廖威?张昌林?李田

    【摘要】目的 通過研究人脐带间充质干细胞(hucMSCs)培养上清对M1型巨噬细胞的影响，探讨其作用机制。方法 选择小鼠单核巨噬细胞白血病细胞系(RAW264.7)巨噬细胞，将其种植于6孔板中，待汇合度约70%时进行处理。配制含50%hucMSCs培养上清的高糖DMEM条件培养基(CM)。巨噬细胞分成3组，blank组用2 ml高糖DMEM培养基培养24 h后更换2 ml高糖DMEM培养基培养24 h，DMEM组用2 ml含200 ng/ml脂多糖(LPS)的高糖DMEM培养基刺激24 h后更换2 ml高糖DMEM培养基培养24 h，CM组用2 ml含200 ng/ml LPS的高糖DMEM培养基刺激24 h后更换2 ml CM培养24 h。收集各组培养上清和巨噬细胞进行后续实验。利用PKH67染色剂进行CM中含细胞膜的成分染色(绿)，DAPI染色剂进行巨噬细胞胞核染色(蓝)，通过荧光显微镜观察巨噬细胞吞噬hucMSCs-CM中含细胞膜成分的情况。应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和流式细胞多因子分析技术分析促炎因子TNF-α和抗炎因子IL-10表达水平的改变。应用流式细胞术鉴定经处理后巨噬细胞表型。结果 在hucMSCs上清中，荧光显微镜下观察到RAW264.7吞噬CM中膜性成分且数量随时间增加而增加。在巨噬细胞极化实验中，RT-qPCR结果提示CM组抗炎因子IL-10 mRNA相对表达量低于DMEM组，且促炎因子TNF-α mRNA相对表达量低于blank组和DMEM组(P均< 0.05)。流式细胞术多因子分析结果中，CM组抗炎因子IL-10水平低于DMEM组，促炎因子TNF-α水平低于blank组和DMEM组(P均< 0.05)。流式细胞术鉴定结果中，CM处理的RAW264.7中的F4/80+CD206+CD86-巨噬细胞即M2型巨噬细胞比例高于DMEM组 ......