6.免疫组化染色

    取大鼠心脏组织制作石蜡切片，方法同上。将组织切片60℃烤片2 h，二甲苯脱蜡2 h，置于100%、95%、90%、80%的乙醇中復水，随后进行抗原修复、封闭，滴加用磷酸盐缓冲液(PBS)稀释的CD31兔源单克隆抗体(稀释比例为1∶100)，放入湿盒中，盖上盖子，置4℃冰箱过夜，第2日37℃孵育羊抗兔二抗0.5 h，PBS冲洗后加DAB显色液，苏木精染细胞核，60%、70%、80%、90%、95%、100%的乙醇脱水，中性树胶封片，置于显微镜下观察。CD31阳性细胞可被染成棕黄色，主要分布于梗死周边范围，梗死区少见。选择梗死周边区域，随机选取5个视野，计算CD31呈阳性的微血管数量，取平均值，即为微血管密度(MVD)。使用Image-Pro Plus 6. 0分析CD31阳性表达的光密度值(IOD)，IOD值越大代表阳性表达率越高。

    7.蛋白免疫印迹法

    从-80 ℃中取大鼠心脏组织，冰上研磨，离心取沉淀，加入裂解液提取肺组织蛋白，BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度，加入loading buffer，在EP管中混匀后置于沸水中煮沸5 min使蛋白变性。配置15 %的分离胶和5 %的浓缩胶进行SDS-PAGE电泳 ......