高渗状态下肾脏ＣＯＸ2表达的基因调控
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[摘要] 目的 本研究旨在阐明核转录因子C/EBPp和NFkB是否协同作用影响高渗状态下COX2的基因表达。方法 体外培养肾髓间质细胞(RMICs)，通过病毒转导或质粒转染技术将体外构建的COX2基因突变载体转入培养细胞，经高渗培养不同时间后，采用免疫印迹、荧光素酶报告基因活性检测等方法观察培养细胞COX2蛋白表达及活性的改变，同时应用染色质免疫沉淀分析法观察COX2基因与C/EBPβ、NFkB结合能力的改变。结果 免疫印迹显示，高渗刺激能明显提高对照组COX2蛋白表达，应用突变序列bcBm阻断NFxB活性后COX2表达明显下降，应用突变序列C/EBPβ—P20阻断C/EBPβ亦能显著降低COX2表达，但同时运用突变序列C/EBPβ—P20和IkBm无法使COX2表达进一步下降。然而，将野生型、含NFkB或C/EBPβ结合位点突变的COX2启动子萤火虫荧光素酶报告基因的重组质粒转染至RMICs，高渗培养24 h后显示：高渗刺激能显著增加野生型组COX2荧光素酶的活性，NFkB位点突变无法阻断该作用，而C/EBPβ结合位点突变却能完全抑制COX2高活性。进一步应用染色质免疫沉淀分析研究显示，高渗刺激能显著增加NFkB(P65)或C/EBPβ与COX2基因的结合，并呈时间依赖性；NFkB结合位点突变不能消除高渗诱导的NFkB(P65)与COX2基因的结合增强，但在NFkB和C/EBPβ结合位点同时突变组该作用被阻断。结论 在NFkB活化COX2基因转录过程中需要另一个核转录因子C/EBPβ的参与，C/EBPβ途径在高渗诱导肾脏内髓间质细胞表达COX2过程中具有重要作用。
[关键词] 环加氧酶—2； 核转录因子kB； 核转录因子C/EBPβ； 高渗应激； 肾髓间质细胞
[中图分类号] Q 753
[文献标识码] A
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