白藜芦醇对小鼠超排卵子质量的影响
阿尼古力·沙比尔?甄雅惠?付玉霞?盛娟?阿依努尔·斯迪克?李瑞岐【摘要】目的 研究白蘆藜醇(RSV)对小鼠超排卵效果及胚胎发育的影响。方法 以2~3月龄的CD-1小鼠为研究对象,在超排卵同时腹腔注射RSV(RSV组)或二甲基亚砜(DMSO组),观察RSV对小鼠超排卵子质量的影响。选取了小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)、卵巢和睾丸组织的模板DNA,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测沉默信息调节因子(SIRT1) mRNA在这三者中的表达情况。另外获取小鼠P1卵丘细胞,设置DMSO组、RSV(1 μmol/L)组和EX-527(SIRT1的抑制剂,10 μmol/L)组,使用荧光免疫染色检测各组SIRT的相对荧光强度、qRT-PCR检测各组的mtDNA相对表达量。结果 RSV组的卵裂率和囊胚率均高于DMSO组(P均 0.05),见表1、图1。
二、SIRT1 mRNA在生殖细胞组织内的表达情况
RSV的作用基因为SIRT1,为了检测该基因对生殖细胞的作用,本研究以SIRT1在MEF中的表达量为对照,检测SIRT1在卵巢和睾丸组织内相对于MEF的表达情况。结果显示,SIRT1 mRNA在MEF、卵巢和睾丸组织中的相对表达量比较差异有统计学意义(F = 1303.958,P < 0.001)。其中,SIRT1 mRNA的相对表达量在卵巢是MEF的15 ~ 25倍(P < 0.001),提示SIRT1在卵巢中可能有重要的生物学作用,见图2。
三、添加RSV对体外培养小鼠卵丘细胞SIRT1表达及mtDNA相对表达量的影响
为了观察RSV对卵丘细胞SIRT1表达的影响,本实验使用RSV处理P1代小鼠卵丘细胞48 h,
通过免疫染色对比SIRT1在RSV组和DMSO组中的表达情况。结果显示,添加RSV后可提高SIRT1在卵丘细胞中的表达(t = -16.913, P < 0.001),见图3A、B。进一步使用RSV和SIRT1抑制剂EX-527分别处理P1代小鼠卵丘细胞48 h,
然后检测各组的mtDNA的相对表达量,结果显示3组mtDNA相对表达量比较差异有统计学意义(F = 114.416 ......
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