激肽释放酶腺相关病毒载体的构建及对脐静脉内皮细胞功能的影响

http://www.100md.com 2006年12月1日 朱鹏立 阮景明 俞兆希 陈 慧 李体远

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     [摘 要] 目的 构建激肽释放酶(HK)腺相关病毒(AAV)载体，检测重组病毒感染脐静脉内皮细胞系(HUVEC)后HK基因和内皮功能相关基因表达的变化。方法 HK基因克隆人腺相关病毒载体质粒pAAV-MCS，和腺相关病毒包装质粒pAAV-RC、腺病毒辅助质粒pHelper共转染293细胞，包装成带有HK基因的重组腺相关病毒(rAAV-HK)。以rAAV-HK感染HUVEC。RT-PCR法检测HK基因、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、凋亡蛋白酶(caspase-3)、内皮素-1(ET-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、内皮素B₁受体以及缓激肽B₁受体、缓激肽B₂受体的mRNA转录变化。ELISA法测定HUVEC上清液和胞内HK的含量。结果 成功构建了rAAV-HK。rAAV-HK感染HUVEC后，实验组胞内HKmRNA转录(0.59±0.1 2)比空白组(0.26±0.05)明显增加(P1受体、缓激肽B₁受体、缓激肽B₂受体mRNA转录两组差异无统计学意义。结论 rAAV-HK病毒感染HUVEC后能高效表达HK，并促进HUVEC胞内eNOSmRNA转录，抑制caspase-3mRNA转录。提示导入HK基因能够改善内皮功能。

    [关键词] 激肽释放酶类；依赖病毒；内皮，血管

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