定量检测ＣＣＬ20的竞争性内参照ＲＴ－ＰＣＲ的建立及其初步应用
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[摘要] 目的 建立检测趋化因子CC亚家族配体20(CCL20)表达水平的内参照定量逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)方法。方法 将人CCL20编码基因克隆到pbs-△ANK质粒中(PAL-2)，将一42bp的外源核苷酸片断插入到上述重组质粒的CCL20中间，构建内参照质粒PAL-2-IS。在该定量系统中以PAL-2—IS和PAL-2为模板，用CCL20的特异性引物扩增，根据扩增出的两个不同大小的条带的光密度扫描值对CCL20进行相对定量。结果 将PAL-2与已知不同系列浓度的RM.-2-IS以内参照竞争定量RT-PCR共扩增定量PAL-2浓度，PAL-2计算浓度与实际浓度无差异(P>0.05)。在同一细胞数量水平(105数量级)，内参照竞争定量RT—PCR检测表明：CCL20在L02、HepG2、Hepal、Hepa3中表达水平高于Hepa2，而在HepG2.2.15中最低。结论 建立了检测CCL20表达水平的内参照定量RT—PCR方法，该方法可用于细胞中CCL20不同表达水平的检测。
[关键词] 趋化因子CC亚家族配体20； 内参照； 定量； 竞争； 逆转录聚合酶链反应
[中国图书馆分类法分类号] R 392.1
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