徐 静 黄竹燕 叶夷露 刘丹丹 潘蓓蓓 俞月萍 张 琦#

    1 温州医科大学 浙江 温州 325035

    2 杭州医学院 浙江 杭州 310053

    3 浙江大学医学院附属第二医院 浙江 杭州 310009

    黄连解毒汤提取物对原代神经元氧糖剥夺再灌注损伤后5-脂氧酶活性的影响*

    徐 静1，2黄竹燕3叶夷露2刘丹丹2潘蓓蓓3俞月萍2张 琦1，2#

    1 温州医科大学 浙江 温州 325035

    2 杭州医学院 浙江 杭州 310053

    3 浙江大学医学院附属第二医院 浙江 杭州 310009

    黄连解毒汤 原代神经元氧糖剥夺 再灌注损伤 5-脂氧酶 半胱氨酰白三烯 大鼠

    脑缺血是严重危害人类健康的神经系统疾病。5-脂氧酶(5-LOX)是催化花生四烯酸生成白三烯(LTs)的关键酶。大量研究证实，5-LOX及其代谢产物半胱氨酰白三烯(CysLTs)介导脑缺血后炎症反应，5-LOX抑制剂和CysLTs受体拮抗剂对脑缺血损伤具有保护作用[1-2]，表明5-LOX/CysLTs通路参与脑缺血再灌注损伤的病理生理过程。

    黄连解毒汤(HJD)是清热解毒的经典方剂。国内外研究表明HJD传统水煎剂对体内、外脑缺血损伤均具有保护作用[3]。本研究采用大孔树脂吸附法分离制备获得50%乙醇提取物HJDEE50，观察HJDEE50对大鼠原代皮质神经元糖氧剥夺(OGD)再灌注损伤的保护作用及对5-LOX活性的影响。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物：SPF级新生SD大鼠(24h内)由上海斯莱克实验动物有限公司提供[实验动物合格证号:SCXK(沪)2012-0002]。

    1.2 主要试剂与仪器:栀子苷、黄芩苷、盐酸小檗碱和盐酸巴马汀对照品购自中国药品生物制品检定所；汉黄芩素、汉黄芩苷和黄芩素对照品购自上海泽衡生物技术有限公司。连二亚硫酸钠(Na2S2O4)和四甲基偶氮唑盐(MTT)购自Sigma公司；Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒购自南京凯基生物科技发展有限公司；兔抗多克隆5-LOX抗体购自Santa cruz公司；CysLTs酶联免疫吸附试剂盒购自美国Cayman公司。高效液相色谱仪(Lumtech K501双泵，德国)，紫外可变波长检测器(Lumtech K2501，德国)，CO2培养箱(HF151，香港力康)，酶标仪(Mul tiskan MK3，美国)，流式细胞检测仪(Beckman，美国)。

    1.3 药物制备和含量测定:黄连、黄芩、黄柏、栀子由华东医药股份有限公司提供并经鉴定 ......