洪芳滕龙何建成#

    1 上海中医药大学 上海 201203

    2 浙江医院 浙江 杭州 310013

    帕金森病(PD)是中老年人常见的神经系统变性疾病，左旋多巴(L-dopa)是治疗PD最有效的药物，但长期应用可引起诸多运动并发症[1]，其中最突出的是左旋多巴诱导异动症(LID)。复方地黄方是我们挖掘中医药理论并经临床证明治疗PD及LID有效的中药复方。帕金森病异动症的发生发展与多巴胺D1、D2受体密切相关，而复方地黄方对LID有明显的缓解作用[2-3]。本次实验运用Western Blot方法研究了各组大鼠纹状体多巴胺D1、D2受体的表达，并观察了神经行为学变化，以深入探讨它们在LID状态中的变化以及复方地黄方的影响。

    1 材料和方法

    1.1 动物：SD大鼠，100只，SPF级，雄性，体重180～200g，来源并饲养于上海中医药大学实验动物中心[SCXK(沪)2012-0002]，许可证号：[SYXK(沪)2014-0008]，自动光-暗控制(LD12∶12，即07：00～19：00光照，19：00～07：00暗置)，相对湿度60%～65%，恒温23±2℃，动物摄食饮水自由。

    1.2 试剂：左旋多巴干粉(批号：192K1885)，苄丝肼(批号：BCBB8323)，6-羟基多巴胺(6-OHDA)，阿扑吗啡(APO)，抗坏血酸，均为美国Sigma公司产品；兔源性D1抗体，兔源性D2抗体，均为美国Abcam公司产品；β-Actin，为美国CST公司产品；Marker，为美国Thermo公司产品；山羊抗兔二抗，Western及IP细胞裂解液，SDSPAGE凝胶配制试剂盒，SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)，均为碧云天公司产品。

    1.3 药物：复方地黄方的组成包括熟地黄、白芍、珍珠母、丹参、全蝎等。汤药按既定工艺煎煮，由上海雷允上药材有限公司代加工，浓度为5.18g/ml。用量根据孙瑞元[4]标准体重大鼠每日用量方法计算。标准体重大鼠每日用量计算公式为DB=DA×KB/KA[DA：标准体重成人每日用量；KB：大鼠剂量折算系数(7)；KA：成人剂量折算系数(388)]。即大鼠每日用量DB＝DA×7/388。

    1.4 仪器：大鼠脑立体定位仪(RWD-68003型)，为深圳瑞沃德生命科技有限公司；WesternBlot电泳及转膜装置，为美国Bio-Rad公司；超速离心机(LE80K型)，为Beckman公司产品。

    1.5 LID大鼠模型制备：PD模型采用Ungerstedt[5]等所创立的经典、公认的方法 ......