4. 核型鉴定

    iPSC传代6次后，融合度达到80%时，用0.2 μg/ml秋水仙碱在室温中处理细胞2 h，然后加入0.5 mmol/L EDTA消化并收集细胞，加入0.075 mol/L

    KCl溶液于37℃中处理20 min，然后用卡诺氏固定液(乙酸∶乙醇为1∶3)1 ml，在37℃中固定40 min。200 r/min离心5 min，加入1 ml卡诺式固定液重悬，吸取悬液滴在一干净的载玻片上，然后置于75℃烘箱中3 h。最后，滴加5%的Giemsa染液染色20 min，自然晾干后在Olympus显微镜下进行标准G带核型分析。

    5. 基因突变分析

    收集2×106 iPSC送往广州金域医学公司进行Sanger测序，并根据检测结果用Swiss模型预测iPSC的ClC-2蛋白的三级结构[11]。

    6. 免疫荧光染色

    当生长在爬片上的iPSC、NSC和星形胶质细胞融合度达60%时，进行免疫荧光染色，操作步骤如下，加入4%多聚甲醛固定15 min，用PBS清洗3遍，加入封闭破膜液(10%驴血清/0.25% Triton X-100溶液1∶9)后于室温中静置1 h ......