所有患者在前列腺穿刺前行前列腺按摩，自前列腺底部至尖部，侧叶外侧至中线;自上而下按压侧叶各3次，重复1次，最后按摩前列腺中央沟3次。采集初始尿液80 ～ 100 ml，置于-80℃冰箱保存。

    三、外泌体分离

    尿液样品在4℃解冻过夜，4℃、3000×g离心15 min以去除细胞和细胞碎片，取上清液至2支38.5 ml薄壁多聚异体离心管(美国Beckman Coulter)，天平配平之后，置超速离心机，4℃、100 000×g离心120 min，弃上清，用5 ml磷酸盐缓冲液(PBS)溶解沉淀。取1 ml ExoQuick-TC试剂与上一步得到的液体按照1∶5比例混合，在4℃孵育过夜后，4℃、1500×g离心30 min，弃上清再离心5 min去除残留液体。得到的外泌体用PBS溶解用于进一步实验或者置-80℃冰箱保存。

    四、总RNA提取、逆转录

    使用miRNeasy Mini试剂盒(德国Qiagen)提取尿液外泌体中总RNA ......