通络止痛胶囊对佐剂性关节炎大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α的调节
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摘要 目的：观察通络止痛胶囊对佐剂性关节炎(AA)大鼠血清白细胞介素-1(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。方法：将50只Wistar大鼠随机分为正常对照组、空白模型组和治疗组(高剂量组、中剂量组、低剂量组)，每组10只，用ELISE测定AA大鼠外周血细胞因子IL-1β、IL-6和放射免疫法测定TNF-α的表达情况。结果：与正常组相比，AA大鼠外周血中IL-1β、IL-6、TNF-α显著升高(P<0.01)，通络止痛胶囊低、中、高剂量组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著低于模型组，尤以高剂量组最显著(P<0.01)。结论：不同剂量的通络止痛胶囊均能够降低AA大鼠血中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量，尤以高剂量作用显著，提示通络止痛胶囊可能通过降低IL-1β、IL-6和TNF-α，抑制AA大鼠骨与软骨的破坏，减轻滑膜炎症。
关键词 佐剂性关节炎 IL-1β IL-6 TNF-α 通络止痛胶囊 大鼠
类风湿关节炎(RA)是一种以关节滑膜慢性炎症为特征的自身免疫性疾病，目前认为RA与自身免疫因素、遗传、感染、心理因素有关，其中炎性介质和细胞因子在RA的炎症及关节损伤中起关键性作用。我们临床应用通络止痛胶囊治疗RA，取得满意疗效，本实验通过观察该药对佐剂性关节炎大鼠白细胞介素-1(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响，探讨中药复方防治佐剂性关节炎的作用机制，为临床立法组方提供药理学实验依据。
1 材料
1.1 动物：4～6周龄清洁级Wistar大鼠，体重200±20g，华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。
1.2 药品与试剂：通络止痛胶囊(山西正中药业生产，批号：20040626)；完全弗氏佐剂(CFA，)；IL-1β、IL-6(ELISE法)、TNF-α(放射免疫法)试剂盒及试验试剂均由深圳达科为生物技术有限公司提供。
1.3 仪器：全自动酶标仪，3550型，美国BIO-RAD公司产品。TNF仪器：DFM-6型多管放射免疫计数器，合肥众成机电技术公司生产。
2 方法
2.1 佐剂性关节炎(adjuvant arthritis，AA)大鼠模型复制：依随机原则将50只Wistar大鼠分为正常对照组、空白模型组和治疗组(高剂量组、中剂量组、低剂量组)，每组10只，适应性喂养1周后，空白模型组和治疗组采用完全弗氏佐剂0.1ml注射于大鼠左后足跖皮内。正常对照组于相同部位注射生理盐水0.1ml作为对照。
2.2 给药方法：造模后第12天开始给药，通络止痛胶囊治疗组按高剂量组2g/kg、中剂量组1g/kg、低剂量组0.5g/kg给药，分每日2次给药，连续给药18天，其他两组予同体积生理盐水，用药期间常规饲养。
2.3 检测方法：各组最后一次灌药2小时后眼球取血5ml，离心取上清液作为检测标本。IL-1β、IL-6采用双抗夹心ELISA法，具体操作按测试药盒说明书要求进行，于酶标仪450nm处读数。TNF-α的测定用放射免疫法，具体操作按测试药盒说明书要求进行。
2.4 统计学处理：应用SPSS11.5软件对数据进行统计学处理与分析，各指标用均数±标准差(x±s)表示，两组治疗前后采用t检验，组间比较采用单因素方差分析。
3 结果与正常组相比，AA大鼠外周血中IL-1β、IL-6、TNF-α显著升高(P<0.01)，通络止痛胶囊低、中、高剂量组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著低于模型组，尤以高剂量组最显著(P<0.01)。血清IL-1β、IL-6、TNF-α检测结果见表1。
4 讨论佐剂性关节炎动物模型是细菌学家Freund于上世纪50年代创立，又称福氏佐剂关节炎，造模多采用大鼠。研究表明，AA大鼠的关节组织病理学及血中变化改变与人RA类似[1-2]；，且存在明显的免疫功能异常[3]，是一种典型的免疫性炎症模型，是人类类风湿关节炎经典病理模型之一，适合于研究类风湿性关节炎的发病机制和评价抗关节炎药物的作用。该法成熟可靠，操作简便，被大量引用。本实验中，空白模型组和治疗组注射CFA2～3小时出现注射侧原发性肿胀；注射后第3天，大鼠出现急性炎症反应：活动不利，倦怠，进食减少，注射部位红、肿、痛；第11~15天开始出现全身广泛性炎症，多关节红、肿、痛，倦怠乏力加重，进食减少，足部活动明显受限。与文献报道相符，提示造模成功。
现普遍认为，IL-1、TNF-a是RA发病机理中居中心地位的促炎性因子，具有诱导炎症、酶的释放、纤维细胞增生及组织损伤的作用；IL-6也是RA关节炎症中主要的炎症介质，主要诱导免疫球蛋白的产生及急性期蛋白的形成，增强IL-1、TNF-a的效应[4]，放大对关节的损害作用[5]，并诱导其他细胞因子如IL-1、IL-2的产生并发挥致病作用[6]；IL-6异常表达和失调是RA的典型特征，是病程进展的重要病理因子。IL-1，IL-6，TNF-α被称为“前炎症因子”，三者之间互相作用。TNF-α既可中和自身前炎症细胞反应，还可调节IL-1β的表达，对IL-1、IL-6的增多与减少起中枢调节作用。故有人认为TNF-α启动了RA细胞因子的级联反应(cytokine cascade)[7]。RA患者血清及关节液中可检测到大量的IL-1、TNF-α，针对阻断二者产生、含量、效应所设计的实验治疗也证明是有效的[8]。使用抗TNF-α单抗或多肽可减轻关节炎症状，表明TNF是RA有效的治疗靶基因[9]。本文的研究结果表明，与正常组相比，AA大鼠外周血中IL-1β、IL-6、TNF-α显著升高，提示IL-1β、IL-6和TNF-α介导RA的炎症反应。
通络止痛胶囊是侯丽萍主任医师根据《温病条辨》加减木防已汤、宣痹汤等，结合清末民初老中医石广济先生的临床经验加减化裁而来，由防已、薏苡仁、黄柏、滑石粉、连翘、半夏、豨莶草、苦参、百部等组成，临床研究表明具有良好的抗炎止痛、调节免疫系统及副作用小的特点，能尽快控制病情，明显缓解症状，对湿热痹效果显著[10]。本方辛凉解肌表之热，辛淡渗在里之湿，俾表邪从气化而散，里邪从小便而驱，上行肺气，通水之上源，气行则水亦行；中调脾胃，运水之枢纽，气化则湿亦化；下开水道，疏水之出路，湿去则热亦去，恰合湿热痹之病机。湿热既去，经络通畅，通则不痛，故疾病向愈，临床疗效显著。本试验结果表明：不同剂量的通络止痛胶囊均能够降低AA大鼠血中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量，尤以高剂量作用显著，提示通络止痛胶囊可能通对过降低IL-1β、IL-6和TNF-α，抑制AA大鼠骨与软骨的破坏，减轻滑膜炎症。
5 参考文献
[1]叶日乔,祁文,黄有荣.补阳还五汤对佐剂性大鼠关节炎病理形态学的影响[J].中医正骨,2004,16(3):11-12 ......
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