加热时间对温莪术中莪术醇和牻牛儿酮含量的影响
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摘要 目的：考察加热时间对温莪术中有效成分莪术醇和牻牛儿酮含量的影响。方法：采用高效液相色谱法测定加热0.5h、1.0 h、2.0h所得饮片莪术醇和牻牛儿酮含量，并用统计学方法分析差异显著性。结果：煮沸1.0h饮片莪术醇含量较煮沸0.5h和2.0h莪术醇含量高，差异有统计学意义；煮沸2.0h的饮片牻牛儿酮含量较其他二组略高，但差异无统计学意义。结论：加热时间对温莪术有效成分莪术醇和牻牛儿酮含量有一定影响，产地加工时以蒸煮1h为宜。
关键词 温莪术 加热时间 莪术醇 牻牛儿酮
莪术的来源为姜科植物蓬莪术Curcuma phaeocaulis Val.、广西莪术Curcuma kwangsiensis S.G.Lee et C.F.Ling或温郁金Curcuma wenyujin Y.H.Chen et C.Ling的干燥根茎[1]。后者习称“温莪术”，主产于浙江温州，是浙江省著名的道地药材，具有破血行气、消积止痛之功效，主要成分为挥发油和姜黄素两大类。挥发油中主含莪术醇、莪术二酮、牻牛儿酮、β-榄香烯等成分，具有抗肿瘤、抗血栓、抗菌、抗病毒、保肝等活性[2-3]。温莪术于冬季茎叶枯萎后采挖，洗净，煮或蒸至透心，晒干或低温干燥后除去须根和杂质。由于加工时蒸或煮时间长短不一，仅凭经验，对药材质量无法准确控制，且加热时间对药材成分的影响也未见报道，鉴于此，笔者选取鲜莪术块茎分别煮沸0.5、1、2h，干燥切片，考察加热时间对主要成分莪术醇和牻牛儿酮含量的影响，为选择加工工艺提供参考。
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1 仪器与试药
1.1 仪器：Agilent 1200高效液相色谱系统(四元泵、自动进样器、VWD检测器)；Agilent-Chemstation色谱工作站；超声处理器(USC-502，上海波龙电子设备有限公司)。
1.2 对照品：莪术醇对照品(中国药品生物制品检定所，批号100185-200506，含量测定用)，牻牛儿酮对照品(中国药品生物制品检定所，批号111665-200902，98.80%，含量测定用)。
1.3 试剂：甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。
1.4 样品来源与加工方法：温莪术样品取自温郁金GAP种植基地瑞安市陶山镇沙洲村，由舟山市食品药品检验所郑国平副主任中药师鉴定为温郁金Curcuma wenyujin Y.H.Chen et C.Ling的根茎，于12月下旬采挖，选取直径4～5cm，长6～7cm中等块头根茎洗净后，每份样品分为A、B、C三份，分别置沸水中煮0.5h、1h、2h，低温干燥，切片，粉碎，过四号筛作为供试品。
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2 方法与结果
2.1 溶液的制备：分述如下。
2.1.1 对照品溶液制备：分别精密称取莪术醇对照品9.18mg和牻牛儿酮对照品(含量98.8%)8.96mg，置10ml容量瓶中，加甲醇溶解，并至刻度，摇匀作为对照品储备液。精密吸取1ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作对照品溶液。
2.1.2 供试品溶液制备：分别取供试品约1.0g，精密称定，置50ml锥型瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理40min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，滤液用0.45μm滤膜过滤，即得。
2.2 色谱条件和线性范围考察：依利特Hypersil ODS2 C18柱，甲醇-水(68∶32)为流动相，流速1.0ml/min，检测波长220nm，柱温为25℃，进样量10μl。精密吸取对照品储备液分别按1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128稀释，进样10μl，测得峰面积积分值，以对照品的浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，得莪术醇和牻牛儿酮回归方程分别为Y莪术醇=33.7902X+1.7340，相关系数r =0.9997；Y牻牛儿酮=25.2202X+2.1321，相关系数r =0.9998， 结果表明莪术醇进样量在0.0717μg～2.2950μg之间，牻牛儿酮在0.0692μg～2.2131μg之间与峰面积积分值呈良好的线性关系。
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2.3 精密度试验：精密吸取对照品溶液10μl，按上述实验条件，连续进样5 次，测定峰面积，结果莪术醇RSD =1.16%、牻牛儿酮RSD=0.87。
2.4 稳定性试验：精密吸取对照品溶液，按上述方法和条件，在0、2、4、8、12、16小时各进样一次，共进样6次，测得其峰面积积分值，结果表明莪术醇和牻牛儿酮在16h 内稳定，RSD分别为1.64%和 1.28%。
2.5 重复性试验：取同一样品1.0g，精密称定，共取6 份，按上述方法制备供试液和上述条件进样测定，得莪术醇RSD= 2.46%，牻牛儿酮RSD=1.93%，实验结果表明，本方法重复性良好。
2.6 加样回收试验：精密称取已测知含量的样品1.0g，精密称定，共取6 份，分别置具塞锥形瓶中，各精密加入对照品溶液1 ml，再精密加入50%甲醇25ml，超声提取40min，取出放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，过滤，按上述方法和条件测定，结果莪术醇平均回收率98.54%，RSD=2.17%,牻牛儿酮平均回收率99.38%，RSD=1.74%。
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2.7 含量测定：按上述方法对不同加热时间的样品进行莪术醇和牻牛儿酮含量测定，结果见表1。煮沸1h饮片莪术醇含量最高，莪术醇含量在0.5h、1h和2h三种加热时间差异有统计学意义(P<0.01)；煮沸2h饮片牻牛儿酮含量略高，牻牛儿酮含量在0.5h、1h和2h三种加热时间差异无统计学意义(P>0.05)。
3 讨论
温莪术传统产地加工蒸或煮后自然干燥的方法已沿用数百年，均为药农民间作坊式加工，蒸煮的时间和程度各不一致，质量自然难于控制。笔者考察了三种饮片的外观质量，温莪术煮沸0.5h细胞组织结构和淀粉已固化、饮片断面呈灰黄绿色，煮沸1h已基本透心、饮片断面呈灰棕绿色，煮沸2h已烂熟，饮片横断面呈棕褐色至灰褐色。研究结果表明，加热时间对莪术醇和牻牛儿酮含量有一定影响，从三种饮片莪术醇和牻牛儿酮含量测定结果看，以煮沸1h莪术醇和牻牛儿酮含量相对较高，且莪术醇含量差异有统计学意义(P<0.01)，从缩短工序和节能方面考虑，温莪术产地加工以煮沸1h为宜，但应根据温莪术块头大小作适当调整。
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《中国药典》(2005版)温莪术质量控制以测定挥发油含量为指标，挥发油中的主要活性成分是莪术醇、莪术二酮、牻牛儿酮、β-榄香烯等，有报道[4-5]用莪术醇或牻牛儿酮含量测定作为几种含中药莪术复方制剂的质量控制指标，但莪术醇在高温条件下可以和莪术二酮发生互变异构，而牻牛儿酮在高温条件下也能转变为β-榄烯酮[6]，为了检测温莪术加工时受热时间对莪术醇和牻牛儿酮的影响，避免样品再次受热，使检测结果真实和准确，故不采用水蒸汽蒸馏法提取挥发油而是直接甲醇超声提取测定。同时挑选直径4～5cm、长约6～7cm中等块头温莪术新鲜根茎作为试验药材，使实验更有可比性。莪术醇和牻牛儿酮对照品溶液在200～400nm扫描，综合考察了莪术醇和牻牛儿酮吸收波长后，最后选择220nm作为检测波长，两峰分离度符合要求。
4 参考文献
[1] 药典委员会.《中国药典》(一部)[M].北京：中国医药科技出版社，2010：257-258.
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[2]李敏.中药规范化生产与管理(GAP)方法及技术[M].北京：中国医药科技出版社，2004：709-727.
[3]李爱琴，胡兰军，邓远辉，等.温莪术挥发油的成分[J].中草药，2001，32(9)：782.
[4]娄月芬，陆锦芳，张健.用气相色谱法测定复方莪术微囊中莪术醇的含量[J].药学服务与研究，2007，7(1)：70-71.
[5]何秀英，章建民，何娟. HPLC法测定清肌瘤胶囊中牻牛儿酮的含量[J].中草药，2006，37(7)：1023-1024.
[6]成晓静，刘华刚，廖月英，等.三中莪术不同部位挥发油成分比较[J].中药材，2009，32(10)：1551-1553.
收稿日期 2011-01-05, 百拇医药(苏孝共 林崇良 蔡进章 孙忠敏)