噬菌体展示技术筛选ＤＮＡ错配修复蛋白ＭｕｔＳ高亲和性抗体

http://www.100md.com 2006年8月1日 刘 俊 全智勇 刘建华

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    [摘要] 目的 制备MutS的高亲和抗体，以有利于MutS的检测及应用。方法 利用IPTG的诱导作用，在E.coli中诱导表达目标蛋白MutS。利用亲和层析方法获得目标蛋白，并利用凝胶阻滞实验分析其活性。将MutS作为抗原，在Tomlinson抗体库中利用噬菌体展示技术来筛选MutS的高亲和力噬菌粒。将其转化到大肠杆菌后，诱导表达并通过亲和层析的方法来获得可溶性的抗体片段，并检测其亲和力。结果 纯化后的MutS具有识别、结合错配DNA双链的活性。ELISA分析表明，利用噬菌体展示技术可获得MutS高亲和力的噬菌粒。将其转化到大肠杆菌HB2151后，诱导表达并纯化到抗体片段，其亲和力为0.9x10⁸L/mol。结论 利用噬菌体展示技术筛选到MutS高亲和力的抗体。

    [关键词] 噬菌体展示； DNA错配修复蛋白MutS； 可溶性抗体片段

    [中图分类号] Q 81

    [文献标识码] A

    http://www.100md.com/html/paper/0257-8131/2006/04/29.htm

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