温胆汤对自发性高血压大鼠血液中PⅢNP、LN和HA水平影响的实验研究
摘要 目的：探讨温胆汤对自发性高血压大鼠(SHR)血液中Ⅲ型前胶原氨端肽(PⅢNP)、层粘蛋白(LN)、透明质酸(HA)水平的影响，并分析其可能的作用机制。方法：采用16周龄SHR，经温胆汤治疗，并与卡托普利(开博通)相对照，8周后，放射免疫法检测血清中PⅢNP、LN、HA水平，观察温胆汤对SHR心肌纤维化的影响。结果：24周龄SHR心肌胶原合成活跃，有心肌纤维化的形成；经化痰方温胆汤治疗后，血清PⅢNP、LN、HA均明显下降，与SHR对照组有显著性差异(P[1-2]，是以心脏间质成纤维细胞过度增殖和胶原过度沉积及异常分布为特征的心脏间质重构，也是导致各种心血管事件发生的重要原因。心肌纤维化是心功能由代偿期向失代偿期转变的关键，心肌纤维化的消退可恢复心肌组织和间质之间平衡，使僵硬度正常化，有利于心功能的改善。因此，防止与逆转高血压心肌纤维化已成为目前治疗高血压的重要目标之一，研究和逆转心肌纤维化具有重要意义。
本实验采用血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)类药物卡托普利(开博通)作为阳性对照组，化痰代表方药温胆汤作为治疗组，观察温胆汤对SHR血清中PⅢNP、LN、HA水平的影响，旨在揭示化痰法防治SHR心肌纤维化可能的作用机制。
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1 材料与动物
1.1 主要仪器及试剂：低温冷冻高速离心机，BECKMAN CS-15R型；放射免疫γ计数器，SN-682型；PⅢNP放射免疫试剂盒、LN放射免疫试剂盒、HA放射免疫试剂盒均购自北京北方生物技术研究所。
1.2 实验动物:16周龄SHR24只，雄性，体重235.2±11.5g；Waster大鼠(WKY)8只，雄性，体重222.6±12.3g，均为北京维通利华实验动物技术有限公司提供。
2 实验方法
2.1 动物分组：Waster大鼠(WKY)8只设为正常对照组(WKY)，16周龄SHR24只，随机分为三组：SHR对照组(SHR-C)、SHR卡托普利对照组(SHR-开)、温胆汤药物组(SHR-温)，每组各8只。
2.2 给药方法：温胆汤按原方用量，制成100%水煎液(每ml含生药1g)，按2ml/100g体重灌胃，2次/天；卡托普利按100mg/kg用注射用水稀释后按2m1/100g灌胃，1次/天，另给同等剂量注射用水1次，以保证每日与其它组同样的灌药次数。WKY组和SHR-C组大鼠灌胃同等体积的蒸馏水，2次/天。以上各组均连续给药8周。
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2.3 标本采集：治疗8周后断头处死大鼠，收集全血5ml，2000rpm离心5min，分离血清待测血液中PⅢNP、LN、HA含量水平。
2.4 PⅢNP、LN、HA水平的测定：采用放射免疫法检测，PⅢNP、LN、HA用放射免疫试剂盒，具体按试剂盒操作步骤进行。精密度：批内变异系数CV<10%；批间变异系数CV<15%。
2.5 统计学处理：采用SPSS10.0软件包进行数据统计分析，多组间均数比较采用单因素方差分析。
3 结果
结果如表1所示，SHR-C组大鼠血浆PⅢNP、LN和HA水平明显高于WKY组，说明SHR大鼠胶原合成明显增加。SHR-开组、SHR-温组PⅢNP、LN和HA水平明低于SHR-C组(P0.05)。在对HA水平影响方面，SHR-温组优于SHR-开组(P
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4 讨论
原发性高血压(Essential Hypertension，EH)是一种世界性的常见心血管疾病，可引起心、脑、肾等器官的损害及其相关疾病的发生和发展，严重危害人类身心健康。正确评估高血压病患者心脏间质纤维化的程度，能对疾病的预后及疗效判定提供依据[3]。纤维化血清学指标能较好地反应心肌纤维化的程度[4]。而PCⅢ(Ⅲ型前胶原)、HA、LN被认为是反映心肌纤维化、心脏组织胶原合成活跃程度的灵敏指标，并且心肌纤维化与心肌肥厚密切相关[5-6]。采用无创性心脏组织胶原合成心肌纤维化的检测，胶原血清标志物的检测是可以为临床提供心肌保护和心肌修复的药理学研究有用的方法[7]。
心肌胶原主要分Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原，Ⅲ型胶原是心肌细胞外基质的重要成分，它由成纤维细胞产生和分泌，主要聚合成细纤维网。Ⅲ型胶原在心肌中含量的改变对心脏的结构和功能有较大的影响。血清前胶原末端肽水平与心肌病检测所得的胶原面积具有良好的相关性，血清前胶原末端肽可作为评价心肌纤维化的有效监测指标，PⅢNP是PCⅢ合成过程中裂解的氨基端多肽，是心脏胶原纤维的主要成分，能特异地反映PCⅢ的合成和分解代谢水平，研究表明PⅢNP是一独特的心肌纤维化预报因子[8]。被广泛应用于心血管疾病的诊断和预报，同样在原发性高血压心肌纤维化研究中的应用也显示出其重要价值。
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本实验分别给以卡托普利和温胆汤治疗8周后，检测血清PⅢNP、HA、LN水平。结果显示SHR-C组的血清学指标PⅢNP、HA、LN含量均明显升高，与正常对照WKY组比较有显著性差异(P<0.01)，提示SHR心肌胶原纤维合成活跃，这构成了SHR心肌胶原纤维组织重构的重要基础，与国内外文献报道一致。治疗8周后，血清PⅢNP、LN、HA均显著下降，与SHR-C对照组有显著性差异。说明卡托普利、温胆汤均可抑制PⅢNP、HA、LN的合成。对于HA的影响：温胆汤抑制HA合成的作用优于卡托普利，且与正常对照组无差异。提示温胆汤有一定的抗MFs的作用。
心肌纤维化的机制较复杂，目前尚未完全阐释清楚。研究表明心肌纤维化是心肌胶原生成与降解失衡引起胶原异常蓄积的结果，但涉及一系列调控因素，如肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)、血管活性物质(如内皮素、儿茶酚胺、NO、前列腺素、缓激肽等)、细胞因子(如TGF-β、IGF-1等)、细胞内Ca2+、氧化应激、血流动力学等因素。有证据表明这些因素在心肌纤维化过程中均起了重要的作用。温胆汤能有效地降低PⅢNP、HA、LN水平的机制可能与上述调控因素有关，其确切机制尚需进一步研究。
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5 参考文献
[1]Weberk T，Brilla CG.Pathological hyertrophy and cardiac intersititum[J].Circulation，1991，83：1849.
[2]Weberk T，Brilla CG，Janicki TS.Myocardial fibrosis functional sig nificance and regulatory factors[J].Cardiovas Res，1993，27：341.
[3]荆志成，程显声.心脏胶原网络及病理学意义[J].中国循环杂志，1998，13(3)：187-188.
[4]Risteli J，Niemi S，Trivedi P，et al.Rapid equilibrium radioim munoassay for the a minoterminal propeptide of human type Ⅲ pro colladen[J].Clin Chem，1998，34(1)：715.
, 百拇医药
[5]邱国松，陈君柱，胡晓晟，等.高血压引起的左心室舒张功能障碍与心肌纤维化及转化生长因子β1的关系研究[J].中国循环杂志，2001，16：339-341.
[6]余强，高大中，殷跃辉，等.高血压左室肥厚患者组织纤维化的血清指标观察[J].中华心血管病杂志，1998，26：209-211.
[7]Lopez B，Gonzalez A，Varo N， et al.Biochemical assessment of myocardial fibrosis in hypertensive heart disease[J].Hypertension，2001，38(5)：1222-1226.
[8]Weber KT.Monitoring tissue repair and fibrosis from adistance[J].Circulation，1997，96(8)：2488-2492.
收稿日期 2006-12-20, 百拇医药(张国华 吕 琳)
本实验采用血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)类药物卡托普利(开博通)作为阳性对照组，化痰代表方药温胆汤作为治疗组，观察温胆汤对SHR血清中PⅢNP、LN、HA水平的影响，旨在揭示化痰法防治SHR心肌纤维化可能的作用机制。
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1 材料与动物
1.1 主要仪器及试剂：低温冷冻高速离心机，BECKMAN CS-15R型；放射免疫γ计数器，SN-682型；PⅢNP放射免疫试剂盒、LN放射免疫试剂盒、HA放射免疫试剂盒均购自北京北方生物技术研究所。
1.2 实验动物:16周龄SHR24只，雄性，体重235.2±11.5g；Waster大鼠(WKY)8只，雄性，体重222.6±12.3g，均为北京维通利华实验动物技术有限公司提供。
2 实验方法
2.1 动物分组：Waster大鼠(WKY)8只设为正常对照组(WKY)，16周龄SHR24只，随机分为三组：SHR对照组(SHR-C)、SHR卡托普利对照组(SHR-开)、温胆汤药物组(SHR-温)，每组各8只。
2.2 给药方法：温胆汤按原方用量，制成100%水煎液(每ml含生药1g)，按2ml/100g体重灌胃，2次/天；卡托普利按100mg/kg用注射用水稀释后按2m1/100g灌胃，1次/天，另给同等剂量注射用水1次，以保证每日与其它组同样的灌药次数。WKY组和SHR-C组大鼠灌胃同等体积的蒸馏水，2次/天。以上各组均连续给药8周。
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2.3 标本采集：治疗8周后断头处死大鼠，收集全血5ml，2000rpm离心5min，分离血清待测血液中PⅢNP、LN、HA含量水平。
2.4 PⅢNP、LN、HA水平的测定：采用放射免疫法检测，PⅢNP、LN、HA用放射免疫试剂盒，具体按试剂盒操作步骤进行。精密度：批内变异系数CV<10%；批间变异系数CV<15%。
2.5 统计学处理：采用SPSS10.0软件包进行数据统计分析，多组间均数比较采用单因素方差分析。
3 结果
结果如表1所示，SHR-C组大鼠血浆PⅢNP、LN和HA水平明显高于WKY组，说明SHR大鼠胶原合成明显增加。SHR-开组、SHR-温组PⅢNP、LN和HA水平明低于SHR-C组(P0.05)。在对HA水平影响方面，SHR-温组优于SHR-开组(P
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4 讨论
原发性高血压(Essential Hypertension，EH)是一种世界性的常见心血管疾病，可引起心、脑、肾等器官的损害及其相关疾病的发生和发展，严重危害人类身心健康。正确评估高血压病患者心脏间质纤维化的程度，能对疾病的预后及疗效判定提供依据[3]。纤维化血清学指标能较好地反应心肌纤维化的程度[4]。而PCⅢ(Ⅲ型前胶原)、HA、LN被认为是反映心肌纤维化、心脏组织胶原合成活跃程度的灵敏指标，并且心肌纤维化与心肌肥厚密切相关[5-6]。采用无创性心脏组织胶原合成心肌纤维化的检测，胶原血清标志物的检测是可以为临床提供心肌保护和心肌修复的药理学研究有用的方法[7]。
心肌胶原主要分Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原，Ⅲ型胶原是心肌细胞外基质的重要成分，它由成纤维细胞产生和分泌，主要聚合成细纤维网。Ⅲ型胶原在心肌中含量的改变对心脏的结构和功能有较大的影响。血清前胶原末端肽水平与心肌病检测所得的胶原面积具有良好的相关性，血清前胶原末端肽可作为评价心肌纤维化的有效监测指标，PⅢNP是PCⅢ合成过程中裂解的氨基端多肽，是心脏胶原纤维的主要成分，能特异地反映PCⅢ的合成和分解代谢水平，研究表明PⅢNP是一独特的心肌纤维化预报因子[8]。被广泛应用于心血管疾病的诊断和预报，同样在原发性高血压心肌纤维化研究中的应用也显示出其重要价值。
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本实验分别给以卡托普利和温胆汤治疗8周后，检测血清PⅢNP、HA、LN水平。结果显示SHR-C组的血清学指标PⅢNP、HA、LN含量均明显升高，与正常对照WKY组比较有显著性差异(P<0.01)，提示SHR心肌胶原纤维合成活跃，这构成了SHR心肌胶原纤维组织重构的重要基础，与国内外文献报道一致。治疗8周后，血清PⅢNP、LN、HA均显著下降，与SHR-C对照组有显著性差异。说明卡托普利、温胆汤均可抑制PⅢNP、HA、LN的合成。对于HA的影响：温胆汤抑制HA合成的作用优于卡托普利，且与正常对照组无差异。提示温胆汤有一定的抗MFs的作用。
心肌纤维化的机制较复杂，目前尚未完全阐释清楚。研究表明心肌纤维化是心肌胶原生成与降解失衡引起胶原异常蓄积的结果，但涉及一系列调控因素，如肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)、血管活性物质(如内皮素、儿茶酚胺、NO、前列腺素、缓激肽等)、细胞因子(如TGF-β、IGF-1等)、细胞内Ca2+、氧化应激、血流动力学等因素。有证据表明这些因素在心肌纤维化过程中均起了重要的作用。温胆汤能有效地降低PⅢNP、HA、LN水平的机制可能与上述调控因素有关，其确切机制尚需进一步研究。
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5 参考文献
[1]Weberk T，Brilla CG.Pathological hyertrophy and cardiac intersititum[J].Circulation，1991，83：1849.
[2]Weberk T，Brilla CG，Janicki TS.Myocardial fibrosis functional sig nificance and regulatory factors[J].Cardiovas Res，1993，27：341.
[3]荆志成，程显声.心脏胶原网络及病理学意义[J].中国循环杂志，1998，13(3)：187-188.
[4]Risteli J，Niemi S，Trivedi P，et al.Rapid equilibrium radioim munoassay for the a minoterminal propeptide of human type Ⅲ pro colladen[J].Clin Chem，1998，34(1)：715.
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[5]邱国松，陈君柱，胡晓晟，等.高血压引起的左心室舒张功能障碍与心肌纤维化及转化生长因子β1的关系研究[J].中国循环杂志，2001，16：339-341.
[6]余强，高大中，殷跃辉，等.高血压左室肥厚患者组织纤维化的血清指标观察[J].中华心血管病杂志，1998，26：209-211.
[7]Lopez B，Gonzalez A，Varo N， et al.Biochemical assessment of myocardial fibrosis in hypertensive heart disease[J].Hypertension，2001，38(5)：1222-1226.
[8]Weber KT.Monitoring tissue repair and fibrosis from adistance[J].Circulation，1997，96(8)：2488-2492.
收稿日期 2006-12-20, 百拇医药(张国华 吕 琳)