类风关巴布剂穴位贴敷对关节炎模型大鼠滑膜细胞P53、Bck-2、NF-κβ及其分泌的IL-1β、T(1)
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关键词 类风湿性关节炎 穴位贴敷 雷公藤 大鼠 细胞凋亡
类风湿性关节炎(RA)是慢性全身性自身免疫性疾病。其病理基础为关节滑膜的过度增生，病因不明，发病机制不清，临床表现复杂多样。本实验通过对关节炎模型(CIA)大鼠不同组合穴位贴敷类风关巴布剂，观察其对大鼠滑膜细胞凋亡的影响，并初步探讨经络腧穴在其中的作用，为临床用药提供实验依据。
1 实验材料
1.1 动物：Wistar大鼠，清洁级健康雄性，100只，体重120±15g，购于上海斯莱克实验动物有限责任公司，正常饲养。
1.2 药物与试剂：雷公藤、白花蛇、乳香、没药等；乙醇、明胶、甘油、聚丙烯酸钠、氮酮、无纺布、聚乙烯薄膜；牛Ⅱ型胶原(Chondrex公司，美国)，完全弗氏佐剂(Sigma公司，美国)，IL-1β ELISA kit(Biosource公司，美国)，TNF-α ELISA kit (Biosource公司，美国)，Bcl-2、P53、NF-κβ(Santa Cruz Biotechnology,inc，美国)，多聚赖氨酸玻片100张，EiVision+ PolymerHRP(Ms/Rb) IHC kit 6ml。
1.3 仪器：显微镜OLYMPUS(日本)，低温高速离心机 BECKMEN(美国)，酶标仪Bio-rad680(美国)。
2 实验方法
2.1 类风关巴布剂的组成及制作方法：雷公藤、白花蛇、乳香、没药等共12味中药，按固定剂量配伍(其中雷公藤占总药量的28%)，晒干，研粉，过20目筛，用80%乙醇渗漉提取，然后过滤取液，经低温低压(50℃，-0.8个大气压)蒸馏去乙醇后得浸膏，将浸膏按一定比例加入事先配制的巴布剂基质(主要成份为明胶、甘油、聚丙烯酸钠等)中，并加入0.5%的促渗剂(氮酮)及一定比例的乳化剂及防腐剂等，充分溶合，均匀涂于无纺布上，覆盖聚乙烯薄膜，切成3cm×3cm 的方块(重量1g)，密封包装，阴凉处储存备用。
2.2 造模和分组：随机从100只大鼠中选出10只为正常对照，其余90只用于造模，参照文献[1]方法配制成Ⅱ型胶原乳剂。注射方法：于大鼠背部及尾根分5点行皮内注射，每点0.1ml，总量0.5ml(含1mg 牛Ⅱ型胶原) ......
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