直至大部分细胞克隆数大于50时结束培养，取出6孔板，向各孔细胞中加入1 ml多聚甲醛固定1 h，磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤后再向细胞中加入500 μl Giemsa染色液，染色20 min，清水洗涤3次，对各组细胞克隆数进行计数。

    7. IRX1对SiHa细胞周期及凋亡影响检测

    采用流式细胞术。转染后的各组SiHa细胞以胰酶消化，加入含10%胎牛血清的DMEM培养液终止消化，离心收集细胞，调整细胞悬液密度为3×105/ml，加入预冷的70%的乙醇对细胞进行固定。离心弃上清，加入预冷的PBS 200 μl洗涤细胞2次。向细胞中加入20 μl RNA酶，置37 ℃下孵育30 min，再加入400 μl 碘化丙啶(PI)染液，置于冰上，避光反应15 min，流式细胞仪检测细胞周期比例。另收集转染后的各组SiHa细胞，加入100 μl结合缓冲液重悬细胞，再向细胞悬液中加入异硫氰酸荧光素Annexin V-FITC和PI各5 μl，混匀后避光孵育30 min，1 h内上流式细胞仪检测细胞凋亡情况。

    三、统计学处理

    采用SPSS 21.0对数据进行统计分析 ......