骨髓间充质干细胞的克隆培养及其向心肌细胞的诱导分化
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[摘要] 目的 建立骨髓间充质干细胞(MMSC)的单细胞克隆，筛选具有心肌特异性分化潜能的c-kit+MMSC克隆，进行体外心肌诱导分化研究。方法 取成年雄性SD大鼠骨髓细胞，进行原代培养和单克隆培养。通过c—kit免疫细胞化学标记和RT-PCR检测，筛选出向心肌特异性分化的MM汇克隆。然后用5—氮杂胞苷诱导分化，RT-PCR检测诱导前后心肌特异性基因表达的变化。结果 骨髓中含有多种MM汇克隆，以不同形态和大小的成纤维细胞样克隆数目最多。较大的成纤维细胞样克隆和扁平多角形细胞克隆均表达c-kito用5-氮杂胞苷诱导后，表达Nkx2.5的c-kit+MMSC克隆的细胞形态和排列方式发生变化。诱导后2周，细胞变为短柱状，且平行排列；第3周，相邻细胞间形成明显的细胞连接；第4周，由多个细胞相互连接形成肌管样结构，并可观察到肌管的自发性搏动。心室肌特异性肌球蛋白轻链(MLC-2v)mRNA从第3周开始明显表达。结论 骨髓中含有多种干细胞克隆。筛选具有心肌特异性分化潜能的MMSC克隆并构建心肌干细胞库，将为临床干细胞移植治疗心肌梗死提供理想的干细胞来源。
[关键词] 骨髓间充质干细胞； 心肌干细胞； 细胞克隆； 心肌分化
[中国图书馆分类法分类号] Q 813.1+1，Q 813.5
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