人反义ＶＥＧＦ121ｃＤＮＡ表达质粒的构建及其对膀胱癌细胞增殖的影响

http://www.100md.com 2003年8月1日 金建军 王跃祥等

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     [摘要] 目的 构建人反义VEGF_l21cDNA真核表达质粒，研究反义基因治疗对膀胱癌细胞增殖的影响。方法 将VEGF_l21反向克隆人真核表达载体pcDNA₃中，酶切鉴定。用此真核表达重组质粒转染人膀胱癌细胞株T24，G418筛选获得阳性克隆，Rr—PCR法测定转染前后T24细胞中VEGF mRNA表达，ELISA法检测转染前后T24细胞中VEGF蛋白表达。利用MTT法、软琼脂克隆形成试验、流式细胞仪和电镜等检测转染前后T24细胞的生物学性状。结果 获得反义VEGF_l21cDNA质粒表达重组质粒。VEGF_l21反义RNA部分阻断了T24细胞中VEGF表达，转染后肿瘤细胞VEGFmRNA和VEGF蛋白表达都明显减少；转染后单个细胞的克隆形成能力明显减弱；形态学超微结构显示细胞器扩张和肿胀，核染色质边集，凝集成块，可见明显的凋亡改变。结论 成功构建了反义们VEG_l21cDNA真核表达质粒，转染该质粒可明显抑制膀胱癌细胞增殖，为膀胱癌的基因治疗提供了一定的实验依据。

    [关键词] 血管内皮生长因子； 反义cDNA； 构建； 膀胱癌； 增殖

    [中国图书馆分类法分类号] R 737.14

    http://www.100md.com/html/paper/0257-8131/2003/04/05.htm

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