点突变对结核分支杆菌ＫａｔＧ蛋白活性和结构的影响
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[摘要] 目的 探讨点突变对结核分支杆菌KatG蛋白过氧化氢—过氧化物酶活性和蛋白结构的影响，深入研究INH耐药的发生机制。方法 采用三步法PCR对KatG基因的4个位点进行定点诱变，在大肠埃希菌BL21体系中表达和纯化相应诱变蛋白，并测定其过氧化氢酶、过氧化物酶活性、二硫键的形成及荧光光谱变化，最后利用酵母细胞色素C氧化酶模型进一步探讨点突变对KatG蛋白过氧化氢—过氧化物酶活性和结构的影响。结果 完成KatG基因4个位点的诱变及相应诱变蛋白的表达和纯化。过氧化氢酶、过氧化物酶活性测定发现3个诱变蛋白[KatC(W321G)、KatC(R418Q)和KatG(A456S)]活性基本丧失，诱变蛋白KatG(S315T)活性也有明显下降。荧光光谱显示KatG(R418Q)和KatG(A456S)的荧光强度较野生型明显降低。4个点突变均不影响KatG蛋白间二硫键的形成。结论 所引入的4个突变可能对KatG蛋白的结构造成影响，从而导致KatG蛋白的功能即过氧化氢—过氧化物酶活性下降。[关键词] 结核分支杆菌； KatG； 过氧化氢—过氧化物酶； 荧光光谱； 酵母细胞色素C氧化酶[中国图书馆分类法分类号] R 378.9
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