针刺对急性脑梗塞大鼠血浆cAMP与β－ＥＰ的影响
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[摘 要] 目的：探讨针刺治疗急性脑梗塞作用机理。方法：采用线栓法复制急性脑梗塞模型，运用放免技术，检测针刺前后血浆中cAMP和β-EP含量变化及其相关性。结果：造模后，急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP含量明显低于正常组，血浆中β-EP含量则显著升高。针刺后能使急性脑梗塞大鼠血浆中过低的cAMP含量明显升高，过高的β-EP含量显著降低，并趋于正常值。结论：针刺可能通过升高血浆中过低的cAMP含量和降低异常升高的β-EP含量而达到治疗目的。
[主题词] 环腺苷一磷酸/血液；猹材诜入 /血液；脑栓塞和血栓形成/针灸疗法
EffectsofAcupunctureon PlasmacAMP andβ-EPContentsin the Ratof Acute Cerebral Infarction
WuXuping,FengYi,LiuYouxiang,etal.(Hubei Collegeof TCM,Wuhan430061,China)
[Abstract] Purpose
Toapproachtomechanismsofacupuncturetreatmentforacutecerebralinfarct
ion.Methods ChangesofplasmacAMPand
β-EPcontentsbeforeandafteracupuncturewereinvestigatedbyimmunoassayint
heacutecerebralinfarctionm odelratdevelo pedbythreadligationmethod.Results
PlasmacAMPcontentintheratofacutecerebralinfarctionwassignificantlyl
owerandplasmaβ-EPlevel wassignificantlyhigherthan thatinthenormalrat,andafteracupunc
turetheplasmacAM Pcontentincreasedsignificantlyandthe
β-EPleveldecreasedsignificantly,tendingtothenormal.Conclusion
Acupuncturecuresacutecerebralinfarctionpossiblythroughincreasingthe
lowerplasmacA MPcontentanddecreasingthehigherβ-EPlevel.
[Keywords] cAMP/blood;BetaEndophin/blood;Cerebral Embolismand Throm bosis/acupther
急性脑梗塞是脑血管病中最常见者，约占75%[1]。近年来研究发现环磷腺苷酸(cAMP)和猹材诜入 (β-EP)与急性缺血性脑损伤的病理生理过程密切相关。本研究通过测定急性脑梗塞大鼠治疗前后血浆中cAMP和β-EP含量的变化，以探讨血浆中cAMP和β-EP在缺血性脑损伤发生发展过程中的病理生理意义，针刺治疗后二者的相互关系，为针刺防治急性脑梗塞提供实验依据。
1 材料和方法
1.1 实验动物分组
选用健康SD大鼠(250～280g)90只，雌雄各半。随机分为针刺组(40只)、模型组(40只)、正常组(10只)。模型组和针刺组再按不同时相随机分为4小组，即6h，24h，48h，72h，每小组10只。各组饲养方法与实验室环境等条件均相同。正常组无需任何处理，直接取全血样本；模型组造模后不予针刺，按不同时相采血；治疗组造模后行针刺，也按不同时相采血。
1.2 动物模型的制作
将大鼠经腹腔注射6%的水合氯醛(0.6ml/100g)后仰卧于恒温手术台上，切开右侧颈部皮肤，分离、结扎右侧颈总动脉、颈外动脉及其分支，分离右侧颈内动脉(ICA)，近端备线，远端放置动脉夹。于颈总动脉上距分叉0.5cm处切口，插入1.5号尼龙线(头端烤化呈光滑球状，直径达0.25mm左右，并具有一定的弹性和硬度)18～20mm，栓线进入ICA，穿过大脑中动脉(MCA)起始端至大脑前动脉近端，阻断MCA的所有血液来源，扎紧备线，剪去多余线头，缝合皮肤。在手术结束麻醉后，观察其神志症状，按照Kuluz神经缺损三级评分标准[2]，选择二级者，即行走时身体向偏瘫侧转圈者作为实验观察对象。
1.3 针刺方法
按照中国针灸学会实验针灸研究会1992年制定的《实验动物穴位定位标准》，取"水沟"、双侧"内关"、"后三里"穴。"水沟"向鼻中隔方向斜刺2mm，顺时针方向捻转9次，留针20min；"内关"直刺2～3mm，"后三里"直刺6～8mm，接通上海产G6805治疗仪，选用疏密波，强度为1mA(以肢体震颤为度)，频率为30Hz，每次通电20min。造模麻醉醒后即刻针刺1次，此后每日1次，按不同时相组，分别治疗1，2，3天。
1.4 样品制备
(1)cAMP的样品制备：取全血1.5ml加入预置有50靗乙二胺四乙酸二钠(EDTA·2Na)抗凝剂的试管内，摇匀后置冰浴中，1h内离心10min(2000r/min)，取上清液0.1ml移入试管，加入无水酒精2ml，振摇1min，静置5min后离心10min(3000r/min)，取上清液移入洗净烘干的青霉素小瓶内，剩余残渣加75%酒精1ml，振摇均匀以打碎块状物后再离心10min(3000r/min)，合并上清液于青霉素小瓶，烘干后4℃保存待测。
(2)β-EP的样品制备：另取全血1.5ml，加入预置有30靗抑肽酶、30靗EDTA 2Na抗凝剂的试管内，迅速经4℃低温离心10min(4000r/min)，取上清液移入EP管，于-20℃保存待测。
1.5 样品测定
测定cAMP所用的放免药盒由上海中医药大学同位素室提供；测定β-EP所用的放免药盒由上海第二军医大学神经生物学教研室提供。全部程序按药盒说明书进行。采用上海核福光电仪器有限公司生产的SN-682型放射免疫γ计数器检测。
2 结果
本实验所得数据，全部输入电子计算机进行统计学分析，采用组间配对"t"检验和相关性"r"分析。所得结果见表1、表2、图1。
表1 针刺对急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP含量的影响
表2 针刺对急性脑梗塞大鼠血浆中β-EP含量的影响
由表1可见，模型组血浆中cAMP含量明显低于正常组，随着时间的推移，其含量有小幅度的回升，但仍具有显著性差异；模型组血浆中β-EP含量明显高于正常组，差异具有非常显著性意义；针刺后，血浆中cAMP含量逐渐上升，并于72h基本恢复正常，与模型组比较，差异有显著性意义(P<0.05)；血浆中β-EP含量逐渐下降，并于72h基本恢复正常，与模型组比较，差异有非常显著性意义(24h，48h，72h组，P<0.01)。提示针刺可以明显提高急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP含量，可以降低急性脑梗塞大鼠血浆中猹 EP含量。
图1 针刺对急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP和β-EP相关性分析
由图1所知，针刺后急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP和β-EP呈负相关，经"r"分析，r＝-1，通过假设检验，呈显著负相关。
3 讨论
3.1 脑梗塞的基本病机为脑脉瘀阻，窍闭神匿，肢体失用。水沟为急救要穴，可开窍启闭。电针"水沟"穴可提高急性脑梗塞实验动物模型的颅底动脉压，提高脑内肾素活性和血管紧张素含量[3]；内关穴有宁心安神、主血脉的作用，可调整心肺功能，改善体循环，增加脑的血氧供应[4]；"足三里"可有效地防止和减少大量自由基对脑组织的损伤。内关、足三里分布于上、下肢主要神经干周围，电针的刺激使肌肉节律性收缩，有利于偏瘫肢体的功能恢复。
3.2 现代研究发现，cAMP和β-EP参与机体呼吸、循环、消化、神经及内分泌等多种生理功能和病理过程，尤与中枢神经系统关系密切，在缺血性脑损伤中的作用越来越受到国内外学者的关注。本研究结果显示，造模后，急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP明显下降，而β-EP明显升高。通过针刺，可以升高急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP含量，降低β-EP含量，并呈一种进行性良性调节趋势，至72h基本恢复至正常值，这与国内外报道一致[5,6]。提示早期针刺对急性脑梗塞的治疗有积极意义。
3.3 本研究还表明，cAMP与β-EP之间存在负相关。一方面，造模后，cAMP和β-EP的变化趋势呈负相关；另一方面，针刺后，cAMP和β-EP也呈负相关良性调节。cAMP与β-EP的负相关可能是通过以下几个途径：(1)β-EP抑制前列腺素E1(PGE1)增高腺苷酸环化酶的能力；(2)β-EP通过抑制神经元内腺苷酸环化酶活性，减少PGE1，加速合成cAMP；(3)β-EP影响多巴胺(DA)所引起的腺苷酸环化酶活性的增高，从而减少cAMP含量；(4)β-EP阻断细胞外液Ca2+内流及其与细胞内物质相结合而影响cAMP活性[7～9]。国内外研究表明，β-EP含量降低可减轻或缓解缺血性脑水肿的发生发展[10]，cAMP含量升高则可降低细胞内Ca2+功能，抑制肌醇磷脂代谢，导致血管平滑肌松弛[6]，而二者之间的相关作用则可放大其生物效应，增加有效脑血流量，加速血流速度，从而缓解急性脑梗塞的脑组织的缺血缺氧。因此，我们认为针刺可能通过对机体血浆中cAMP、β-EP的含量及二者之间的相互调控来实现对急性脑梗塞的治疗作用。
4 参考文献
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(收稿期：20011016，齐淑兰发稿), 百拇医药(吴绪平 冯 异 刘又香 王亚文)