] 杨敏，黄文山，查悦明，张桂雄，许杰华. 131I标记的肝癌核酸适配子在荷瘤裸鼠体内生物分布及显像. 中华肝脏外科手术学电子杂志， 2019，8(3)：260-264.
, 百拇医药
[6] Jacobson O， Weiss ID， Wang L， Wang Z， Yang X， Dewhurst A， Ma Y， Zhu G， Niu G， Kiesewetter DO， Vasdev N， Liang S H， Chen X. 18F-labeled single-stranded DNA aptamer for PET imaging of protein tyrosine kinase-7 expression. J Nucl Med， 2015，56(11)：1780-1785.
[7] Varmira K， Hosseinimehr SJ， Noaparast Z， Abedi SM. A HER2-targeted RNA aptamer molecule labeled with 99mTc for single-photon imaging in malignant tumors. Nucl Med Biol， 2013，40(8)：980-986.
(收稿日期：2019-06-22)
(本文編辑：洪悦民), 百拇医药(许杰华?张桂雄?杨敏?黄文山)
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综上所述，在本研究中，我们通过在适配子的末端连接上功能基团FAM提供多个131I标记的位点，为131I的标记提供结构基础，然后分别用氯氨T法和Iodogen法对其进行131I标记，结果显示2种标记方法均能获得较高的标记率，且反应时间仅需1 min。标记产物在无血清条件中稳定性好，且低温可提高标记产物的稳定性。本研究为适配子介导的肝癌靶向放射显像和放射治疗奠定了基础。我们将在之后的研究中探讨131I标记的适配子进行靶向肝癌显像的可能性，必要时对适配子进行相应的稳定性修饰，提高其在血清中的稳定性，以便更好地应用于体内。
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[1] 杨婷，曹素娥，焦举，邹琼，朱姝，张勇. 前列腺癌适配体的研究进展. 新医学， 2016，47(12)：789-796.
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[5] 杨敏，黄文山，查悦明，张桂雄，许杰华. 131I标记的肝癌核酸适配子在荷瘤裸鼠体内生物分布及显像. 中华肝脏外科手术学电子杂志， 2019，8(3)：260-264.
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(收稿日期：2019-06-22)
(本文編辑：洪悦民), 百拇医药(许杰华?张桂雄?杨敏?黄文山)